Mikroplast i mellemørebetændelse med effusionsmateriale

Denne undersøgelse var planlagt fremadrettet. Med etisk godkendelse blev patienter, der blev fulgt af bilateral OME i mindst tre måneder eller ensidig OME i mindst 9 måneder, tilmeldt undersøgelsen. Patienter med kraniofacial anomali, ganespalte, som tidligere har haft øreoperationer, blev udelukket. De blev opereret som paracentese og ventilationsrørimplementering (VTI). Der blev indhentet en informeret samtykkeerklæring fra dem og deres forældre.

Operation: Kirurgisk indikation blev foretaget i henhold til sygdomsvarighed og/eller høretab. Patienterne blev opereret under generel anæstesi. Paracentese blev lavet fra posteroinferior kvadrant af trommehinden. Glu-materiale blev fanget i sugerøret og overført til glasrør med det samme (figur 1). Til dette blev der brugt glassprøjte og 0,9% serumfysiologisk. Prøver blev sendt fra højre og venstre øre separat. Mikroplastik-bestemmelse blev foretaget i Miljøteknisk Laboratorium ved Det Tekniske Fakultet.

Mikroplastbestemmelsesmetode: Den blev anvendt ifølge Prada et. al rapport (11). Fragmenter, undtagen blodpropper, blev vasket med en stråle af filtreret destilleret vand inde i den laminære strømningshætte for at fjerne enhver overfladekontamination, og alle prøver blev vejet inde i lukkede glaskolber til nærmeste 0,1 mg (Sartorius, Entris, Tyskland). En metode til fremstilling af biologiske prøver til Nile Red-farvning, tidligere udviklet og testet, blev fulgt [16]: (i) inkubation i 24 timer ved 60 °C (Oasis™ Benchtop IR CO2 Incubator, Caron, OH, USA) i 30 ml af 10 % KOH (vægt/volumen, ≥85 %, Labchem, PA, USA); (ii) efter 24 timer blev temperaturen hævet til kogepunktet, og opløsningen blev straks filtreret på glasfiberfiltermembran (1,2) µm pore, Whatman® GF/C, Little Chalfont, Buckinghamshire, UK) monteret i et vakuumglasfiltreringssystem; (iii) 100 ml kogende filtreret destilleret vand blev filtreret for at fjerne sæber; (iv) 10 ml acetone blev tilsat til koppen i 10 minutter; (v) yderligere 10 ml acetone blev filtreret for at fjerne lipofilt stof; (vi) 0,5-1 ml 0,01 mg ml-1 Nile Red (mikroskopikvalitet, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) blev tilsat til koppen i 5 minutter; (vii) 50 ml destilleret vand blev filtreret; og (viii) opbevaret i petriskåle af glas opbevaret i papkasser i en uge til tørre ved stuetemperatur (20 °C).

Forureningskontrolforanstaltninger Der blev gennemført strenge kontamineringskontrolforanstaltninger i alle faser, nemlig ved: (i) at bære bomuldslaboratoriefrakker og rene handsker; (ii) arbejde i den laminære strømningshætte i et rent rum, vedligeholdt ved rengøring med ethanol i papirhåndklæder efterfulgt af rengøring med en støvsuger, der tiltrækker og fanger støvpartikler og papirfibre; (iii) filtrering af alle opløsninger (1,2 µm pore, Whatman® GF/C); (iv) anvendelse af glas- og metalmaterialer; (v) dekontaminering af glasmaterialer ved at nedsænke dem i 10 % HNO3 i mindst 30 minutter og skylning med destilleret vand; (vi) yderligere rengøring af petriskåle af glas med en N2-luftstråle; (vii) brænding af glasmikrofiberfiltermembraner ved 450 °C i 3 timer; (viii) rensning af koppen af ​​filtreringssystemet mellem prøverne ved at dyppe den i 15 s i en opløsning (første batch: acetone, anden batch: 30 % HNO3) efterfulgt af dypning i destilleret vand; (ix) holde prøvebeholdere lukket så meget som muligt med glaslåg, hætter eller aluminiumsfolie; og (x) at udføre proceduremæssige blindprøver (opløsninger uden prøver udsat for prøveforberedelsesprocedurer) for hver batch. Hver prøve blev testet tre gange til verifikation. Derudover blev mikroplastik evalueret i serum psykologisk for at forhindre kontaminering.