Jógické dýchání mění složky slin

A. KONKRÉTNÍ CÍLE

SA1: Získejte předběžný odhad, do jaké míry strukturované cvičení zpěvu stimuluje sekreci slin, která obsahuje kvantifikovatelné množství NGF u zdravých subjektů.

SA2: Získejte předběžný odhad, do jaké míry strukturované dechové cvičení stimuluje sekreci slin, která obsahuje kvantifikovatelné množství NGF u zdravých subjektů.

B. POZADÍ A VÝZNAM POZADÍ Neurodegenerativní onemocnění Neurodegenerativní onemocnění, jako je Alzheimerova choroba, jsou celosvětově hlavním problémem zdravotní péče. V USA je AD 6. nejčastější příčinou úmrtí. K rozvoji AD přispívají genetické i negenetické faktory. Jedinci postižení AD vyžadují podporu od léků, pomocných zařízení a osobní péče, která představuje obrovskou emocionální a finanční zátěž. AD je spojena s významnými změnami na molekulární úrovni, které se nakonec promítnou do buněčné, tkáňové, orgánové a systémové dysfunkce. Proto byla molekulární terapie, která mění buněčné funkce, hlavní klinickou možností pro léčbu AD. Například NGF, trofický faktor zapojený do vývoje, udržování a přežití periferního nervového systému a cholinergních neuronů centrálního nervového systému, vykazuje významné snížení u pacientů s AD. Snížení NGF způsobuje významný pokles kognitivních funkcí. Proto je podávání NGF sledováno jako životaschopná klinická možnost pro subjekty s AD. Kromě těchto terapeutických možností byly za alternativní přístupy k léčbě AD považovány nefarmakologické způsoby léčby, jako je meditace a jóga. Takové praktiky a životní styly jsou hluboce zakořeněny v několika starověkých kulturách. Tento projekt je založen na dvou zdravotních praktikách životního stylu ze starověké tamilské kultury.

NGF Nervový růstový faktor (NGF) je neurotrofní protein (MW=13 kDa). NGF je produkován každou tkání/orgánem, který je inervován senzorickými aferentními a/nebo sympatickými eferenty, stejně jako centrálním (CNS) a periferním (PNS) nervovým systémem a imunitními buňkami. NGF je důležitý pro funkční integritu cholinergních neuronů v CNS a pro vývoj a funkční integritu neuronů v PNS. NGF je faktor přežití, diferenciace a trofický faktor pro buňky imunitního systému a epiteliálního původu. Slinné žlázy (submandibulární/submaxilární) produkují velké množství NGF u lidí a u myší. NGF produkovaný z myších submaxilárních žláz se používá v několika klinických studiích. V CNS je NGF produkován v kortexu, hipokampu a hypofýze; a také v jiných oblastech, včetně bazálních ganglií, thalamu, míchy a sítnice. NGF se váže na svůj receptor TrkA a aktivuje mitogenní dráhy MAPK, PI3K/Akt a PLC-gama ke zprostředkování buněčného růstu, diferenciace a přežití. Přežití zprostředkované NGF je důležité pro cholinergní neurony bazálního předního mozku (BFC). Tyto neurony přispívají k vědomí, paměti, pozornosti a vzrušení. BFC neurony jsou vysoce postiženy u neurodegenerativních onemocnění, jako je AD. NGF chrání BFC neurony v experimentálních modelech traumatu a při cholinergním poklesu souvisejícím s věkem. Vzhledem k pozitivním účinkům NGF v mnoha systémech je vývoj NGF jako léku aktivně sledován pro léčbu neurodegenerace, imunitní dysregulace, chronického zánětu a autoimunitních onemocnění. Nicméně až do nedávné doby byly klinické studie s NGF bez velkého úspěchu kvůli hyperalgezii. Nedávné studie ukazují, že genová terapie, nazální a oční cesty podávání NGF jsou účinné s mnohem menším nociceptivním vedlejším účinkem. Navíc nedávné zjištění, že chemická modifikace NGF snižuje bolest, je považováno za nový směr v terapii NGF. V MUSC probíhá klinická studie fáze II hodnotící příznivé účinky exprese NGF zprostředkované adeno-asociovaným virem v cholinergních neuronech mozku, na které se podílí spoluřešitel tohoto projektu Dr. Jacobo Mintzer.

NGF je vychytáván z cílových orgánů inervujícími neurony a transportován do axonálního těla retrográdním axonálním transportem. Vědci použili NGF značený kvantovými tečkami, aby ukázali, že každý dimer NGF je zabalen do jednotlivých endozomů během retrográdního transportu. Retrográdní axonální transport signálů NGF pro přežití, diferenciaci a udržení periferních sympatických a senzorických neuronů a bazálních cholinergních neuronů předního mozku. Botulotoxin sleduje retrográdní cestu k dosažení centrálních neuronů. Kromě toho bylo nedávno potvrzeno, že botulinové neurotoxiny A a E dosahují distálních míst v nervovém systému prostřednictvím retrográdního dálkového transportu přes motorické neurony, a navrhlo se, že tento mechanismus by mohl být společný i pro šíření jiných neurotrofních faktorů. To by mohlo vysvětlovat, proč je intranazální aplikace NGF považována za účinnou pro terapii NGF. Kromě toho se pro aplikaci nitroglycerinu a dalších psychoaktivních látek používá sublingvální cesta absorpce, která obchází gastrointestinální cestu. Naše zdůvodnění tedy, že NGF produkovaný slinnými žlázami je přijímán 1) inervujícími senzorickými a motorickými neurony pro retrográdní axonální transport do těla buňky a transcytózou k dosažení centrálních neuronů, a 2) cestou sublingvální absorpce do krevního řečiště. dosažení dalších distálních cílových orgánů je dobře v teoretickém rámci produkčních a transportních mechanismů zavedených pro neuromodulátory. Zde je třeba zdůraznit, že tento návrh je vůbec prvním pokusem o stimulaci NGF neinvazivními metodami.

Zpěv Zpěv a zpěv jsou dvě staré kulturní praktiky v historii lidstva. Nedávné důkazy naznačují, že tyto dvě praxe mohou regulovat dýchání. Zvukový symbol Om (obrázek 2) je označován jako jednopísmenný klíč ke šťastnému životu. Óm je dobře známá předpona v několika zpěvech ve východních náboženstvích. Má se za to, že zpívání Óm je spojeno s fyzickou a emocionální pohodou. Zpívání Óm zvyšuje kožní periferní vaskulární odpor, což je známkou zvýšené duševní bdělosti i při fyziologickém uvolnění. Asi u 40 % pacientů s Alzheimerovou chorobou chybí sluchový evokovaný potenciál se střední latencí (MLAEP). Ukázalo se, že zpívání Om zlepšuje MLAEP u normálních subjektů po zpívání, což naznačuje, že podobný účinek by mohl být pozorován u subjektů s AD. Stimulace vagového nervu (VNS) byla prospěšná u subjektů s AD, protože zvyšuje kognitivní funkce. Elektrické pulzování pro VNS ukázalo deaktivaci limbických oblastí mozku. Chanting Om také způsobil podobnou deaktivaci limbických oblastí mozku, amygdaly, hipokampu, parahipokampálního gyru, insuly, orbitofrontální a přední cingulární kůry a thalamu. Neurofyziologické účinky zpívání Óm by mohly být zprostředkovány prostřednictvím ušních větví vagových nervů. Není však jasné, zda po zpěvu Óm dochází ke specifickým molekulárním změnám, pokud jde o neurotrofické faktory, jako je NGF.

Dechové cvičení Dechové cvičení je aktivní způsob regulace dýchání. Běžná frekvence dýchání je u normálních dospělých lidí 15krát za minutu. Tato frekvence se mění s věkem a fyziologickým stavem. U subjektů se srdečním selháním Bernardi et al prokázali, že zpomalení dýchání je prospěšné. Cvičení jako jóga, zpěv a dechová cvičení regulují dýchání a kognitivní funkce. Jedním ze starověkých textů, které odkazují na výhody dechového cvičení, je Thirumanthiram napsaný tamilským mudrcem Thirumoolarem, jehož texty jsou známé pro zdraví a dlouhověkost. Předpokládá se, že dechová cvičení vytváří cykly okysličování a neokysličování jako prostředek ischemické předkondicionace. Vzdálená ischemická preconditioning, tj. indukce krátkých období ischemie ve vzdáleném orgánu, poskytuje ochranu před následným ischemickým poškozením. Zadržování dechu zvyšuje tonus vagu, zvyšuje parasympatickou dominanci a snižuje sympatické výboje. Regulované dýchání vede k převaze břišního/bráničního dýchání. Dechové cvičení by tedy mohlo být potenciálním způsobem indukce ischemické prekondice v neuronech. V mozku a srdci je známo, že ischemická preconditioning je prospěšná při odvrácení budoucích velkých ischemických příhod tím, že produkuje signalizaci přežití buněk. Je zajímavé, že NGF je molekula signalizující přežití buněk. Proto je možné, že dechové cvičení indukuje přežití buněk v buňkách centrálního a periferního nervového systému prostřednictvím působení NGF.

Sliny jako biomarker Normální člověk produkuje asi 0,75 až 1,5 l slin denně. Sliny obsahují četné biologicky aktivní molekuly včetně proteinů, peptidů, mRNA, DNA a miRNA lidského i orálního mikrobiálního původu. Vylučování slin reguluje trávicí, nervový, imunitní a dýchací systém. Například 1) Nervový růstový faktor (NGF), substance P a peptid související s kalcitoninem (CGRP) jsou vylučovány ve slinách v reakci na chronickou migrénu a 2) Opiorphin, silné antinociceptivní činidlo, je exprimováno ve slinách. Slinné proteomické a mRNA profilování identifikovalo významné rozdíly mezi kontrolními a rakovinnými subjekty. Tyto studie ukazují, že sliny slouží jako zdroj biomarkerů v diagnostice a prognóze řady patologických stavů včetně AD.

VÝZNAM Neurodegenerativní onemocnění, jako je AD, představují hlavní globální problém zdravotní péče. Nefarmakologické a neinvazivní postupy by mohly změnit neurologické funkce za normálních a patologických podmínek. Slinná sekrece neurotrofních faktorů naznačuje, že sliny by mohly být potenciálním zdrojem a biomarkerem neurotrofických faktorů. Proto by odhad NGF ve slinách mohl být nástrojem pro diagnostiku a prognózu AD. Starověká tamilská kultura zachovala praktiky k udržení zdravého psychologického a fyziologického stavu. Je známo, že zpívání a dechová cvičení podporují sekreci slin. Není však zcela pochopeno, zda takové praktiky indukují expresi neurologických faktorů ve slinách. Naším cílem je kvantifikovat slinný NGF v reakci na zpívání a dechová cvičení u normálních lidských subjektů. To vytvoří dosud neuvedený vztah mezi jazykovými hmatovými a respiračními signály pro sekreci NGF slinami a jeho účinky na nervový systém. Náš projekt bude kvantifikovat kandidátní neurotrofní faktor NGF ve slinách při bazální, během a po námaze. V budoucích studiích budeme používat proteomické, peptidické a genomické přístupy k identifikaci dalších neurotrofních faktorů regulovaných ve slinách těmito cvičeními. Naše zjištění představí nové paradigma v léčbě a péči o jedince s/sklonem k AD a dalším neurodegenerativním onemocněním.

Klinický a translační dopad: Vzhledem k tomu, že AD, stárnutí a další neurodegenerativní poruchy jsou spojeny s poklesem produkce neurotrofických faktorů (např. NGF) a že NGF je aktivně sledován jako lék v klinických studiích, naše zjištění, že NGF by mohl být stimulován in situ jednoduchými, neinvazivními etnickými praktikami, budou mít silné klinické uplatnění. Budoucí studie využívající genomické a proteomické přístupy identifikují další neurotrofické faktory ve slinách, které by mohly být potenciálně lékovými cíli pro léčbu AD a dalších neurodegenerativních onemocnění.

C. PŘEDBĚŽNÉ STUDIE Žádné. D. NÁVRH A METODY VÝZKUMU Lidské subjekty

Do studie bude zahrnuto celkem 20 dobrovolníků (muži nebo ženy) ve věku 18 a více let. Níže je uveden seznam podmínek pro vyloučení:

• problémy s dýcháním (neschopnost dýchat nosními dírkami, chronická bronchitida, rozedma plic a astma)
• problémy s řečí, které by bránily zpívání
• neschopnost naslouchat a dodržovat cvičební pokyny
• přetížení dutin
• Sjogrenův syndrom
• chronické sucho v ústech v důsledku léků nebo jiných stavů
• použití anticholinergních léků Po úplném popisu studie bude od každého subjektu získán informovaný souhlas.

Nábor lidských subjektů Jakmile získáme souhlas IRB, přijmeme 20 subjektů potřebných pro tuto studii zveřejněním inzerátu ve výtazích MUSC a v blízkých jógových centrech. Zájemci budou kontaktovat PI na uvedeném telefonním čísle. Způsobilost předmětů posoudí PI na základě otázek uvedených v Dotazníku. PI a účastník se dohodnou na čase schůzky. Účastník přijde do laboratoře PI ve Strom Thurmond Building (STB, místnost 222). Tato zasedací místnost se nachází na stejném patře jako výzkumná laboratoř PI. Tuto místnost jsme vybrali pro její klidnou atmosféru bez jakéhokoli zásahu jiného laboratorního personálu během protokolu. Tato místnost je rezervována prostřednictvím vedoucího laboratoře Gazes Cardiac Research Institute a je volně k dispozici PI. Po příjezdu PI vysvětlí studii subjektu a získá souhlas pomocí formuláře souhlasu. PI také podepíše a uvede datum na formuláři souhlasu a předá kopii účastníkovi. Subjekt poté vyplní dotazník, aby potvrdil způsobilost.

Zapsané a schválené subjekty budou náhodně rozděleny do jedné ze 2 podmínek (rameno „zpěv/dech“ (CB) versus rameno „kontrola“). Randomizace bude provedena ve spolupráci s biostatistikem a bude provedena stratifikovaným způsobem (tj. podle pohlaví), aby bylo zajištěno rovnoměrné rozdělení pohlaví ve 2 experimentálních skupinách (CB vs. kontrola). Biostatistik poskytne PI obálky obsahující identifikační číslo studie a náhodné přiřazení do skupiny (tj. CB vs. kontrola). Každá obálka bude otevřena až poté, co byla stanovena způsobilost ke studiu a byl získán souhlas.

Před cvičením a odběrem vzorků PI naučí každý subjekt, jak provádět zpěv a dechová cvičení. Každý subjekt bude testovat individuálně kvůli snadnému odběru vzorků a aby se zabránilo jakékoli variabilitě, která by mohla vzniknout při neuronální stimulaci u subjektů v přítomnosti jiných jedinců než výzkumníků.

Zpívání, dechová cvičení a sběr vzorků Účastníci se seznámí se zpěvem a dechovým cvičením. Jako cvičenec zpěvu/jógy/dechového cvičení poskytne PI tento trénink, jehož učení by nemělo trvat déle než 5 minut. Plán odběru celých vzorků slin je znázorněn na obrázku 3. Vzorky slin budou odebrány jednou na začátku protokolu (čas 0), zatímco subjekty sedí. Sliny se přirozeně hromadí v dutině ústní a účastník je vypustí do zkumavky na vzorky (kapacita 5 ml) s víčkem.

Zpívání Óm (C):

Subjekty pak budou zpívat Óm takto:

1. Ostrý hluboký nádech nosními dírkami
2. Pomalý výdech ústy při zpívání Óm. V tomto kroku subjekty provedou pomalý a úplný výdech.

Tyto dva kroky se nepřetržitě opakují po dobu 10 minut se zavřenýma očima.

Dechová cvičení (BE):

Po zpívání provedou subjekty dechové cvičení následovně, podle pokynů PI na základě Thirumanthiramu:

1. Zkontrolujte, která ze dvou nosních dírek vykazuje volné proudění vzduchu. Pro účely vysvětlení je nosní dírka s volným prouděním vzduchu považována za nosní dírku 1 a druhá jako nosní dírku 2.
2. Zavřete nosní dírku 2 a zhluboka se nadechněte nosní dírkou 1 a poté zavřete obě nosní dírky, aby žádný vdechovaný vzduch neunikl. Vzduch by neměl unikat ani ústy. Tento krok inhalace by měl trvat asi 4 sekundy.
3. Zadržte dech v této poloze asi 16 sekund.
4. Otevřete nosní dírku 2 a vydechujte asi 8 sekund. Je vyžadován úplný výdech. Břicho se pomalu zakřiví, jak subjekt vydechuje. To je normální a podporované. Nosní dírkou 1 nebo ústy by neměl unikat žádný vzduch.
5. Přejděte na krok a). Pokud se během cvičení v dutině ústní hromadí sliny, subjekt je může spolknout na konci kroku výdechu (krok d). Účastníci budou provádět dechová cvičení po dobu 10 minut. Vzorky slin budou odebírány po 5 a 10 minutách dechového cvičení do zkumavek označených BE-1, BE-2. Každý jedinec tedy poskytne následujících pět vzorků slin: + (čas 0), om chanting (C-1 a C2) a dechová cvičení (BE-1 a BE-2).

Kontrolní skupina V případě kontrolní skupiny budou subjekty sedět tiše po stejnou dobu jako skupina CB. Vzorky slin budou odebírány ve stejných časových bodech (v 5minutových intervalech po dobu 20 minut) jako skupině CB.

Přibližný celkový čas pro celý protokol bude následující:

Úvod a dotazník - 10 minut Instrukce ke zpívání, dechovému cvičení (skupina CB) nebo klidnému sezení (kontrolní skupina) a odběr vzorku slin - 10 minut (skupina CB) nebo 5 minut (kontrolní skupina) Odběr bazálního vzorku - 1 minuta Om Chanting - 10 minut dechové cvičení - 10 minut Jakákoli další otázka ze strany subjektu - 2-3 minuty Celková doba schůzky pro subjekt = přibližně 45 minut (CB skupina) 40 minut (kontrolní skupina) Za čas účastníků studie a případné nepříjemnosti finanční kompenzace bude poskytnut.

Zpracování vzorků Umístěte odebrané vzorky slin na led. Pomocí sterilních technik přeneste sliny do centrifugačních zkumavek a měřte množství každého vzorku. Počet vzorků odebraných z každého vzorku v každém kroku experimentu se může lišit. Vzorky z jednotlivých zkumavek zpracujte odděleně, aniž byste shromáždili jakýkoli vzorek. Vypočítejte celkový objem slin během normální klidové fáze, během zpěvu a během dechového cvičení. Vzorky skladujte při -80 °C až do analýzy. Po analýze dat budou vzorky vyřazeny.

Enzymově vázaná imunoanalýza Kvantifikujte hladiny NGF v každém vzorku pomocí enzymové imunoanalýzy za použití komerčních souprav podle pokynů výrobce (Promega). Všechna činidla nezbytná k provedení experimentu ELISA jsou součástí sady. Další činidla, pokud existují, a čtečka ELISA jsou pro PI k dispozici v místnosti STB 511.

Správa dat Všechna data studie shromážděná od účastníků PI budou vložena do databáze REDCap vyvinuté s pomocí biostatistika projektu. REDCap (Research Electronic Data Capture) je sada softwarových nástrojů a metodologie pracovních postupů pro elektronický sběr a správu dat z výzkumu a klinických studií, která je dostupná výzkumným pracovníkům MUSC. Výsledkem iterativního procesu vývoje a testování je dobře naplánovaná strategie sběru dat pro jednotlivé studie, která usnadňuje zadávání dat, kontrolu úprav a případnou statistickou analýzu. Základní databáze je hostována v datovém centru MUSC a systém je chráněn přihlášením a šifrováním Secure Sockets Layer (SSL).

Statistická analýza Statistická analýza bude provedena pod vedením biostatistika, který na vývoji této studie spolupracoval s PI. Zpočátku budou k charakterizaci účastníků studie použity deskriptivní statistiky s ohledem na demografické údaje, jakékoli relevantní klinické charakteristiky a měření NGF na začátku a v průběhu času. Skupinové rozdíly v demografických údajích a dalších výchozích proměnných budou podle potřeby zkoumány pomocí t-testů, chí kvadrátů a Fisherových exaktních testů. Tato studie je určena k získání předběžného důkazu o účinnosti těchto cvičení (zpívání a/nebo dýchání vs. kontrola v klidu) ke stimulaci slinného NGF; jako takové nebude prováděno žádné formální testování hypotéz. Místo toho budou použity obecné lineární smíšené modely (GLMM) k získání odhadů (a jejich příslušných 95% intervalů spolehlivosti) skupinových rozdílů v průběhu času s ohledem na hladiny NGF. GLMM jsou ideální pro analýzy zahrnující variabilitu mezi subjekty a uvnitř subjektu a jsou zvláště užitečné pro návrhy studií s opakovanými měřeními, jako jsou ty, které se používají pro tuto navrhovanou studii. Protože se předpokládá, že věk ovlivňuje NGF, bude věk zahrnut jako kovariát ve všech modelech. Budou uvažovány lineární, kvadratické a kubické efekty času. Budou zkoumány různé typy chybových kovariančních struktur a hodnoty Akaike Information Criterion budou použity k výběru nejvhodnějšího GLMM. Použití GLMM nám umožní charakterizovat typickou trajektorii měření NGF v průběhu času v obou experimentálních podmínkách a také nám poskytne příležitost porovnat zpěv versus dechová cvičení v rámci skupiny CB. Výsledky tohoto typu statistického modelování budou cenné pro plánování (externě financovaných) budoucích, větších a definitivních studií.

Odůvodnění Velikost vzorku Protože nebude prováděno žádné formální testování hypotéz, statistická síla není pro tento návrh relevantní; zdůvodnění velikosti vzorku je tedy založeno na přesnosti našich odhadovacích procesů a na zkušenostech spojených se zařazováním, pozorováním a měřením subjektů v této studii a také s prováděním laboratorních testů co nejúčinnějším způsobem. Mít n=10 subjektů v každé experimentální skupině (pro celkem n=20 subjektů) nám umožní provést předběžné odhady měření NGF v průběhu času v každé skupině. S n=10 subjektů na skupinu se 95% intervaly spolehlivosti kolem skupinových průměrných odhadů rozšíří o ~0,6 směrodatné odchylky v obou směrech a 95% intervaly spolehlivosti kolem průměrných odhadů skupinových rozdílů prodlouží ~0,9 směrodatné odchylky v obou směrech. S n=10 na skupinu také lépe porozumíme ochotě subjektů být randomizováni v tomto typu studie komplementární a alternativní medicíny a nejlepším technikám spojeným s prováděním intervence zpěvu a dechových cvičení.

E. OCHRANA LIDSKÝCH PŘEDMĚTŮ

1. Rizika pro subjekty Této studie se zúčastní 20 subjektů, mužů i žen, kteří jsou ve věkové skupině 18 let a více. Tento protokol se bude skládat z jedné návštěvy, individuálních sezení pro jednotlivého účastníka. Tato cvičení nepředstavují pro účastníky žádná fyzická, psychická ani sociální rizika. Porušení důvěrnosti může být jedním z potenciálních rizik, protože Dotazník shromažďuje informace o zdraví subjektů. Účastníci se mohou cítit mírně nepohodlně, když plivají nebo slintají v přítomnosti jiného jedince. Účastník může mít pocit, že cvičení předem nezná nebo může mít pocit, že není plně schopen dodržovat pokyny ke cvičení.

   Ochrana proti rizikům Instruktor se bude snažit zajistit, aby se účastníci cítili pohodlně a pohodlně. Všechny informace shromážděné ve studii budou považovány za důvěrné a budou uloženy na zabezpečených serverech, jak je popsáno výše. Práce vytvořené v této studii obsahují potenciální osobní informace. Tyto dokumenty budou zabezpečeny v uzamčené skříni patřící PI umístěné v místnosti 625 STB v MUSC. Účastníci budou identifikováni identifikačním číslem ve všech dokumentech, údajích a ve vzorcích slin. Informovaný souhlas je spojnicí mezi identifikačním číslem účastníka a jeho jménem. Odebrané vzorky slin budou zajištěny v mrazáku -80 stupňů se zámkem v místnosti STB 213 a ihned po analýze dat zlikvidovány. Dechová cvičení a zpívání jsou mírné formy cvičení a nepředstavují pro účastníky žádná zdravotní rizika. Účastníci studie nebudou kontaktováni pro další studii.

2. Potenciální zdravotní přínosy pro subjekty Zejména jógové dýchání a jóga obecně jsou dobrými cvičeními pro zdravý život. Několik studií ukazuje, že jógové dýchání snižuje stres a zlepšuje kvalitu života u více skupin pacientů a u jinak zdravých jedinců. Na konci studie se subjekty ve skupině Chanting/Dreathing Exercise mohly cítit fyzicky i psychicky lépe kvůli neurotrofickým účinkům. Tyto subjekty se nakonec učí nové techniky z jiné kultury (mezikulturní zkušenost) k regulaci dýchání, které mohou denně praktikovat podle své vůle, protože nepřetržité cvičení by jim mohlo dlouhodobě prospět.