Microplastics in otitis media met effusiemateriaal

Dit onderzoek was prospectief gepland. Met ethische goedkeuring werden patiënten die gedurende ten minste drie maanden een bilaterale OME of een eenzijdige OME gedurende ten minste negen maanden volgden, aan het onderzoek deelgenomen. Patiënten met een craniofaciale anomalie, een gespleten gehemelte en een voorgeschiedenis van eerdere ooroperaties werden uitgesloten. Ze werden geopereerd als paracentese en beademingsbuisimplementatie (VTI). Van hen en hun ouders werd een formulier voor geïnformeerde toestemming verkregen.

Operatie: Chirurgische indicatie werd gemaakt op basis van ziekteduur en/of gehoorverlies. Patiënten werden onder algemene verdoving geopereerd. Paracentese werd uitgevoerd vanuit het postero-inferieure kwadrant van het trommelvlies. Glu-materiaal werd opgevangen in de zuigbuis en onmiddellijk overgebracht naar glazen buizen (Figuur 1). Hiervoor werden een glazen injectiespuit en 0,9% serum fysiologisch gebruikt. Monsters werden afzonderlijk van het rechter- en linkeroor verzonden. De bepaling van microplastics werd uitgevoerd in het Environmental Engineering Labaratory van de Faculteit Ingenieurswetenschappen.

Bepalingsmethode voor microplastics: toegepast volgens Prada et. al rapport (11). Fragmenten, behalve bloedstolsels, werden gewassen met een straal gefilterd gedestilleerd water in de laminaire stromingskap om eventuele oppervlakteverontreiniging te verwijderen en alle monsters werden in gesloten glazen kolven gewogen tot op 0,1 mg nauwkeurig (Sartorius, Entris, Duitsland). Een eerder ontwikkelde en geteste methode voor het bereiden van biologische monsters voor Nile Red-kleuring werd gevolgd [16]: (i) incubatie gedurende 24 uur bij 60 °C (Oasis™ Benchtop IR CO2 Incubator, Caron, OH, VS) in 30 ml van 10% KOH (w/v, ≥85%, Labchem, PA, VS); (ii) na 24 uur werd de temperatuur verhoogd tot het kookpunt en werd de oplossing onmiddellijk gefiltreerd op een glasvezelfiltermembraan (1.2 µm porie, Whatman® GF/C, Little Chalfont, Buckinghamshire, VK) gemonteerd in een vacuümglasfiltratiesysteem; (iii) 100 ml kokend gefilterd gedestilleerd water werd gefilterd om zepen te verwijderen; (iv) 10 ml aceton werd gedurende 10 minuten aan de beker toegevoegd; (v) nog eens 10 ml aceton werd gefiltreerd om lipofiele materie te verwijderen; (vi) 0,5-1 ml 0,01 mg ml-1 Nile Red (microscopiekwaliteit, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, VS) werd gedurende 5 minuten aan de beker toegevoegd; (vii) 50 ml gedestilleerd water werd gefilterd; en (viii) opgeslagen in glazen petrischalen die gedurende een week in kartonnen dozen worden bewaard om te drogen bij kamertemperatuur (20 °C).

Maatregelen ter beheersing van contaminatie In alle fasen werden strikte maatregelen ter beheersing van de contaminatie uitgevoerd, namelijk door: (i) het dragen van katoenen laboratoriumjassen en schone handschoenen; (ii) werken in de laminaire stromingskap in een cleanroom, onderhouden door reinigen met ethanol in papieren handdoeken, gevolgd door reinigen met een stofdoek die stofdeeltjes en papiervezels aantrekt en opvangt; (iii) het filteren van alle oplossingen (porie van 1,2 µm, Whatman® GF/C); (iv) het gebruik van glas- en metaalmaterialen; (v) het ontsmetten van glasmaterialen door ze gedurende ten minste 30 minuten onder te dompelen in 10% HNO3 en te spoelen met gedestilleerd water; (vi) het bovendien reinigen van glazen petrischalen met een N2-luchtstraal; (vii) het branden van glazen microvezelfiltermembranen bij 450 °C gedurende 3 uur; (viii) het reinigen van de beker van het filtratiesysteem tussen de monsters door deze gedurende 15 seconden in een oplossing (eerste batch: aceton, tweede batch: 30% HNO3) te dompelen, gevolgd door onderdompeling in gedestilleerd water; (ix) monstercontainers zoveel mogelijk gesloten houden met glazen deksels, doppen of aluminiumfolie; en (x) het uitvoeren van procedurele blanco's (oplossingen zonder monsters die zijn blootgesteld aan monstervoorbereidingsprocedures) voor elke batch. Elke monsters werden drie keer getest ter verificatie. Daarnaast werden microplastics in psychisch serum geëvalueerd om besmetting te voorkomen.