Prospektiv brystkreftbiobank (PBCB)

A. Tidlig påvisning av systemiske tilbakefall ved brystkreft.

WP 1. Analyse av primærtumor.

Analyse av primærtumor og metastaser (Patologigruppe). I denne arbeidspakken vil både DNA og RNA fra primærsvulstene til 125 høyrisiko (Luminal-B) pasienter bli analysert ved neste generasjons sekvensering (NGS). Videre vil etterforskerne også analysere DNA og RNA fra de tilgjengelige metastatiske lesjonene (for øyeblikket tilgjengelig materiale for 3/8) som har dukket opp, og vil dukke opp i løpet av studieperioden.

MiRNA og mRNA vil bli profilert ved hjelp av PureLink™ miRNA Isolation Kit (Invitrogen), Dynabeads mRNA direkte mikrosett (Ambion) og Ion total RNA-seq kit V2 (Life Technologies) på vårt Ion Proton NGS instrument. Bioinformatiske analyser av sammenkoblede mRNA- og mikroRNA-ekspresjonsprofiler vil bli brukt for å avdekke differensielt uttrykte mikroRNA-er mellom pasienter med og uten residiv under behandling. Disse dataene vil bli knyttet til våre tidligere studier og brukt til å identifisere målkandidater for mikroRNA-analyse i eksosomer og TEP-er.

I tillegg vil NGS også bli utført på DNA fra primærsvulstene og metastaser for å verifisere DNA-mutasjoner spesielt i ER og andre kjente onkogener, inkludert de som er undersøkt i WP3. DNA-sekvenseringen vil bli utført ved å bruke Oncomine Comprehensive Assay. Dette er en amplikonbasert tilnærming som analyserer hotspot-SNV-er, indeler og CNV-er. Disse analysene vil gi oss en biologisk forståelse og bakgrunnskunnskap for hver enkelt svulst, og disse datasettene kan også sammenlignes med nylig publiserte data.

WP 2. Sirkulerende tumorceller (CTC).

Sirkulerende tumorceller (onkologisk gruppe) Sirkulerende tumorceller anrikes fra perifere blodprøver ved tetthetssentrifugering og påfølgende immunomagnetisk utarming av leukocytter. Onkologigruppen har nylig utviklet og publisert en ny uttømmingsmetode, kalt MINDEC (Multi-marker Immunomagnetic Negative Depletion Enrichment of CTCs), som har overlegne utvinnings- og berikelseshastigheter. RNA og DNA isoleres samtidig fra den anrikede fraksjonen, for å tillate CTC-deteksjon ved både RNA- og DNA-baserte tilnærminger. Spesifikke mRNA-markører, med høye nivåer i tumorceller og lave nivåer i normale leukocytter, blir pre-amplifisert og kvantifisert ved sanntids-PCR som surrogatmarkører for CTC-er. Både epitelspesifikke markører og markører relatert til epitelial mesenkymal overgang er en del av markørpanelet. Til nå har etterforskerne analysert 170 påfølgende blodprøver fra den større PBCB-kohorten, beriket med MINDEC-prosedyren og funnet bevis for CTC i omtrent 20 % av prøvene (fra både lav- og høyrisikopasienter), et funn som oppmuntrer oss å fortsette dette prosjektet. Etterforskerne har også analysert blodprøver fra 30 friske kvinnelige frivillige for sammenligning. Alle innsamlede blodprøver fra 125 høyrisikopasienter vil bli analysert (rundt 575 prøver). Tilstedeværelsen eller nivået av CTC i de analyserte prøvene vil senere bli sammenlignet med kjente prognostiske faktorer, behandlingseffekt og sykdomsutfall.

WP 3. sirkulerende tumor-DNA (ctDNA).

Tumorspesifikke mutasjoner kan brukes som markører for ctDNA fordi de ikke er tilstede i normale celler og normalt plasma-DNA. Onkologigruppen har nylig vist den kliniske relevansen av ctDNA-målinger ved kreft i bukspyttkjertelen. Etterforskerne vil nå måle ctDNA-nivåer i plasmaprøver fra høyrisiko brystkreftpasienter ved målrettet neste generasjons sekvensering. Den nylig utgitte «Oncomine breast cfDNA assay» (Thermo Fisher) skal brukes til å oppdage mutasjoner i et panel på ti gener som ofte er mutert i brystkreft. Analysen er basert på molekylær strekkoding av maler og tillater reproduserbar påvisning av mutasjoner ned til 0,1 % kontrollprøver. Tar man hensyn til den lave konsentrasjonen av cellefritt DNA (=cfDNA) i plasma (typisk 10 ng per ml blod), anses en sensitivitet på 0,1 % som tilstrekkelig. Sekvenseringen vil bli utført på vårt Ion Proton NGS-instrument (Life Technologies). Den preoperative blodprøven og årlige oppfølgingsprøver fra de 125 høyrisikopasientene vil bli analysert i denne WP. Blodprøver fra 30 friske kvinnelige frivillige er allerede samlet inn og vil bli analysert for sammenligning.

Tilstedeværelse og nivå av tumorspesifikke mutasjoner vil bli analysert i forhold til behandlingseffekt og sykdomsutfall. Mutasjonsprofilen i primærtumorbiopsien og plasmaprøvene vil bli sammenlignet for å avdekke potensiell heterogenitet. I tillegg vil longitudinelle endringer i mutasjonsprofilen til ctDNA sammenlignes med sykdomsutvikling for å potensielt kaste litt lys over de biologiske mekanismene som forårsaker behandlingsresistens eller sene sykdomstilfall.

WP 4. mikroRNA (miRNA)

Sirkulerende mikroRNA fra eksosomer og TEP-er (patologigruppen) Totalt RNA vil bli isolert fra eksosomer og TEP-er fra blodprøvene tatt før og under behandling. Etterforskerne har nylig etablert metoder for isolering av totalt RNA fra eksosomer (ved bruk av exoRNeasy serum Plasma kit (Qiagen) og mirCURY RNA isolasjonssett (Exiqon)) og TEPs. Ved å bruke den nevnte protokollen er totalt RNA fra eksosomer allerede isolert fra alle de 125 høyrisikopasientene første besøk/før behandling, i tillegg fra de siste blodprøvene som ble samlet inn fra disse pasientene, vil total RNA bli isolert fra både eksosomer og TEP-er. Videre vil mikroRNA-profilen bli utført på det isolerte RNA ved bruk av rørledningen og plattformen som allerede er etablert for vårt Ion Proton-instrument. Disse profilene vil bli sammenlignet med den bioinformatiske analysen av mRNA-miRNA-profiler fra primærtumoren (WP1) og prøvene tatt før behandling. MikroRNA som ikke er tilstede i vevsprøven og/eller i blodprøven før behandling, men som forekommer i blod rett før et tilbakefall oppstår, kan deretter spores i ettertid i tidligere blodprøver for å se hvor følsomme disse mikroRNA-ene er for å forutsi behandling motstand. MikroRNA-profilen fra TEP-er vil bli sammenlignet med mikroRNA-profilen fra eksosomer og med mRNA-miRNA-profilene fra primærtumoren (WP1, for å se om TEP-er reflekterer svulsten og om de har potensial til å forutsi tilbakefall.

WP 5. Metabolomics

Metabolomics er studiet av små molekyler som omfatter substrater, mellomprodukter og sluttprodukter av cellulær metabolisme, som aminosyrer, sukker og små organiske syrer. Kreftcellenes metabolske tilstand er vesentlig endret sammenlignet med normale celler, et faktum som kan brukes til diagnostiske formål. Spesifikke metabolske signaturer fra tumorvev gir tilleggsinformasjon for bestemmelse av brystkreftundertyper og prediksjon av utfall1. For eksempel er økte tumorlaktat- og glysinnivåer relatert til dårlig prognose hos pasienter med østrogenreseptor (ER) positiv kreft. Metabolomiske analyser av primærtumorer har også vist prediktiv verdi i forhold til neoadjuvant behandling av pasienter med lokalt avansert sykdom.

Sirkulerende metabolitter har også vist seg å gi prognostisk informasjon ved operabel brystkreft og ytterligere stratifisere risiko innenfor eksisterende genetisk bestemte risikokategorier. Viktigere, metabolomiske endringer kan oppstå direkte eller indirekte fra mikrometastatisk sykdom, snarere enn primær svulst. Nylig har etterforskerne vist at systemiske laktat- og pyruvatnivåer forutsier dårligere utfall hos pasienter med opererbare ER-positive brystkreft. Tumor-tilstøtende vev og immunologiske responser kan også bidra til en endret metabolomisk profil. Det er også bevis på at metabolsk profilering kan brukes til pasientovervåking i enkelte kreftformer, selv om slike bevis fortsatt mangler i brystkreft. Derfor har etterforskerne til hensikt å undersøke om postoperativ overvåking ved hjelp av metabolsk profilering i blod er nyttig for tidlig påvisning av residiv av brystkreft.

WP 6. Integrativ molekylær overvåking for residivdeteksjon

Ny teknologi har revolusjonert nivået av biologisk informasjon som kan fås fra kliniske prøver, representert ved de nye "omics"-begrepene genomikk, transkriptomikk, metabolomikk, etc. Tilgjengeligheten av slike store datasett, selv i det offentlige domene, har oppmuntret utviklingen av integrerende metoder som kan trekke ut viktig informasjon fra flere kombinerte datakilder. Overraskende nye forbindelser mellom omics-datasett har blitt avslørt ved slike tilnærminger, eksemplifisert ved en kobling mellom cellefri DNA-fragmentering og genuttrykk46. Følgelig har vår kunnskap om brystkreft også blitt utvidet med integrative tilnærminger, noe som har resultert i en mer omfattende forståelse av sykdommen. Den prognostiske underklassifiseringen av brystkreft er for eksempel blitt raffinert og nye tumorspesifikke antigener identifisert. Integrerte molekylære data har til og med vist seg å ha en høyere prognostisk kraft enn separate molekylære nivåer i brystkreft. En kombinert analyse av det genetiske (ctDNA), transkriptomiske (miRNA) og metabolomiske datanivåer i perifere blodprøver er derfor planlagt i det aktuelle prosjektet for å maksimere deres felles biomarkørpotensiale i operabel brystkreft.

Prøvestørrelsesberegninger.

Etterforskerne utførte prøvestørrelsesberegninger ved å bruke SPSS Sample Power-programvare. Disse beregningene viste at 125 høyrisikopasienter burde være tilstrekkelig til å gi en log rank teststyrke på 80 %, når man tester den prognostiske verdien av ctDNA/CTC-deteksjon før operasjon. Prøvestørrelsesberegningene var basert på den kvalifiserte antakelsen om at gjennomsnittlig 5-års overlevelsesrate i høyrisikogruppen er 90 %, mens den er 75 % og 95 % i henholdsvis ctDNA/CTC positive og negative undergrupper. Av de estimerte 125 pasientene ble 30 antatt positive for ctDNA/CTC og 95 negative.

-------------------------------------------------- -------------------------------------------------- -----

B. Forbedre medikamentovervåking av tamoxifen ved brystkreft

Omtrent 75 % av all brystkreft tilhører de luminale subtypene, som uttrykker hormonreseptorene østrogenreseptor og progesteronreseptor. Disse pasientene behandles med anti-østrogene legemidler; tamoxifen og/eller aromatasehemmere. De to mest aktive tamoxifen-metabolittene er Z-4OHtam og Z-4OHNDtam (Z-endoxifen) har 30-100 ganger høyere affinitet for ER enn tamoxifen. Disse metabolittene utgjør til syvende og sist den blokkerende effekten på ER-nivå med sikte på å utrydde mikrometastatisk sykdom og er ansvarlige for den forbedrede overlevelsen etter etableringen av denne adjuvante systemiske behandlingen. Direkte måling av disse metabolittene omgår alle forstyrrelser fra mangfoldet av CYP2D6-aktivitet, dvs. alternative metabolske veier, adherens til stoffet og hemmende medikamentinteraksjoner. Vår nye LC / MS-MS-metodikk tar hensyn til alle de ovennevnte variablene og gir en funksjonell utlesningsrapport av serumnivået til de aktive tamoxifen-metabolittene hos den enkelte pasient. Denne metoden kan også skille mellom de inaktive og aktive isomerene av Endoxifen og 4-OHtam, som er de mest aktive ER-blokkerende metabolittene til tamoxifen. I samarbeid med Oslo Breast Cancer Research Group har etterforskerne nylig vist i en retrospektiv observasjonsstudie at pasienter med lave serumkonsentrasjoner av Z-4OHtam < 3,26 nM eller Z-Endoxifen < 9,00 nM (ca. 12 % av alle pasienter) har signifikante dårligere brystkreftspesifikk og total overlevelse enn pasienter med serumkonsentrasjoner over disse tersklene (justert HR = 4,3; CI95 = 1,9-13,6) (røde kurver i figur 4). Pasienter med et svært høyt nivå av disse metabolittene (omtrent 12 % av pasientene) hadde ingen brystspesifikke endepunkter. Nå må etterforskerne validere denne oppdagelsen i uavhengig pasientmateriale. Hvis validert, vil dette være til direkte klinisk fordel for 25 % av akutte pasienter + brystkreftpasienter som planlegger adjuvant tamoxifen-behandling. Slik terapeutisk medikamentovervåking (TDM) kan identifisere risikopasienter med utilstrekkelige nivåer av aktive tamoxifen-metabolitter. Dette kan føre til doseøkning eller bytte til en alternativ endokrin behandlingsform hos disse pasientene. Pasienter med svært høye metabolittnivåer kan fortsette på tamoxifen og trenger ikke bytte til en aromatasehemmer.

Dermed kan TDM vise seg å være et paradigmatisk skifte i endokrin behandling av ER-positiv brystkreft. Viktigere er at avstanden fra "benk til seng" i denne studien er svært kort på grunn av våre nylige funn, en gjennomførbar metode og over 30 års erfaring med tamoxifen i klinisk setting.

-------------------------------------------------- -------------------------------------------------- -----

C. Tumormikromiljø i brystkreft - fettstromal immuninfiltrasjon og interaksjon med tumor i vekstsonen

Bakgrunn: Brystkreft er fortsatt den vanligste krefttypen blant kvinner i den vestlige verden, inkludert Norge. Årlig diagnostiseres rundt 3500 nye norske brystkreftpasienter. I løpet av de siste 50 årene har forekomsten av brystkreft i Norge mer enn doblet seg. Interessant nok har overvekt og fedme økt alarmerende i løpet av samme tidsramme. Molekylær subtyping av brystkreftsvulster har forbedret forståelsen av dens iboende biologi. Dette har åpnet for en mer personlig behandlingstilnærming og forbedret resultatet for brystkreftpasienter de siste 20 årene.

I tillegg til den molekylære subtypingen består diagnostikken av brystkreft i dag av stadieinndeling (gjennom TNM-klassifiseringssystemet) og mikroskopisk undersøkelse av patolog. Det er økende bevis for den prognostiske verdien av å evaluere tumormikromiljø (f. tumorinfiltrerende lymfocytter (TIL) som en del av diagnostikk ved brystkreft, men foreløpig er dette ikke implementert i klinisk praksis. Høye antall TIL-er er sterkt assosiert med god prognose hos pasienter med trippelnegativ brystkreft, men har ikke vist noen slik sammenheng ved luminal brystkreft. Makrofager i brystfettvev skiller seg inn i to distinkte fenotyper, ofte klassifisert som M1 og M2 med en økning av sistnevnte ved brystkreft. M1 angriper og fagocyterer kreftceller, mens M2 har anti-inflammatoriske egenskaper og har vist seg å ha svulstfremmende funksjoner.

Dette prosjektet vil øke vår kunnskap om samspillet mellom den primære brystsvulsten og immuncelleinfiltrasjonen i det juxta-tumorale fettvevet. Våre funn vil være korrelert til molekylære brystkreftsubtyper, nærhet til svulst, markører for spredning, og til slutt til klinisk utfall. Forskere begrunner at denne kunnskapen vil gi nye prediktive mål for immunmodulerende adjuvant kreftterapi. Dette PhD-prosjektet har tre sammenhengende arbeidspakker (WP) med det endelige målet å identifisere markører for betennelse i juxta-tumoralt fettvev som er relevante i klinisk vurdering av adjuvant behandling av brystkreft. I WP 1 og 2 vil det fenotypiske og genomiske landskapet av juxta-tumoralt fettvev karakteriseres, og i WP 3 vil undersøkelsene undersøke om denne kunnskapen kan forutsi klinisk utfall.

Prosjektet er basert på et sterkt regionalt samarbeid mellom Haukeland universitetssykehus (HUH) og Stavanger universitetssykehus (SUH). For det aktuelle prosjektet har forskerne på en systematisk måte samlet inn fett- og tumorvev fra 30 påfølgende brystkreftpasienter som gjennomgår mastektomi ved SUH. Kirurgiske prøver av brystet sendes uten forsinkelse til patologen som under morfologisk kontroll prøver relevant vev fra den invasive fronten og kjernen (0,5x1x1 cm) av primærsvulsten. Kontroller fra normalt brystvev (2000 mg) fra den fjerne kontralaterale kvadranten vil også bli samlet inn og verifisert morfologisk av patologen. Vevet samles i duplikatpar. En av prøvene hurtigfryses umiddelbart i flytende nitrogen for konservering, mens den andre halvdelen av hvert par konserveres i formalin og fikseres i parafin (FFPE). I tillegg vil tre par av prøver av fettvev (hver på 1x1x1 cm) med økende avstand fra tumorgrensen utgjøre en gradient av fettvev fra den invasive fronten av tumorområdet. Gradientene som samles blir også øyeblikkelig hurtigfrosset i flytende nitrogen og halvparten av hvert par lagres som FFPE. Undersøkelsene har utført en pilotstudie som bekrefter et tilstrekkelig RNA-utbytte fra de frosne vevsprøvene for RNA-sekvensering.

Vevet er samlet inn som en del av den generelle forskningsbiobanken, Prospective Breast Cancer Biobank (PBCB) (REK# 2010/1957), et pågående biobankprosjekt.

Den retrospektive Stavanger-kohorten består av alle brystkreftpasienter diagnostisert med første debuterende invasiv brystkreft ved patologisk avdeling, Stavanger Universitetssykehus, mellom 1993 - 2004. Siden SUH er det eneste sykehuset i regionen er dette en ekte populasjonsbasert biobank, allerede inkludert er klinikopatologiske data som: gradering, stadium, TNM, behandlings- og spredningsmarkører (Ki-67, PPH3/MAI); siste kliniske oppfølging fant sted i 2016.

Undersøkelsene har fire hovedhypoteser relatert til betennelse og immuncelleinfiltrasjon i brystkreft:

1. Det juxta-tumorale fettvevet nær tumorgrensen viser et økt nivå av betennelse og immuncelleinfiltrasjon.
2. Betennelsen og immuncelleinfiltrasjonen demper med økt avstand fra tumorgrensen.
3. Det er forskjeller i betennelse og immuncelleinfiltrasjon mellom ulike undertyper av brystkreft (Luminal A, Luminal B og Basal lignende).
4. Økt betennelse og immuncelleinfiltrasjon er korrelert til uønsket klinisk utfall (dvs. tilbakefall av sykdom).

4.1 STUDIEDESIGN, METODER OG ANALYSER

Undersøkelsene har fire hovedhypoteser relatert til betennelse og immuncelleinfiltrasjon i brystkreft:

1. Det juxta-tumorale fettvevet nær tumorgrensen viser et økt nivå av betennelse og immuncelleinfiltrasjon.
2. Betennelsen og immuncelleinfiltrasjonen demper med økt avstand fra tumorgrensen.
3. Det er forskjeller i betennelse og immuncelleinfiltrasjon mellom ulike undertyper av brystkreft (Luminal A, Luminal B og Basal lignende).
4. Økt betennelse og immuncelleinfiltrasjon er korrelert til uønsket klinisk utfall (dvs. tilbakefall av sykdom).

WP 1: MORFOLOGISK OG GENOMISK KARTLEGGING AV IMMUNCELLE INFILTRASJON I FETTVEV OMGÅENDE BRYSTKREFT

Bakgrunn: Betennelse er en viktig tilrettelegger for tumorutvikling (16). Fettvev nær brystkreft har vist seg å ha økt immuncelleinfiltrasjon, men det er ennå ikke kjent hvordan dette forholder seg til molekylære subtyper og/eller nærhet til svulst. Forskerne vil bruke IHC og RNA-sekvensering for å evaluere nivået av betennelse, infiltrasjon av immunceller og immungenekspresjonssignaturer i fettvevet rundt brystkreft.

Design: Prospektiv eksplorativ studie Pasienter, materiale og kraftberegning: Fettvev samles inn fra de prospektivt innsamlede mastektomiprøvene. Vevsprøver samles inn fra tre forskjellige molekylære undergrupper (Luminal A, Luminal B og Basal lignende brystkreft), 10 i hver gruppe. Kjernebiopsier samles i en gradient med økende avstand fra tumorgrensen (fig. 1). Norsk Genomics Consortium (NGC) har bekreftet at prøvestørrelsene som er basert på seleksjon i spesifikke brystkreftsubtyper er tilstrekkelig for statistisk kraft.

Metoder: Objektglass av formalinfiksert vev fra svulst, invasivt front- og fettvev (fig. 1) vil bli farget med IHC og antistoffer mot immunceller (totale immunceller, CD45; T-celler, CD3, CD8, FoxP3; myeloide celler, CD68 , HLA-DR). Objektglassene vil bli evaluert ved mikroskopi og resultatene vil bli korrelert til molekylære undergrupper av brystkreft, lokalisering i forhold til tumor- og spredningsmarkører (dvs. Ki67, PPH3 og MAI). Parallelt vil undersøkelsene utføre RNA-sekvensering på frossent vev samlet fra de samme vevsprøvene som beskrevet ovenfor. Flere analysemetoder vil bli brukt på RNAseq-dataene. Bortsett fra å analysere dataundersøkende, spesifikke analysealgoritmer inkludert dekonvoluterende immunceller (ABIS, CIBERSORTx) og mer spesifikt se på tumorimmunsignaturer (TIP-analyse), blant andre.

Forventet resultat: Forskerne forventer å finne økt betennelse og immuncelleinfiltrasjon i det juxta-tumorale fettvevet og endret uttrykk for inflammatoriske gensignaturer som undersøkelsene kan undersøke videre i WP 2.

WP 2: VURDERING AV INFLAMMATORISK REAKSJON I JUXTA-TUMORALT FETTVEV I BRYSTKREFT VED HJELP AV IMMUNOHISTOCHEMI OG AVLÆGENDE MASSE-CYTOMETRI.

Bakgrunn: Brystkreftceller samhandler med det omkringliggende vevet og forårsaker betennelse og immuncelleinfiltrasjon i svulsten og fettvevet. Bildemassecytometri har vist at immuncelleinfiltrasjon i svulster korrelerer med prognose, men foreløpig er det ingen studier som undersøker om fettvevet rundt svulsten også viser strukturelle mønstre av immuncelleinfiltrasjon. Derfor vil undersøkelsene undersøke fettvevet rundt brystkreftsvulster ved hjelp av Hyperion™ Imaging Mass Cytometri.

Design: Prospektiv eksplorativ studie Pasienter, materiale og kraftberegning: Vevsprøver samles inn fra 30 prospektivt oppnådde mastektomiprøver med tre forskjellige molekylære undergrupper (Luminal A, Luminal B og Basal like brystkreft), 10 i hver gruppe. Fettvev samles i en gradient vekk fra svulsten og fra den kontralaterale kvadranten som en kontrollprøve (fig. 2). En prøvestørrelse på 30 pasienter anses å være tilstrekkelig for en eksplorativ studie av denne typen.

Metoder: Et Hyperion™ IMC-panel med opptil 50 unike antistoffer vil bli utviklet basert på et allerede eksisterende og validert panel tilgjengelig ved UoB-kjerneanlegget som forskerne tidligere har brukt i andre prosjekter. Det tilgjengelige panelet vil bli ytterligere utvidet basert på funn fra WP 1 og først validert på "ikke-essensielle" brystvevsprøver før de brukes på de ovenfor beskrevne studieprøvene. Ved å bruke Hyperion™ IMC har forskerne til hensikt å analysere nivåene av inflammatorisk reaksjon i det juxta-tumorale fettvevet. IMC-data vil bli analysert med histoCAT+, MAV og FlowJo (vanligvis brukt til flowcytometridataanalyse, men også svært egnet for høyparameter-avbildningsanalyse). Videre vil forskerne kunne bruke genekspresjonsdata for kjente og nye faktorer, identifisert i WP 1, og visualisere om uttrykket er generalisert eller kompartmentalisert i fettvevet. Normalt fettvev fra den kontralaterale kvadranten vil bli brukt som kontroll. For å undersøke påvirkningen av BC på betennelsen av juxta-tumoralt fettvev av de ulike molekylære subtypene mer detaljert, har forskerne også til hensikt å farge vev fra tre vevssegmenter som strekker seg fra svulsten for å fastslå om nivåene avhenger av avstanden fra svulsten eller den molekylære subtypen (fig. 1). Betennelsen i det juxta-tumorale fettvevet vil også bli vurdert morfologisk ved bruk av IHC. Dette vil tillate oss å velge regioner av interesse å undersøke ved hjelp av IMC.

Forventet resultat: Forskerne forventer å finne økt betennelse og immuncelleinfiltrasjon i fettvevet nær svulsten og å identifisere nye biomarkører i fettvevet som muliggjør undersøkelse av den kliniske betydningen i WP 3.

WP 3: INFLAMMATORISK REAKSJON I JUXTA-TUMORALT FETTVEV VED BRYSTKREFT OG KLINISK UTSLAG.

Bakgrunn:

Immunhistokjemi er en hjørnestein i brystkreftdiagnostikk og fungerer som hovedmodaliteten for å identifisere molekylære undergrupper av brystkreft og spredningsmarkører som Ki-67. Dette er avgjørende for å avgjøre hvilket behandlingsregime som er best egnet for den aktuelle pasienten. Heterogenitet i tumorvevet (både tumorceller og infiltrerende immunceller) har vært knyttet til forskjeller i klinisk utfall, men det er ennå ikke kjent om det samme gjelder for fettvevet som omgir svulsten. Derfor vil undersøkelsene undersøke juxta-tumoralt fettvev for inflammasjon og immuncelleinfiltrasjon og korrelere dette med klinisk utfall hos brystkreftpasienter.

Design: Klinisk observasjonsstudie

Pasienter og metoder: Et antall på 3500 brystkreftpasienter samles i en biobank med median oppfølgingstid på 15 år. Et stort utvalg av vevsprøver fra disse pasientene vil bli vurdert med hensyn til immunceller i fettvevet og biomarkører oppdaget i WP 1 og 2 ved bruk av IHC. Prøvene vil bli stratifisert i tre grupper i henhold til molekylære undergrupper (dvs. Luminal A, Luminal B og Basal som brystkreft). Vevsglassene vil bli analysert og resultatene korrelert med klinisk utfall fra pasientjournalene (tilgang til journaler er allerede godkjent av REK). Ved å bruke Cox proporsjonal hazard ratio og log-rank test, vil undersøkelsene evaluere effekten økt betennelse i fettvev har på pasientens overlevelsesevne.

Kraftberegning: Undersøkelsene estimerte testkraften til forskjellen i residivfri overlevelse mellom pasienter som var positive og negative for juxta-tumorbetennelse, vurdert av IHC og IMC. Effektmålet er hazard rate (HR) som beregnes ved Cox regresjonsmetoden. For eksempel: 1000 pasienter med en residivrate på 15 % vil ha opprettet minst 150 endepunkter. Hvis betennelsesraten er 20 %, vil forskerne ha 80 % kraft til å oppdage en overlevelsesforskjell med et hazard ratio (HR) på 1,80 eller høyere.

Forventet resultat: Denne siste arbeidspakken er utformet for å gi prinsippbevis på at det er mulig å inkludere histologisk undersøkelse av juxta-tumoralt fettvev som en del av brystkreftdiagnostikk. I et lengre perspektiv tar undersøkelsene sikte på å identifisere nye spesifikke biomarkører for immuninfiltrasjon i fettvev som korrelerer med uønsket utfall hos brystkreftpasienter. Slike biomarkører kan tjene som prediktive verktøy for å identifisere pasienter som er kvalifisert for adjuvant antiinflammatorisk eller immunmodulerende behandling.

-------------------------------------------------- ----------------------------------------------------

D. Overvåke bivirkninger, QoL, depresjon, tretthet og arbeidslivsdeltakelse Bakgrunn

Behandling av brystkreft omfatter all kirurgi, kjemoterapi, strålebehandling og ulike målrettede terapialternativer som antiøstrogen og anti HER-2 terapi. Disse behandlingsalternativene skaper plagsomme bivirkninger både i et kortsiktig og langsiktig perspektiv. Viktigere, mer komplekse sammenhenger mellom onkologiske terapimodaliteter og subjektive helseplager hos brystkreftpasienter er nylig oppdaget. Tretthet, angst og depresjonsskår er sannsynligvis funksjonelle avlesninger av den totale behandlingsbyrden. Behandlingen mot kreft har også en betydelig innvirkning på livskvalitet og sosiale aspekter for kreftoverlevere som strekker seg til deltakelse i arbeidslivet. Sykefravær (SL) fem år etter brystkreftdiagnosen er mer avhengig av sosiale faktorer enn av sykdom (2). Derfor rammer brystkreft kvinnene to ganger; først sykdomsbyrden så de sosioøkonomiske bekymringene. Brystkreftoverlevere har nesten 3 ganger høyere risiko for å motta uførepensjon (DP) sammenlignet med kreftfrie pasienter i en retrospektiv registerbasert studie (3). Imidlertid var denne studien basert på for det meste forlatte onkologiske behandlingsregimer.

Mål

Målet med denne studien er å identifisere risikofaktorer for å bli en langsiktig SL-, WAA- eller DP-mottaker ved hjelp av en dybdegående kvalitativ analyse og blandet metode ved å triangulere PROM-data, kliniske/biologiske data og NAV-dataene. Bruk av NAV-data som endepunkt vil gi verdifull informasjon til klinikere og allmennleger som kan optimalisere oppfølgingen også når det gjelder deltakelse i arbeidslivet. Derfor har etterforskerne et robust studiedesign for å identifisere fiskfaktorer for høye SL-, WAA- og DP-rater. Til syvende og sist har etterforskerne som mål å redusere de økonomiske utgiftene brystkreft genererer for samfunnet.

Studiedesign / materiale og metoder.

Studiedesignet er en observasjonsstudie hvor etterforskerne i denne studien vil kartlegge ratene av og denty fiskfaktorer for høy SL, WAA og DP blant brystkreftoverlevere med oppdaterte behandlingsplaner. Etterforskerne vil følge en 4-trinns translasjonstilnærming:

1. Etterforskerne skal først gjennomføre en eksplorativ kvalitativ studie med dokumentanalyse av helse- og arbeidslivspolitikk i norsk kontekst, kombinert med empiri fra semistrukturerte intervjuer og fokusgruppe med 20 høyrisikopasienter) som skal analyseres tematisk. Det teoretiske rammeverket for dette kvalitative prosjektet er utledet fra symbolsk interaksjonisme der avdekning og forståelse av mening i spesifikke kontekster er et mål. Siden meningsfulle sosiale og profesjonelle interaksjoner er viktige for psykososial rehabilitering av brystkreftindivider, er symbolsk interaksjonisme et passende metodisk rammeverk. Denne kvalitative tilnærmingen vil danne grunnlaget for tilnærmingen i de PROM-baserte og NAV-databaseorienterte studiene nedenfor.

2. NAV- data

   Etterforskerne samarbeider i dag med visedirektør Anneline Christine Teigen og førstekonsulent Günter Olsborg i NAV-Rogaland og Mikrodataseksjonen i Statistisk sentralbyrå (SSB). Målet med dette samarbeidet er å få mer kunnskap om bruken av trygdetjenester blant brystkreftpasienter sammen med NAV-Rogaland-ekspertene og sammen med SSB bruke FD-trygd-databasen for å innhente pålitelige prospektive sosiodemografiske data om SL (både korte og lange). semester), Arbeidsavklaringspenger (WAA) (Arbeidsavklaringspenger) og UP (begge tidsbegrenset)

   og livslang) for hver pasient i denne PerMoBreCan-studien.

3. Pasientrapporterte utfallsmål (PROM)-data innhentes ved baseline og deretter årlig fra alle PerMoBreCan-pasienter. PROM-dataene består av 1.HRQoL-instrumenter (EORTC QLQ-C30,EORTC QLQ-BR23 og FAKTA B), 2.Hospital Anxiety and Depression Scale, HAD, 3. Fatigue-instrumenter Fatique Impact Scale, FIS; Fatugue Severity Scale (FSS) og VAS-fatigue, 4. Bivirkningsspørreskjemaer, 5. Leddsmerter spørreskjema, 6. The Mishel Uncertainty in Illness Scale, MUIS; og 7. Spørreskjema for matvaner og 8.ROMA III-spørreskjemaet for tarmplager (IBD og IBS).
4. Identifikasjon av biomarkør.

Alle pasienter som deltar i denne studien vil bli screenet på sirkulerende biomarkører relatert til tretthet. Disse biomarkørene er på proteinnivå, genetisk ekspresjonsnivå og også på epigenetisk nivå. Vårt langvarige hyggelige samarbeid med prof. Roald Omdal ved Stavanger universitetssykehus, som er klinisk immuolog og transalsjonell utmattelsesforsker, er forpliktet til å gjennomføre disse analysene i sin forskningslab.