Yogisk pust endrer spyttkomponenter

A. SPESIFIKKE MÅL

SA1: Få et foreløpig estimat av i hvilken grad en strukturert sangøvelse stimulerer spyttsekresjon som inneholder kvantifiserbare mengder NGF hos friske personer.

SA2: Få et foreløpig estimat av i hvilken grad en strukturert pusteøvelse stimulerer spyttsekresjon som inneholder kvantifiserbare mengder NGF hos friske personer.

B. BAKGRUNN OG BETYDNING BAKGRUNN Nevrodegenerative sykdommer Nevrodegenerative sykdommer som Alzheimers sykdom er et stort helseproblem globalt. I USA er AD den sjette ledende dødsårsaken. Både genetiske og ikke-genetiske faktorer bidrar til utviklingen av AD. Personer som er rammet av AD trenger støtte som spenner fra medisiner, hjelpemidler og personlig pleie som utgjør en enorm følelsesmessig og økonomisk byrde. AD er assosiert med betydelige endringer på molekylært nivå som til slutt oversettes til cellulær, vev, organ og systemisk dysfunksjon. Derfor har molekylær terapi som endrer cellefunksjoner vært et viktig klinisk alternativ for behandling av AD. For eksempel viser NGF, en trofisk faktor involvert i utvikling, vedlikehold og overlevelse av det perifere nervesystemet og de kolinerge nevronene i sentralnervesystemet, betydelig reduksjon hos AD-personer. Reduksjonen i NGF forårsaker betydelig nedgang i kognitive funksjoner. Derfor følges administrering av NGF som et levedyktig klinisk alternativ for AD-personer. I tillegg til disse terapeutiske alternativene, har ikke-farmakologiske behandlingsformer som meditasjon og yoga blitt vurdert som alternative tilnærminger for å behandle AD. Slike praksiser og livsstiler er dypt forankret i flere eldgamle kulturer. Dette prosjektet er basert på to livsstilshelsepraksiser fra den gamle tamilske kulturen.

NGF nervevekstfaktor (NGF) er et nevrotrofisk protein (MW=13 kDa). NGF produseres av hvert vev/organ som innerveres av sensoriske afferenter og/eller sympatiske efferenter, så vel som av sentralnervesystemet (CNS) og perifert (PNS) og immunceller. NGF er viktig for den funksjonelle integriteten til kolinerge nevroner i CNS og for utvikling og funksjonell integritet av nevroner i PNS. NGF er en overlevelses-, differensierings- og trofiskfaktor for celler i immunsystemet og epitelial opprinnelse. Spyttkjertler (submandibulære/submaksillære) produserer en stor mengde NGF hos mennesker og hos mus. NGF produsert fra mus submaxillære kjertler brukes i flere kliniske studier. I CNS produseres NGF i cortex, hippocampus og i hypofysen; og også i andre områder, inkludert basalgangliene, thalamus, ryggmargen og i netthinnen. NGF binder seg til sin reseptor TrkA og aktiverer de mitogene MAPK-, PI3K/Akt- og PLC-gamma-veiene for å mediere cellevekst, differensiering og overlevelse. NGF-mediert overlevelse er viktig for de kolinerge nevronene i basal forhjernekomplekset (BFC). Disse nevronene bidrar til bevissthet, hukommelse, oppmerksomhet og opphisselse. BFC-neuroner er sterkt påvirket i nevrodegenerative sykdommer som AD. NGF beskytter BFC-neuroner i eksperimentelle traumemodeller, og i aldersassosiert kolinerg nedgang. På grunn av de positive effektene av NGF i flere systemer, forfølges utviklingen av NGF som et medikament aktivt for behandling av nevrodegenerasjon, immun dysregulering, kronisk betennelse og autoimmune sykdommer. Imidlertid har inntil nylig kliniske studier med NGF vært uten stor suksess på grunn av hyperalgesi. Nyere studier viser at genterapi, nasale og okulære ruter for NGF-administrasjon er effektive med mye mindre nociseptiv bivirkning. Videre er et nylig funn om at kjemisk modifisering av NGF reduserer smerte, betraktet som en ny retning i NGF-terapi. En klinisk fase II studie som vurderer de gunstige effektene av et adeno-assosiert virusmediert uttrykk av NGF i de kolinerge nevronene i hjernen er i gang ved MUSC som involverer medforskeren i dette prosjektet Dr. Jacobo Mintzer.

NGF tas opp fra målorganene av de innerverende nevronene og transporteres til den aksonale kroppen ved retrograd aksonal transport. Forskere har brukt kvantepunktmerket NGF for å vise at hver NGF-dimer er pakket inn i individuelle endosomer under retrograd transport. Retrograd aksonal transport av NGF-signaler for overlevelse, differensiering og vedlikehold av perifere sympatiske og sensoriske nevroner, og basale kolinerge nevroner i forhjernen. Botulinumtoksin følger en retrograd vei for å nå sentrale nevroner. I tillegg ble det nylig bekreftet at botulinum-nevrotoksinene A og E når distale steder i nervesystemet via retrograd langdistansetransport via motoriske nevroner og antydet at denne mekanismen også kan være vanlig for spredning av andre nevrotrofiske faktorer. Dette kan forklare hvorfor intranasal påføring av NGF anses som effektiv for NGF-terapi. I tillegg brukes den sublinguale absorpsjonsveien som omgår gastrointestinal rute for påføring av nitroglyserin og andre psykoaktive midler. Vår begrunnelse for at NGF produsert av spyttkjertlene blir tatt opp av 1) de innerverende sensoriske og motoriske nevronene for retrograd aksonal transport til cellekroppen og transcytose for å nå de sentrale nevronene, og 2) den sublinguale absorpsjonsveien inn i blodstrømmen til nå andre distale målorganer er godt innenfor den teoretiske rammen av produksjons- og transportmekanismer etablert for nevromodulatorer. Det skal her understrekes at dette forslaget er det første forsøket noensinne på å stimulere NGF med ikke-invasive metoder.

Sanging Sanging og sang er to eldgamle kulturelle praksiser i menneskets historie. Nyere bevis tyder på at disse to praksisene kan regulere pusten. Lydsymbolet Om (Figur 2) er referert til som nøkkelen til et lykkelig liv. Om er et velkjent prefiks i flere chanting gjennom østlige religioner. Chanting Om antas å være assosiert med fysisk og følelsesmessig velvære. Chanting Om øker den kutane perifere vaskulære motstanden, som er et tegn på økt mental årvåkenhet selv mens du er fysiologisk avslappet. Hos ca. 40 % av Alzheimers-pasientene mangler det auditive evoked potential (MLAEP) med middels latens. Chanting Om er vist å forbedre MLAEP hos normale forsøkspersoner etter chanting, noe som tyder på at en lignende effekt kan observeres hos AD-personer. Vagal nervestimulering (VNS) var fordelaktig hos AD-personer da den forbedrer kognitive funksjoner. Elektrisk pulsering for VNS viste deaktivering av limbiske hjerneregioner. Chanting Om forårsaket også en lignende deaktivering av de limbiske hjerneområdene, amygdala, hippocampus, parahippocampal gyrus, insula, orbitofrontal og anterior cingulate cortex og thalamus. De nevrofysiologiske effektene av å synge Om kan formidles gjennom aurikulære grener av vagusnervene. Det er imidlertid ikke forstått om spesifikke molekylære endringer, når det gjelder nevrotrofiske faktorer som NGF, oppstår etter Om-sang.

Pusteøvelser Pusteøvelser er en aktiv måte å regulere pusten på. Vanlig pustefrekvens er 15 ganger per minutt hos normale voksne mennesker. Denne frekvensen endres med alder og fysiologisk tilstand. Hos pasienter med hjertesvikt viste Bernardi et al at det var fordelaktig å bremse pusten. Øvelser som yoga, sang og pustetrening regulerer pust og kognitive funksjoner. En av de eldgamle tekstene som refererer til fordelene med pustetrening er Thirumanthiram skrevet av den tamilske vismannen Thirumoolar hvis tekster er kjent for helse og lang levetid. Pustetrening antas å produsere sykluser med oksygenering og ikke-oksygeneringstilstander som et middel for iskemisk prekondisjonering. Ekstern iskemisk prekondisjonering, dvs. indusering av korte perioder med iskemi i et fjerntliggende organ, gir beskyttelse mot en påfølgende iskemisk fornærmelse. Å holde pusten øker vagus tonus, øker parasympatisk dominans og reduserer sympatiske utflod. Regulert pust fører til overvekt ved abdominal/diafragmatisk pust. Pustetrening kan derfor være en potensiell måte å indusere iskemisk prekondisjonering i nevronene. Det er kjent i hjernen og hjertet at iskemisk prekondisjonering er gunstig for å avverge fremtidige store iskemiske hendelser ved å produsere celleoverlevelsessignalering. Interessant nok er NGF et signalmolekyl for celleoverlevelse. Derfor kan det tenkes at pustetrening induserer celleoverlevelse i sentral- og perifere nervesystemceller via handlingene til NGF.

Spytt som en biomarkør Et normalt menneske produserer omtrent 0,75 til 1,5 L spytt per dag. Spytt inneholder mange biologisk aktive molekyler, inkludert proteiner, peptider, mRNA, DNA og miRNA av både menneskelig og oral mikrobiell opprinnelse. Spyttsekresjon regulerer fordøyelsessystemet, nervesystemet, immunsystemet og luftveiene. For eksempel utskilles 1) nervevekstfaktor (NGF), substans P og kalsitoningenrelatert peptid (CGRP) i spytt som respons på kronisk migrene, og 2) Opiorfin, et potent anti-nociceptivt middel, uttrykkes i spytt. Spyttproteomisk og mRNA-profilering har identifisert betydelige forskjeller mellom kontroll- og kreftpersoner. Disse studiene indikerer at spytt fungerer som en kilde til biomarkører i diagnose og prognose for en rekke patologiske tilstander inkludert AD.

BETYDNING Nevrodegenerative sykdommer som AD utgjør et stort globalt helseproblem. Ikke-farmakologisk og ikke-invasiv praksis kan endre nevrologiske funksjoner i normale og patologiske omgivelser. Spyttsekresjon av nevrotrofiske faktorer indikerer at spytt kan være en potensiell kilde og en biomarkør for nevrotrofiske faktorer. Derfor kan NGF-estimering av spytt være et verktøy for diagnose og prognose ved AD. Gammel tamilsk kultur har bevart praksis for å opprettholde en sunn psykologisk og fysiologisk status. Sanging og pustetrening er kjent for å fremme spyttsekresjon. Det er imidlertid ikke fullt ut forstått om slik praksis induserer uttrykk for nevrologiske faktorer i spyttet. Vi tar sikte på å kvantifisere spytt-NGF som svar på sang og pusteøvelser hos normale mennesker. Dette vil etablere et hittil urapportert forhold mellom tungen taktile og respiratoriske signaler for spyttsekresjon av NGF, og dets effekter på nervesystemet. Prosjektet vårt vil kvantifisere kandidat nevrotrofisk faktor NGF i spytt ved basal, under og etter trening. I fremtidige studier vil vi bruke proteomiske, peptidiske og genomiske tilnærminger for å identifisere andre nevrotrofiske faktorer som reguleres i spytt av disse øvelsene. Våre funn vil introdusere et nytt paradigme innen behandling og omsorg for personer med/utsatt for AD og andre nevrodegenerative sykdommer.

Klinisk og translasjonseffekt: Gitt det faktum at AD, aldring og andre nevrodegenerative lidelser er assosiert med redusert produksjon av nevrotrofisk faktor (f. NGF), og at NGF aktivt forfølges som et medikament i kliniske studier, vil våre funn om at NGF kan stimuleres in situ ved enkel, ikke-invasiv etnisk praksis ha sterk klinisk anvendelse. Fremtidige studier som bruker genomiske og proteomiske tilnærminger vil identifisere ytterligere nevrotrofiske faktorer i spytt som potensielt kan være medisinmål for å behandle AD og andre nevrodegenerative sykdommer.

C. FORSTUDIER Ingen. D. FORSKNINGSDESIGN OG METODER Mennesker

Totalt 20 frivillige (mann eller kvinne), 18 år og eldre, vil bli inkludert i studien. Følgende er en liste over vilkår for eksklusjon:

• pusteproblemer (manglende evne til å puste gjennom neseborene, kronisk bronkitt, emfysem og astma)
• taleproblemer som ville hindre sang
• manglende evne til å lytte og følge treningsinstruksjoner
• bihulestopp
• Sjøgrens syndrom
• kronisk munntørrhet på grunn av medisiner eller andre forhold
• bruk av antikolinerge medisiner Informert samtykke vil bli innhentet fra hver enkelt forsøksperson etter fullstendig beskrivelse av studien.

Rekruttering av menneskelige emner Når vi har fått en IRB-godkjenning, vil vi rekruttere 20 emner som kreves for denne studien ved å legge ut en annonse i MUSC-heiser og i nærliggende yogasentre. Interesserte deltakere vil kontakte PI på oppgitt telefonnummer. Kvalifisering av fagene vil bli vurdert av PI basert på spørsmål gitt i spørreskjemaet. PI og deltaker vil avtale et avtaletidspunkt. Deltakeren vil komme til PIs lab i Strom Thurmond Building (STB, rom 222). Dette møterommet ligger i samme etasje som PIs forskningslaboratorium. Vi valgte dette rommet på grunn av dens rolige atmosfære uten forstyrrelser fra annet laboratoriepersonell under protokollen. Dette rommet er reservert via Gazes Cardiac Research Institute Lab Manager, og er fritt tilgjengelig for PI. Ved ankomst vil PI forklare studien til forsøkspersonen og innhente samtykke ved å bruke samtykkeskjemaet. PI vil også signere og datere samtykkeskjemaet og gi en kopi til deltakeren. Emnet vil deretter fylle ut spørreskjemaet for å bekrefte kvalifisering.

Registrerte og samtykkende forsøkspersoner vil bli randomisert til en av 2 tilstander («Sang/pust» (CB)-armen versus «Kontroll»-armen. Randomisering vil foregå i samarbeid med en biostatistiker og gjøres på en stratifisert måte (dvs. etter kjønn), for å sikre lik kjønnsfordeling i de 2 eksperimentelle gruppene (CB vs. Kontroll). Biostatistikeren vil gi PI konvolutter som inneholder studiens identifikasjonsnummer og tilfeldig gruppetilordning (dvs. CB vs. kontroll). Hver konvolutt åpnes først etter at studiekvalifikasjon er etablert og samtykke er innhentet.

Før trening og prøvesamling vil PI lære hvert fag hvordan man utfører sang- og pusteøvelser. Hvert individ vil teste individuelt på grunn av enkel prøveinnsamling og for å unngå variasjoner som kan oppstå i nevronal stimulering hos forsøkspersoner i nærvær av andre individer enn forskerne.

Chanting, pusteøvelse og prøvesamling Fagene vil få en innføring i sang- og pusteøvelsen. Som utøver av sang/yoga/pusteøvelser vil PI gi denne opplæringen, som ikke bør ta mer enn 5 minutter å lære. Planen for innsamling av hele spyttprøver er avbildet i figur 3. Spyttprøver vil bli samlet inn én gang i begynnelsen av protokollen (tid 0) mens forsøkspersonene sitter. Spytt vil naturlig få lov til å samle seg i munnhulen, og deltakeren vil slippe det ut i prøverøret (5 ml kapasitet) med lokk.

Chanting Om (C):

Emnene vil da synge Om som følger:

1. Skarp dyp innånding gjennom neseborene
2. Sakte utpust gjennom munnen mens du synger Om. På dette trinnet vil forsøkspersonene utføre en langsom og fullstendig utånding.

Disse to trinnene gjentas kontinuerlig i 10 minutter med lukkede øyne.

Pusteøvelse (BE):

Etter sangen vil forsøkspersonene utføre pusteøvelsen som følger, som instruert av PI basert på Thirumanthiram:

1. Sjekk hvilket av de to neseborene som har fri luftstrøm. For forklaringsformålet behandles neseboret med fri luftstrøm som nesebor 1 og det andre som nesebor 2.
2. Lukk nesebor 2 og inhaler en skarp dyp pust gjennom nesebor 1 og lukk deretter begge neseborene slik at ingen inhalert luft slipper ut. Luft bør heller ikke slippe ut gjennom munnen. Dette innåndingstrinnet bør ta ca. 4 sekunder.
3. Hold pusten i denne posisjonen i ca. 16 sekunder.
4. Åpne nesebor 2 og pust ut i ca. 8 sekunder. Fullstendig utpust er nødvendig. Magen vil sakte bue seg inn etter hvert som personen puster ut. Dette er normalt og oppmuntret. Ingen luft skal lekke gjennom Nostril 1 eller munnen.
5. Gå til trinn a). Under treningen, hvis munnhulen samler seg spytt, kan forsøkspersonen svelge det på slutten av utåndingstrinnet (trinn d). Forsøkspersonene skal utføre pusteøvelser i 10 min. Spyttprøver vil bli samlet inn etter 5 og 10 minutters pustetrening i rør merket BE-1, BE-2. Dermed vil hver enkelt gi følgende fem spyttprøver: + (Tid 0), Om-sang (C-1 og C2) og pusteøvelse (BE-1 og BE-2).

Kontrollgruppe Ved kontrollgruppe vil forsøkspersonene sitte stille i samme varighet som CB-gruppen. Spyttprøver vil bli samlet inn på samme tidspunkt (med 5 minutters intervaller i 20 minutter) som CB-gruppen.

Den omtrentlige totale tiden for hele protokollen vil være som følger:

Introduksjon og spørreskjema - 10 minutter Instruksjon for sang, pustetrening (CB gruppe) eller sitte stille (Kontrollgruppe) og spyttprøvesamling - 10 minutter (CB gruppe) eller 5 minutter (Kontrollgruppe) Basalprøvesamling - 1 minutt Om Chanting - 10 minutter Pusteøvelse - 10 minutter Eventuelle andre spørsmål fra forsøkspersonen - 2-3 minutter Total avtaletid for et emne = ca 45 minutter (CB-gruppe) 40 minutter (Kontrollgruppe) For studiedeltakernes tid og eventuelle ulemper en økonomisk kompensasjon vil bli gitt.

Behandling av prøver Legg de innsamlede spyttprøvene på is. Bruk sterile teknikker, overfør spyttet til sentrifugerør mens du måler mengden av hver prøve. Antall prøver samlet inn fra hver prøve ved hvert trinn i eksperimentet kan variere. Behandle prøvene fra individuelle rør separat uten å samle noen prøve. Beregn det totale volumet av spytt under normal hvilefase, under sang og under pustetrening. Oppbevar prøvene ved -80 grader C frem til analyse. Prøver vil bli kastet etter dataanalysen.

Enzym-linked immunoassay Kvantifiser nivåene av NGF i hver prøve ved enzym-linked immunoassay ved bruk av kommersielle sett i henhold til produsentens instruksjoner (Promega). Alle reagensene som er nødvendige for å utføre ELISA-eksperimentet er inkludert i settet. Eventuelle ytterligere reagenser og ELISA-leseren er tilgjengelig for PI på STB-rom 511.

Databehandling Alle studiedata samlet inn fra deltakere av PI vil bli lagt inn i en REDCap-database, utviklet med bistand fra prosjektets biostatistiker. REDCap (Research Electronic Data Capture) er et programvareverktøysett og arbeidsflytmetodikk for elektronisk innsamling og håndtering av forsknings- og kliniske utprøvingsdata tilgjengelig for MUSC-forskere. Den iterative utviklings- og testprosessen resulterer i en godt planlagt datainnsamlingsstrategi for individuelle studier som letter datainntasting, redigeringskontroller og eventuell statistisk analyse. Den underliggende databasen er vert for MUSC Data Center, og systemet er beskyttet bak en pålogging og Secure Sockets Layer (SSL) kryptering.

Statistisk analyse Statistisk analyse vil bli gjort under veiledning av en biostatistiker, som har samarbeidet med PI i utviklingen av denne studien. I første omgang vil beskrivende statistikk bli brukt for å karakterisere studiedeltakerne med hensyn til demografiske, eventuelle relevante kliniske egenskaper og NGF-målinger ved baseline og over tid. Gruppeforskjeller i demografi og andre grunnlinjevariabler vil bli undersøkt via t-tester, chi square-tester og Fishers eksakte tester, etter behov. Denne studien er ment å skaffe foreløpige bevis på effektiviteten av disse øvelsene (sang og/eller pusting vs. hvilekontroll) for å stimulere spytt-NGF; som sådan vil ingen formell hypotesetesting bli utført. I stedet vil generelle lineære blandede modeller (GLMM) bli brukt for å oppnå estimater (og deres respektive 95 % konfidensintervaller) av gruppeforskjellene over tid med hensyn til NGF-nivåene. GLMM-er er ideelle for analyser som involverer variabilitet mellom og innenfor faget, og er spesielt nyttige for studiedesign med gjentatte tiltak som det som ble brukt for denne foreslåtte studien. Siden alder antas å påvirke NGF, vil alder inkluderes som en kovariat i alle modeller. Lineære, kvadratiske og kubiske effekter av tid vil bli vurdert. Ulike typer feilkovariansstrukturer vil bli undersøkt, og Akaike Information Criterion-verdier vil bli brukt for å velge den mest passende GLMM. Bruk av GLMM vil tillate oss å karakterisere den typiske banen til NGF-målinger over tid i begge eksperimentelle forhold, og vil også gi oss muligheten til å sammenligne chanting versus pusteøvelser i CB-gruppen. Resultater fra denne typen statistisk modellering vil være verdifulle for planlegging (eksternt finansiert) fremtidige, større og mer definitive studier.

Prøvestørrelse Begrunnelse Siden ingen formell hypotesetesting vil bli utført, er statistisk makt ikke relevant for dette forslaget; Begrunnelsen for prøvestørrelsen er derfor basert på presisjonen i estimeringsprosessene våre og på læringserfaringene som er involvert i å registrere, observere og måle forsøkspersonene i denne studien, samt utføre laboratorietester på en mest mulig effektiv måte. Å ha n=10 forsøkspersoner i hver forsøksgruppe (for totalt n=20 forsøkspersoner) vil tillate oss å gjøre foreløpige estimater av NGF-målingene over tid i hver gruppe. Med n=10 forsøkspersoner per gruppe, vil 95 % konfidensintervall rundt gruppegjennomsnittsestimater utvide ~0,6 standardavvik i begge retninger, og 95 % konfidensintervall rundt gjennomsnittlige gruppeforskjellsestimater vil utvide ~0,9 standardavvik i begge retninger. Med n=10 per gruppe vil vi også få en større forståelse av forsøkspersoners vilje til å bli randomisert i denne typen komplementære og alternativmedisinske studier og av de beste teknikkene knyttet til å levere sang- og pusteøvelsesintervensjonen.

E. BESKYTTELSE AV MENNESKER

1. Risikoer for forsøkspersonene Det vil være 20 forsøkspersoner både menn og kvinner som deltar i denne studien som er i aldersgruppen 18 år og oppover. Denne protokollen vil bestå av enkeltbesøk, en-til-en økter for individuelle deltakere. Disse øvelsene utgjør ingen fysisk, psykologisk, sosial risiko for deltakerne. Brudd på konfidensialitet kan være en potensiell risiko ettersom spørreskjemaet samler inn helseopplysninger om forsøkspersonene. Deltakerne kan føle seg litt ukomfortable å spytte eller sikle i nærvær av en annen person. Det er en mulighet for deltakeren å føle at de ikke kan øvelsene på forhånd, eller de kan føle at de ikke er fullt i stand til å følge øvelsesinstruksjonene.

   Beskyttelse mot risiko Instruktøren vil prøve å sørge for at forsøkspersonene føler seg vel og komfortable. All informasjon som samles inn i studien vil bli behandlet konfidensielt og lagret på sikre servere som beskrevet ovenfor. Papirarbeidene som genereres i denne studien inneholder potensiell personlig informasjon. Disse dokumentene vil bli sikret i et låst skap som tilhører PI som ligger i rom 625 i STB ved MUSC. Deltakerne vil bli identifisert med et identifikasjonsnummer i alle dokumenter, data og i spyttprøver. Det informerte samtykket er koblingen mellom deltakerens identifikasjonsnummer og deres navn. Spyttprøvene som samles inn vil bli sikret ved -80 graders fryser med lås i STB-rom 213 og kastet umiddelbart etter dataanalysen. Pusteøvelsene og sang er milde treningsformer og utgjør ingen helserisiko for deltakerne. Studiedeltakerne vil ikke bli kontaktet for en annen studie.

2. Potensielle helsemessige fordeler for fagene Yogisk pust spesielt og yoga generelt er gode øvelser for et sunt liv. Flere studier indikerer at yogisk pust reduserer stress og forbedrer livskvaliteten hos flere pasientgrupper og hos ellers friske individer. På slutten av studien kunne forsøkspersonene under Chanting-/Pusteøvelsesgruppen føle seg fysisk og psykologisk bedre på grunn av de nevrotrofiske effektene. Disse fagene ender opp med å lære nye teknikker fra en annen kultur (tverrkulturell erfaring) for å regulere pusten som de kan øve på daglig etter deres vilje, da kontinuerlig øvelse kan være til nytte for dem i det lange løp.