Prevalentie van verschillende fenotypes van haptoglobine bij patiënten met COPD-frequente exacerbators versus niet-exacerbators
Chronische obstructieve longziekte (COPD) is een veel voorkomende ziekte bij rokers. COPD heeft een langzaam verslechterend beloop, onderbroken door exacerbaties - acute gebeurtenissen die worden gekenmerkt door toenemende kortademigheid en bedorven sputum. Exacerbaties van COPD kunnen worden versneld door verschillende factoren, meestal infecties.
De frequentie van exacerbaties neemt over het algemeen toe met een afnemende longfunctie. Sommige patiënten met COPD ervaren echter consequent een hoger aantal exacerbaties dan andere, ondanks een vergelijkbare ernst van COPD. Dit heeft ertoe geleid dat onderzoekers het bestaan van een afzonderlijke subgroep van "frequente exacerbators" postuleren. Recent werk heeft ook de aandacht gevestigd op een subgroep van patiënten die opmerkelijk weinig exacerbaties ervaren ondanks een aanzienlijk verminderde longfunctie. Zorgvuldige karakterisering van deze beide extreme subgroepen van COPD kan extra inzicht bieden in de reden waarom bepaalde patiënten vatbaar zijn voor frequente exacerbaties, terwijl andere relatief beschermd blijven.
Haptoglobine (Hp) is een eiwit dat voornamelijk door de lever wordt geproduceerd. Bij mensen bestaan er twee soorten genen voor Hp (1 en 2) met mogelijke combinaties van deze twee genen: 1-1, 1-2 of 2-2. Aangenomen wordt dat het Hp 2-gen is ontstaan uit het Hp 1-gen in de menselijke evolutie. Vervolgens heeft de prevalentie van het Hp 2-allel zich over de hele wereld verspreid, waarschijnlijk als gevolg van zijn vermogen om een selectief voordeel te bieden tegen infectieziekten. De combinatie Hp 1-2 komt veel voor. In de meeste westerse landen is de prevalentie van de Hp-genotypes 16% Hp 1-1, 36% Hp 2-2 en 48% Hp 2-1.
Er is aangetoond dat de Hp-genvorm verband houdt met ziekte. Specifiek is gevonden dat Hp-fenotypes de neiging tot atherosclerose bij diabetespatiënten beïnvloeden. Er zijn verschillende onderzoeken geweest die suggereren dat het Hp 2-2-fenotype wordt geassocieerd met een bescherming tegen infectieuze complicaties.
Met het oog op het belang van luchtweginfecties bij COPD-exacerbaties, en gezien de opgedane kennis van haptoglobine-subtypen met betrekking tot de neiging tot infectie, stellen we voor om te onderzoeken of haptoglobine-subtypen in verband staan met het "frequente exacerbator"-fenotype van COPD. We veronderstellen dat, aangezien mensen met Hp 1-1 vatbaarder zijn voor infectie, de frequentie van het Hp 1-1-fenotype hoger zal zijn bij "frequente exacerbators" van COPD dan bij "niet-exacerbators".
Om onze hypothese te testen, stellen we voor om het Hp-fenotype te bepalen in twee groepen COPD-patiënten: een met frequente exacerbaties en een zonder exacerbaties, en de relatieve frequentie van het 1-1-fenotype in de twee groepen te vergelijken.
Studie Overzicht
Toestand
Conditie
Gedetailleerde beschrijving
Laboratoriumprocedures:
Overzicht:
Er wordt 3 ml serum verzameld en bewaard bij 4 graden Celsius (maximaal een week) of minus 20 graden Celsius tot levering aan het laboratorium.
Haptoglobine fenotype zal worden bepaald op de afdeling Anatomie en Celbiologie, de B. Rappaport Faculteit der Geneeskunde, 1 Efron st. Haifa, Israël. De methode voor fenotypine Hp is eiwitgelelektroforese.
Serum dat overblijft, wordt gedurende 5 jaar ingevroren bij min 70 graden Celsius in een vriezerrek speciaal voor het Pulmonology Institute in het Serology Laboratory in Carmel Medical Center voor toekomstige analyse van eiwitten.
Haptoglobine-elektroforese:
Het Haptoglobine-eiwit wordt gescheiden op basis van grootte. Hp 2-2 is de grootste en daarom werd verwacht dat hij de kortste afstand in de gel zou afleggen en Hp 1-1 is de kleinste en zou daarom het verst in de gel reizen. De gel die gebruikt is voor de elektroforese was een Polyacrylamide gel. Er worden twee concentraties gebruikt om laad- en scheidingsomstandigheden te bieden.
De onderste gel is een polyacrilamidegel die 10,8 ml 1M Tris pH 8,8, 3,55 ml acrylamide 40%, 11,5 ml dH2O, 225 μl ammoniumpersulfaat (APS) 10% en 18 μl tetramethylethyleendiamine (TEMED) bevat. De bovenste gel is een polyacrylamidegel die 937,5 μl 1M Tris pH 6,8, 787,5 μl acrylamide 40%, 5,7 ml dH2O, 75 μl APS 10% en 7,5 μl TEMED bevat.
De onderste gel wordt tussen twee glasplaten gegoten en 30 minuten laten stollen. Zodra de onderste gel is gestold, wordt de bovenste gel erop gegoten en 30 minuten gelaten om te stollen. Wells-kam superieur aan de bovenste gel geplaatst om wells te creëren voor het plaatsen van monsters.
Het monster voor elke patiënt wordt bereid met 10 μl serum, 2 μl hemoglobine en 12 μl van een in de handel verkrijgbare laadbuffer. Het monster wordt vervolgens voorzichtig met een pipet in de voorbereide putjes geplaatst. 4 wells zijn gereserveerd voor 3 controles van Hp 2-2, Hp 2-1 en Hp 1-1 mediaal gevolgd door een lege well.
De Western-blotanalyse wordt uitgevoerd in een Protean II xi-cel door BIO-RAD. Het apparaat wordt in elkaar gezet en er wordt een loopbuffer voor elektroforese toegevoegd. De lopende buffer bevat 15,1 g Tris, 72 g Glycine en 1000 ml DDW. De lopende buffer werd vervolgens in het bovenste en onderste reservoir van de Protean II geplaatst. De elektroforese werd uitgevoerd bij 240 Volt gedurende 3 uur.
Zodra de monsters klaar zijn met draaien, wordt de gel tussen de glasplaten verwijderd. De gel werd vervolgens gekleurd met behulp van een kleurkleuringsoplossing. De oplossing werd gemaakt met behulp van 40 mg 3,3'-5,5'-tetramethylbenzidine en 20 ml methanol. Dit liet men gedurende 15 minuten mengen. Vervolgens wordt 2 ml dimethylsulfoxide toegevoegd en 5 min gemengd. Daarna werd 40 ml azijnzuur 5% toegevoegd dat is gemaakt van 2 ml AA en 38 ml DDW. Vervolgens wordt 40 mg kaliumfericyanide opgelost in 4 ml DDW toegevoegd. Tenslotte wordt 600 μl H2O2 aan de kleuroplossing toegevoegd en gedurende 10 minuten gemengd.
Zodra de kleuroplossing klaar is, wordt de gel in een schaal van 22 cm bij 32 cm geplaatst en wordt de kleuroplossing over de gel gegoten. De schaal wordt vervolgens gedurende 25 minuten op een shaker geplaatst. Als de gel eenmaal is gekleurd, is deze leesbaar. Desalniettemin wordt de gel gefotografeerd voor beeldverbetering en gegevensopslag. De gel wordt uit het bakje gehaald en in een Image Analyzer (Imagequant LAS 4000) voor beeldvorming of in een Canon powershot sx40 hs digitale camera geplaatst.
Gegevenstabel:
De gegevens - het Haptoglobine-fenotype met bijbehorende ID's - worden verzameld en getabelleerd in een Microsoft Excel-tabel.
Studietype
Inschrijving (Werkelijk)
Contacten en locaties
Studie Locaties
-
-
-
Haifa, Israël, 34362
- Pulmonology Institute, Carmel Medical Center
-
-
Deelname Criteria
Geschiktheidscriteria
Leeftijden die in aanmerking komen voor studie
Accepteert gezonde vrijwilligers
Geslachten die in aanmerking komen voor studie
Bemonsteringsmethode
Studie Bevolking
Beschrijving
Inclusiecriteria:
- Patiënten met de diagnose COPD volgens de GOLD-richtlijnen1
- Leeftijd 40-100 jaar
- Rookgeschiedenis van > 10 pakjesjaren
- Spirometrie consistent met luchtwegobstructie (FEV1/FVC-ratio < 70%)
- Matige tot ernstige luchtwegobstructie (FEV1<60%)
- Ten minste twee episodes van acute exacerbaties in de voorgaande 12 maanden, of geen exacerbaties in de voorgaande 24 maanden. (Acute exacerbaties worden gedefinieerd als verergerende symptomen die behandeling met systemische steroïden (oraal of parenteraal) of antibiotica, een bezoek aan de spoedeisende hulp en/of opname in een ziekenhuis vereisen. Gebeurtenissen gescheiden door ten minste 21 dagen worden beschouwd als afzonderlijke gebeurtenissen van exacerbatie.)
Uitsluitingscriteria:
Patiënten met een voorgeschiedenis van een van de volgende aandoeningen worden uitgesloten van het onderzoek:
- Actieve tuberculose
- Longfibrose of asbestose
- Orgaan transplantatie
- Chirurgie voor het verkleinen van het longvolume
- Eerdere long- of kwabresectie.
Studie plan
Hoe is de studie opgezet?
Ontwerpdetails
Cohorten en interventies
Groep / Cohort |
|---|
|
COPD Frequente exacerbators
COPD-patiënten die in de afgelopen 12 maanden ten minste twee episodes van acute exacerbaties hebben doorgemaakt.
(Acute exacerbaties worden gedefinieerd als verergerende symptomen die behandeling met systemische steroïden (oraal of parenteraal) of antibiotica, een bezoek aan de spoedeisende hulp en/of opname in een ziekenhuis vereisen.
Gebeurtenissen gescheiden door ten minste 21 dagen worden beschouwd als afzonderlijke gebeurtenissen van exacerbatie.)
|
|
COPD niet-exacerbators
COPD-patiënten die in de afgelopen 24 maanden geen exacerbaties hebben gehad.
(Acute exacerbaties worden gedefinieerd als verergerende symptomen die behandeling met systemische steroïden (oraal of parenteraal) of antibiotica, een bezoek aan de spoedeisende hulp en/of opname in een ziekenhuis vereisen.
Gebeurtenissen gescheiden door ten minste 21 dagen worden beschouwd als afzonderlijke gebeurtenissen van exacerbatie.)
|
Wat meet het onderzoek?
Primaire uitkomstmaten
Uitkomstmaat |
Maatregel Beschrijving |
Tijdsspanne |
|---|---|---|
|
Prevalentie van het fenotype Hp 1-1
Tijdsspanne: 1 bezoek - ongeveer 2 uur.
|
Prevalentie als percentage van Hp 1-1-fenotypes in elke patiëntengroep
|
1 bezoek - ongeveer 2 uur.
|
Medewerkers en onderzoekers
Sponsor
Medewerkers
Onderzoekers
- Hoofdonderzoeker: Michal Shteinberg, MD, PhD, Pulmonology Institute, Carmel Medical Center
Studie record data
Bestudeer belangrijke data
Studie start
Primaire voltooiing (Werkelijk)
Studie voltooiing (Werkelijk)
Studieregistratiedata
Eerst ingediend
Eerst ingediend dat voldeed aan de QC-criteria
Eerst geplaatst (Schatting)
Updates van studierecords
Laatste update geplaatst (Schatting)
Laatste update ingediend die voldeed aan QC-criteria
Laatst geverifieerd
Meer informatie
Termen gerelateerd aan deze studie
Trefwoorden
Aanvullende relevante MeSH-voorwaarden
Andere studie-ID-nummers
- CMC-12-0121-CTIL
Deze informatie is zonder wijzigingen rechtstreeks van de website clinicaltrials.gov gehaald. Als u verzoeken heeft om uw onderzoeksgegevens te wijzigen, te verwijderen of bij te werken, neem dan contact op met register@clinicaltrials.gov. Zodra er een wijziging wordt doorgevoerd op clinicaltrials.gov, wordt deze ook automatisch bijgewerkt op onze website .