경증, 중등도 및 중증 여드름 환자를 대상으로 한 비중재적 변환 연구 (VBE00011)

건강한 참가자

경증 여드름

중등도 여드름

심각한 여드름

여드름 병변 수

얼굴에 있는 총 병변 수, 염증성 병변(구진과 농포), 비염증성 병변(열린 면포와 닫힌 면포)을 계수합니다. 코를 포함한 얼굴의 모든 병변을 계수해야 합니다.

결절낭성 병변(결절과 낭종)의 계수는 별도로 보고되며, 염증성 또는 비염증성 병변 계수에 포함되지 않습니다.

연구자 전반적 평가 (IGA) 척도

안면 여드름의 전반적인 중증도는 5점 IGA 척도(표 6)를 사용하여 평가됩니다(15). 각 등급은 관찰자 간 변동성을 최소화하는 독특하고 임상적으로 의미 있는 형태학적 설명으로 정의됩니다.

IGA 중증도 점수 평가는 IGA 평가자로 자격을 갖춘 현장 직원만 수행해야 합니다. 연구자 또는 대리자는 연구 기간 동안 연구 프로토콜에 제공된 IGA 척도를 사용해야 합니다.

환자 보고 결과 측정

다양한 여드름 심각도가 삶의 질에 미치는 영향을 평가하기 위해, 참가자들은 Skindex-29와 여드름 특이적 삶의 질(Acne-QoL)이라는 2개의 삶의 질(QoL) 설문지를 작성하도록 요청받을 것입니다.

Skindex-29 설문지는 피부 질환이 환자의 삶의 질에 미치는 영향을 평가하기 위한 검증된 건강 관련 삶의 질 자가 보고 설문지입니다(17). Skindex-29는 3개의 영역(증상, 정서, 기능)으로 나뉜 30개의 항목으로 구성되어 있습니다. 각 항목은 1에서 5까지의 5점 리커트 척도로 점수가 매겨집니다. 점수는 100으로 표준화되며, 점수가 낮을수록 더 높은 수준의 QoL을 나타냅니다.

Acne-QoL은 얼굴 여드름이 있는 참가자들의 삶의 질을 평가하기 위한 검증된 건강 관련 삶의 질 자가 보고 설문지입니다(16). Acne-QoL은 자아 인식, 역할-사회적, 역할-정서적 및 여드름 증상이라는 4개의 영역으로 구성된 19개의 항목으로 구성되어 있습니다. 각 항목은 점수가 매겨집니다

얼굴 사진

조사관 또는 지정 대리인이 Canfield Facial Image Photography Device를 사용하여 참가자의 얼굴 디지털 사진을 촬영합니다. 사진은 표준화된 조건에서 촬영됩니다.

이미지는 Canfield Facial Image Photography Device 소프트웨어를 사용하여 캡처, 확인 및 업로드되며, 이 소프트웨어는 자동으로 체크섬을 생성하고, 암호화하며, 패키징하여 Canfield Clinic에서 호스팅하는 안전하고 검증된 규정 준수 웹 서버로 데이터를 전송합니다.

비식별화된 이미지는 각 참가자의 피부 상태를 평가하고 AI 기반 도구가 여드름 심각도를 도출하기 위한 입력 데이터로 사용됩니다.

이미지에서 여드름 심각도를 평가하기 위한 AI 기반 방법의 적용

이미지는 여드름 병변 수와 중증도 등급을 개발하고 개선하기 위해 실험적 AI 기술로 분석될 것입니다.

딥러닝 기반 방법을 사용하여 다양한 범주의 여드름 병변을 자동으로 감지하고 각 범주의 병변 수를 정량화하여 여드름 중증도를 평가할 것입니다. 딥러닝 모델은 피부과 전문의가 주석을 단 실제 경계 상자 레이블이 있는 데이터셋으로 훈련되어, 염증성 병변(구진, 농포, 결절 및 낭종), 비염증성 병변(개방성 면포 및 폐쇄성 면포) 및 기타(예: 흉터, 멜라스마 및 모반)와 같은 각 병변 유형을 식별하고 분류할 수 있게 될 것입니다. 연구용 얼굴 이미지는 Canfield 얼굴 이미지 촬영 장치를 사용하여 촬영되어, 강력한 모델 성능을 위한 고품질의 표준화된 입력을 보장합니다. 훈련된 모델은 테스트 이미지에 대한 병변 분류와 함께 경계 상자를 출력하여, 병변 수를 기반으로 한 여드름 중증도의 상세하고 객관적인 평가를 제공할 것입니다.

면역원성 평가

1. 형광 세포 분석기를 사용한 표면 결합(SB) 분석법을 통해, 혈청 항체가 살아있는 C. acnes 세균의 세포 표면에 결합하는 효율을 측정합니다. 2. 옵소닌포식살균(OPK) 분석법을 사용하여, 항체가 C. acnes 세균에 대한 옵소닌화를 유도하는 능력을 평가합니다. 결합된 항체는 세균에 대항하는 면역 세포를 동원 및 활성화시켜, 세균 세포 수를 감소시킵니다. 3. 양 적혈구 공동용혈 중화 분석법을 통해, 중화능을 가진 재조합 C. acnes CAMP2 폴리펩타이드(CAMP2) 특이 항체의 혈청학적 역가를 측정합니다. 4. 항원 특이적 항체 역가를 측정하여, C. acnes(예: C. acnes 유형 IA1 [NCTC737], IB [KPA171202])에 유도된 체액성 면역 반응을 추가적으로 탐구합니다. IgG, IgA 역가 및 IgG 아형 분포를 측정합니다.

면역원성 평가

5. 항체 의존적 보체 침착 역가는 C. acnes 특이적 Ig가 고전 경로를 통해 보체 시스템을 활성화시키는 능력을 문서화합니다. 검사된 혈청 샘플의 경우, 이 방법은 유세포 분석법을 사용하여 살아있는 C. acnes 박테리아 상에서 항체가 유도한 보체 성분 C3b/iC3b의 모집 및 침착을 측정하는 것으로 구성됩니다. 6. C. acnes 항원에 대한 세포 매개 면역, 전혈 배양 상등액의 사이토카인 평가: 전혈의 사이토카인 반응은 멀티플렉스 비드 어레이 분석법 또는 MSD ECL 기반 분석법 중 하나로 측정될 것입니다. 7. 말초 혈액 단핵 세포(PBMCs)의 면역 표현형 분석: 자극 후 유세포 분석법에 의한 T 세포 프로파일링. 참가자로부터 분리된 PBMCs는 해동되어 적절한 시약과 함께 배양된 후, 활성화된 T 세포 시그니처를 결정하기 위해 필요에 따라 BD 분석기, 스펙트럼 유세포 분석 및/또는 CyTOF를 사용하여 유세포 분석법으로 평가될 것입니다.

면역원성 평가

8. 참가자의 혈청에서 말초혈액 사이토카인 농도를 멀티플렉스 비드 어레이 분석법이나 MSD ECL 기반 분석법 또는 NULISA나 OLINK와 같은 적절한 단백질체학 프로파일링 플랫폼을 통해 측정할 예정입니다.

9. 전장 유전체 분석을 위해, 각 참가자로부터 채취한 혈액에서 분리한 말초혈액단핵세포(PBMC)에서 DNA를 추출할 것입니다. 이 DNA는 Infinium(Illumina)와 같은 전장 유전체 유전형 분석 어레이를 사용한 유전 분석에 활용될 것입니다.

메타지놈 및 메타전사체 평가

미생물 균주, 마이크로바이옴 구성 및 전사 활성을 특성화하기 위해 참가자의 이마와 뺨에서 피부 면봉을 채취합니다. 시퀀싱 분석을 위해 면봉의 물질을 떼어내어 DNA/RNA 쉴드에 담그고 핵산 추출 전 -80°C에 보관합니다. 미생물 분리는 4.6절에 설명된 절차에 따라 수행됩니다. 마이크로바이옴 메타지노믹 프로파일링(분류학적 프로파일, 상대적 풍부도, 다양성, 풍부함) 및 분리균주의 앰플리콘 시퀀싱(C. acnes 단일 유전자좌 서열 유형)과 같은 분석이 모낭 추출물의 유사 분석과 함께 수행될 수 있습니다. 수집된 미생물 물질에 대한 메타전사체학적 분석도 함께 수행됩니다. 수집된 샘플은 하류 분석 시험 전에 각 재료 유형별 모범 사례에 따라 현장에서 처리 및 보관됩니다.

공간 및 단일 세포 RNA 시퀀싱

피부 생검은 임상 직원이 적절한 배지(예: RPMI, PBS 또는 포르말린)에 보관하고 4°C로 유지하여 A*STAR로의 운송을 기다립니다. 여드름 미세환경의 구성요소를 연구하기 위해 피부 생검은 최선의 관행에 따라 준비되고 분석되며, 공간 및/또는 단일 세포 RNAseq에 대한 제조사의 프로토콜과 일치합니다. 데이터는 공급업체의 파이프라인을 사용하여 전처리됩니다. 정규화, 통합, 차원 축소, 주석 및 차등 발현 유전자 검출을 포함한 다운스트림 분석을 위해, 결과 행렬은 Seurat 또는 Monocle과 같은 R 또는 Python 패키지 또는 공급업체별 프로그램을 사용하여 처리됩니다.

피부 표면 물질 평가 또는 대사 및 단백체학 평가

피부 테이프 스트립에서 세라마이드, 지방산, 트리글리세라이드를 포함한 소분자 및 대형 지질 또는 피부 표면 단백질 발현을 검출하기 위해 대사체학 또는 단백질체학과 같은 피부 표면 물질 평가가 수행될 것입니다. 피부 테이프 물질은 유기 용매로 추출되어 고처리량 대사체학 측정을 위해 이중 컬럼 액체 크로마토그래피-삼중 사중극자 질량 분석기에 주입됩니다. 마찬가지로, 피부 테이프 물질은 LC-MS/MS 분석 전에 단백질체학 분석을 위해 추출될 수 있습니다. 참가자 그룹 클러스터링을 구별하고 이러한 차이를 주도하는 주요 대사물질 또는 단백질을 식별하기 위해 다변량 분석이 수행될 것입니다.

미생물 분리

피부 표면 및/또는 모낭 개구부에서 미생물을 분리하는 작업은 자동화 및/또는 표준 선택적 배양 및 도말 기술을 사용하여 수행됩니다. 특히 관심 있는 종으로서 주로 C. acnes 균주를 대상으로 하는 조건을 사용할 것입니다. Staphylococcus spp.와 같은 다른 균주도 유사한 조건에서 성장할 수 있으며, 이 또한 분리되어 연구를 위해 보관될 것입니다. 대표적인 분리 균주는 유전체 시퀀싱(일루미나)을 거쳐 유전체 조립이 이루어지며, 이는 병독성/백신 표적과 같은 유전자 분석 및 계통형 분석을 위해 사용될 것입니다.