Biobancos prospectivos de câncer de mama (PBCB)

A. Detecção precoce de recidivas sistêmicas no câncer de mama.

WP 1. Análise do tumor primário.

Análise de tumor primário e metástases (grupo Patologia). Neste pacote de trabalho, tanto o DNA quanto o RNA dos tumores primários de 125 pacientes de alto risco (Luminal-B) serão analisados ​​por sequenciamento de próxima geração (NGS). Além disso, os investigadores também analisarão DNA e RNA das lesões metastáticas disponíveis (atualmente material disponível para 3/8) que apareceram e aparecerão durante o período do estudo.

MiRNA e mRNA serão perfilados usando PureLink™ miRNA Isolation Kit (Invitrogen), Dynabeads mRNA direct micro kit (Ambion) e Ion total RNA-seq kit V2 (Life Technologies) em nosso instrumento Ion Proton NGS. Análises bioinformáticas de perfis de expressão pareados de mRNA e microRNA serão usadas para revelar microRNAs diferencialmente expressos entre pacientes com e sem recorrências em tratamento. Esses dados serão vinculados aos nossos estudos anteriores e usados ​​para identificar candidatos-alvo para análise de microRNA em exossomos e TEPs.

Além disso, o NGS também será realizado no DNA dos tumores primários e metástases para verificar mutações no DNA, especialmente em ER e outros oncogenes conhecidos, incluindo aqueles examinados em WP3. O sequenciamento do DNA será realizado usando o Oncomine Comprehensive Assay. Esta é uma abordagem baseada em amplicon analisando hotspot SNVs, indels e CNVs. Essas análises nos fornecerão uma compreensão biológica e conhecimento básico para cada tumor individual, e esses conjuntos de dados também podem ser comparados aos dados publicados recentemente.

WP 2. Células tumorais circulantes (CTC).

Células tumorais circulantes (grupo Oncologia) As células tumorais circulantes estão sendo enriquecidas a partir de amostras de sangue periférico por centrifugação de densidade e subsequente depleção imunomagnética de leucócitos. O grupo de oncologia desenvolveu e publicou recentemente um novo método de depleção, denominado MINDEC (Multi-marker Immunomagnetive Negative Depletion Enrichment of CTCs), que apresenta taxas superiores de recuperação e enriquecimento. O RNA e o DNA são isolados simultaneamente da fração enriquecida, para permitir a detecção de CTC por abordagens baseadas em RNA e DNA. Marcadores específicos de mRNA, com altos níveis em células tumorais e baixos níveis em leucócitos normais, estão sendo pré-amplificados e quantificados por PCR em tempo real como marcadores substitutos para CTCs. Tanto marcadores epiteliais específicos quanto marcadores relacionados à transição mesenquimal epitelial fazem parte do painel de marcadores. Até agora, os investigadores analisaram 170 amostras de sangue consecutivas da coorte maior de PBCB, enriquecidas pelo procedimento MINDEC e encontraram evidências de CTCs em cerca de 20% das amostras (de pacientes de baixo e alto risco), uma descoberta que nos encoraja para continuar este projeto. Os investigadores também analisaram amostras de sangue de 30 voluntárias saudáveis ​​para comparação. Serão analisadas todas as amostras de sangue coletadas de 125 pacientes de alto risco (cerca de 575 amostras). A presença ou nível de CTCs nas amostras analisadas será posteriormente comparada a fatores prognósticos conhecidos, efeito do tratamento e resultado da doença.

WP 3. DNA tumoral circulante (ctDNA).

Mutações específicas de tumor podem ser utilizadas como marcadores para ctDNA porque não estão presentes em células normais e DNA plasmático normal. O grupo de oncologia demonstrou recentemente a relevância clínica das medições de ctDNA no câncer pancreático. Os investigadores agora medirão os níveis de ctDNA em amostras de plasma de pacientes com câncer de mama de alto risco por sequenciamento de próxima geração. O recém-lançado "Oncomine mama cfDNA assay" (Thermo Fisher) será usado para detectar mutações em um painel de dez genes que são frequentemente mutados no câncer de mama. O ensaio é baseado no código de barras molecular de modelos e permite a detecção reprodutível de mutações até 0,1% de amostras de controle. Levando em consideração a baixa concentração de DNA livre de células (=cfDNA) no plasma (normalmente 10 ng por ml de sangue), uma sensibilidade de 0,1% é considerada suficiente. O sequenciamento será realizado em nosso instrumento Ion Proton NGS (Life Technologies). A amostra de sangue pré-operatória e as amostras de acompanhamento anual dos 125 pacientes de alto risco serão analisadas neste WP. Amostras de sangue de 30 voluntárias saudáveis ​​já foram coletadas e serão analisadas para comparação.

A presença e o nível de mutações específicas do tumor serão analisados ​​em relação ao efeito do tratamento e resultado da doença. O perfil mutacional na biópsia do tumor primário e nas amostras de plasma serão comparados a fim de revelar potencial heterogeneidade. Além disso, as alterações longitudinais no perfil de mutação do ctDNA serão comparadas com o desenvolvimento da doença para potencialmente lançar alguma luz sobre os mecanismos biológicos que causam resistência ao tratamento ou recaídas tardias da doença.

WP 4. microRNA (miRNA)

MicroRNA circulante de exossomos e TEPs (grupo Patologia) O RNA total será isolado de exossomos e TEPs das amostras de sangue colhidas antes e durante o tratamento. Os investigadores estabeleceram recentemente métodos para isolamento de RNA total de exossomos (usando o kit exoRNeasy serum Plasma (Qiagen) e kit de isolamento de RNA miRCURY (Exiqon)) e TEPs. Usando o protocolo mencionado, o RNA total dos exossomos já foi isolado de todos os 125 pacientes de alto risco na primeira visita/antes do tratamento, além disso, das últimas amostras de sangue coletadas desses pacientes, o RNA total será isolado dos exossomos e TEPs. Além disso, o perfil de microRNA será realizado no RNA isolado usando o pipeline e a plataforma já estabelecidos para o nosso instrumento Ion Proton. Esses perfis serão comparados com a análise bioinformática dos perfis mRNA-miRNA do tumor primário (WP1) e das amostras colhidas antes do tratamento. Os microRNAs que não estão presentes na amostra de tecido e/ou na amostra de sangue antes do tratamento, mas aparecem no sangue logo antes do aparecimento de uma recorrência, podem ser rastreados retrospectivamente em amostras de sangue anteriores para ver a sensibilidade desses microRNAs na previsão do tratamento resistência. O perfil de microRNA de TEPs será comparado ao perfil de microRNA de exossomos e aos perfis de mRNA-miRNA do tumor primário (WP1, para ver se os TEPs refletem o tumor e se eles têm o potencial de prever a recidiva.

WP 5. Metabolômica

Metabolômica é o estudo de pequenas moléculas compreendendo substratos, intermediários e produtos finais do metabolismo celular, como aminoácidos, açúcares e pequenos ácidos orgânicos. O estado metabólico das células cancerígenas é substancialmente alterado em comparação com as células normais, fato que pode ser utilizado para fins de diagnóstico. Assinaturas metabólicas específicas do tecido tumoral fornecem informações adicionais para a determinação dos subtipos de câncer de mama e previsão do resultado1. Por exemplo, níveis aumentados de lactato e glicina no tumor estão relacionados a um prognóstico ruim em pacientes com câncer positivo para receptor de estrogênio (ER). Análises metabólicas de tumores primários também demonstraram valor preditivo em relação ao tratamento neoadjuvante de pacientes com doença localmente avançada.

Também foi demonstrado que os metabólitos circulantes fornecem informações prognósticas no câncer de mama operável e estratificam ainda mais o risco dentro das categorias de risco geneticamente determinadas existentes. É importante ressaltar que as alterações metabolômicas podem surgir direta ou indiretamente da doença micrometastática, e não do tumor primário. Recentemente, os pesquisadores mostraram que os níveis sistêmicos de lactato e piruvato preveem resultados inferiores em pacientes com câncer de mama ER-positivo operável. O tecido adjacente ao tumor e as respostas imunológicas também podem contribuir para um perfil metabolômico alterado. Também há evidências de que o perfil metabólico pode ser usado para monitoramento de pacientes em alguns tipos de câncer, embora essas evidências ainda faltem no câncer de mama. Portanto, os pesquisadores pretendem investigar se o monitoramento pós-operatório por meio de perfis metabólicos no sangue é útil para a detecção precoce da recorrência do câncer de mama.

WP 6. Monitoramento molecular integrativo para detecção de recorrência

A nova tecnologia revolucionou o nível de informação biológica que pode ser obtida a partir de amostras clínicas, representada pelos novos termos "ômicos" genômica, transcriptômica, metabolômica, etc. A disponibilidade desses grandes conjuntos de dados, mesmo em domínio público, incentivou o desenvolvimento de métodos integrativos que podem extrair informações vitais de várias fontes de dados combinadas. Novas conexões surpreendentes entre conjuntos de dados ômicos foram reveladas por tais abordagens, exemplificadas por uma ligação entre fragmentação de DNA livre de células e expressão gênica46. Assim, nosso conhecimento sobre o câncer de mama também foi ampliado por abordagens integrativas, resultando em uma compreensão mais abrangente da doença. A subclassificação prognóstica dos cânceres de mama, por exemplo, foi refinada e novos antígenos específicos do tumor foram identificados. Dados moleculares integrados demonstraram ter um poder prognóstico maior do que níveis moleculares separados no câncer de mama. Assim, uma análise combinada dos níveis de dados genéticos (ctDNA), transcriptômicos (miRNA) e metabolômicos em amostras de sangue periférico é, portanto, planejada no projeto atual para maximizar seu potencial de biomarcador conjunto no câncer de mama operável.

Cálculos de tamanho de amostra.

Os investigadores realizaram cálculos de tamanho de amostra usando o software SPSS Sample Power. Esses cálculos demonstraram que 125 pacientes de alto risco devem ser suficientes para fornecer um poder de teste de log rank de 80%, ao testar o valor prognóstico da detecção de ctDNA/CTC antes da cirurgia. Os cálculos do tamanho da amostra foram baseados na suposição qualificada de que a taxa média de sobrevida em 5 anos no grupo de alto risco é de 90%, enquanto é de 75% e 95% nos subgrupos positivos e negativos de ctDNA/CTC, respectivamente. Dos 125 pacientes estimados, 30 foram considerados positivos para ctDNA/CTC e 95 negativos.

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B. Melhorar o monitoramento de drogas de tamoxifeno no câncer de mama

Cerca de 75% de todos os cânceres de mama pertencem aos subtipos luminais, que expressam os receptores hormonais Receptor de Estrogênio e Receptor de Progesterona. Esses pacientes são tratados com drogas antiestrogênicas; tamoxifeno e/ou inibidores da aromatase. Os dois metabólitos de tamoxifeno mais ativos são Z-4OHtam e Z-4OHNDtam (Z-endoxifeno) têm afinidade 30-100 vezes maior para ER do que o tamoxifeno. Esses metabólitos constituem, em última análise, o efeito bloqueador no nível do RE com o objetivo de erradicar a doença micrometastática e são responsáveis ​​pela melhora da sobrevida após o estabelecimento desse tratamento sistêmico adjuvante. A medição direta desses metabólitos contorna todos os distúrbios da diversidade da atividade do CYP2D6, ou seja, vias metabólicas alternativas, adesão ao medicamento e inibição das interações medicamentosas. Nossa nova metodologia de LC/MS-MS leva em consideração todas as variáveis ​​mencionadas acima e fornece um relatório de leitura funcional do nível sérico dos metabólitos ativos do tamoxifeno no paciente individual. Este método também pode distinguir entre os isômeros inativos e ativos de endoxifeno e 4-OHtam, que são os metabólitos bloqueadores de RE mais ativos do tamoxifeno. Em colaboração com o Oslo Breast Cancer Research Group, os pesquisadores demonstraram recentemente em um estudo observacional retrospectivo que pacientes com baixas concentrações séricas de Z-4OHtam < 3,26 nM ou Z-endoxifeno < 9,00 nM (cerca de 12% de todos os pacientes) têm pior sobrevida específica e total do câncer de mama do que pacientes com concentrações séricas acima desses limiares (HR ajustado = 4,3; IC95 = 1,9-13,6) (curvas vermelhas na Figura 4). Pacientes com um nível muito alto desses metabólitos (aproximadamente 12% dos pacientes) não tiveram desfechos específicos da mama. Agora, os investigadores precisam validar essa descoberta em materiais independentes de pacientes. Se validado, isso será um benefício clínico direto para 25% dos pacientes com câncer de mama + ER que planejam tratamento adjuvante com tamoxifeno. Esse monitoramento de drogas terapêuticas (TDM) pode identificar pacientes de risco com níveis inadequados de metabólitos ativos de tamoxifeno. Isso pode levar a um aumento da dose ou mudança para uma forma alternativa de tratamento endócrino nesses pacientes. Pacientes com níveis de metabólitos muito altos podem continuar com tamoxifeno e não precisam mudar para um inibidor de aromatase.

Assim, TDM pode vir a ser uma mudança paradigmática no tratamento endócrino tam do câncer de mama ER-positivo. É importante ressaltar que a distância do "banco à cama" neste estudo é muito curta devido aos nossos achados recentes, um método viável e mais de 30 anos de experiência com tamoxifeno no cenário clínico.

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C. Microambiente tumoral no câncer de mama - infiltração imune do estroma adiposo e interação com o tumor na zona de crescimento

Introdução: O câncer de mama ainda é o tipo de câncer mais comum entre as mulheres no mundo ocidental, incluindo a Noruega. Anualmente, cerca de 3.500 novos pacientes noruegueses com câncer de mama são diagnosticados. Durante os últimos 50 anos, a incidência de câncer de mama na Noruega mais que dobrou. Curiosamente, durante o mesmo período, o sobrepeso e a obesidade aumentaram de forma alarmante. A subtipagem molecular de tumores de câncer de mama melhorou a compreensão de sua biologia intrínseca. Isso abriu caminho para uma abordagem de tratamento mais personalizada e melhorou o resultado para pacientes com câncer de mama nos últimos 20 anos.

Além da subtipagem molecular, o diagnóstico do câncer de mama hoje consiste em estadiamento (através do sistema de classificação TNM) e exame microscópico por um patologista. Há evidências crescentes para o valor prognóstico da avaliação do microambiente do tumor (por exemplo, linfócitos infiltrantes tumorais (TILs)) como parte do diagnóstico do câncer de mama, mas ainda não foi implementado na prática clínica. Números elevados de TILs estão fortemente associados a um bom prognóstico em pacientes com câncer de mama triplo negativo, mas não mostraram tal correlação no câncer de mama luminal. Os macrófagos no tecido adiposo da mama se diferenciam em dois fenótipos distintos, frequentemente classificados como M1 e M2, com aumento deste último no câncer de mama. O M1 ataca e fagocita as células cancerígenas, enquanto o M2 tem propriedades anti-inflamatórias e demonstrou ter funções promotoras de tumores.

O presente projeto aumentará nosso conhecimento sobre a interação entre o tumor primário de mama e a infiltração de células imunes no tecido adiposo justa-tumoral. Nossas descobertas serão correlacionadas com subtipos moleculares de câncer de mama, proximidade com o tumor, marcadores de proliferação e, finalmente, com o resultado clínico. Os pesquisadores argumentam que esse conhecimento fornecerá novos alvos preditivos para a terapia adjuvante imunomoduladora do câncer. Este projeto de doutoramento tem três pacotes de trabalho (WP) inter-relacionados com o objetivo final de identificar marcadores de inflamação no tecido adiposo justa-tumoral que sejam relevantes na avaliação clínica da terapia adjuvante do cancro da mama. Nos WP 1 e 2, a paisagem fenotípica e genômica do tecido adiposo justa-tumoral será caracterizada, e no WP 3 as pesquisas investigarão se esse conhecimento pode predizer o resultado clínico.

O projeto é baseado em uma forte colaboração regional entre o Haukeland University Hospital (HUH) e o Stavanger University Hospital (SUH). Para o projeto atual, os pesquisadores coletaram de maneira sistemática tecido adiposo e tumoral de 30 pacientes consecutivas com câncer de mama submetidas a mastectomias no SUH. Os espécimes cirúrgicos da mama são imediatamente encaminhados ao patologista que, sob controle morfológico, coleta amostras de tecido relevante da frente invasiva e do núcleo (0,5x1x1 cm) do tumor primário. Controles de tecido mamário normal (2000 mg) do quadrante contralateral distante também serão coletados e verificados morfologicamente pelo patologista. O tecido é coletado em pares duplicados. Uma das amostras é imediatamente congelada em nitrogênio líquido para preservação, enquanto a outra metade de cada par é preservada em formalina e fixada em parafina (FFPE). Além disso, três pares de amostras de tecido adiposo (cada um de 1x1x1 cm) com distância crescente da borda do tumor formarão um gradiente de tecido adiposo da frente invasiva da área do tumor. Os gradientes coletados também são imediatamente congelados em nitrogênio líquido e metade de cada par é armazenado como FFPE. As pesquisas realizaram um estudo piloto confirmando um rendimento de RNA suficiente das amostras de tecido congeladas para sequenciamento de RNA.

O tecido é coletado como parte do biobanco de pesquisa geral, Prospective Breast Cancer Biobank (PBCB) (REK# 2010/1957), um projeto de biobanco em andamento.

A coorte retrospectiva de Stavanger consiste em todas as pacientes com câncer de mama diagnosticadas com câncer de mama invasivo de primeira manifestação no departamento de Patologia do Stavanger University Hospital, entre 1993 - 2004. Como o SUH é o único hospital na região, este é um verdadeiro biobanco de base populacional, já incluídos estão dados clínico-patológicos como: graduação, estágio, TNM, tratamento e marcadores de proliferação (Ki-67, PPH3/MAI); último acompanhamento clínico ocorreu em 2016.

As pesquisas têm quatro hipóteses principais relacionadas à inflamação e infiltração de células imunes no câncer de mama:

1. O tecido adiposo justa-tumoral próximo à borda do tumor mostra um aumento do nível de inflamação e infiltração de células imunes.
2. A inflamação e a infiltração de células imunes atenuam-se com o aumento da distância da borda do tumor.
3. Existem diferenças na inflamação e na infiltração de células imunes entre os diferentes subtipos de câncer de mama (Luminal A, Luminal B e Basal like).
4. O aumento da inflamação e a infiltração de células imunes estão correlacionados com resultados clínicos adversos (ou seja, recaída da doença).

4.1 DESENHO DO ESTUDO, MÉTODOS E ANÁLISES

As pesquisas têm quatro hipóteses principais relacionadas à inflamação e infiltração de células imunes no câncer de mama:

1. O tecido adiposo justa-tumoral próximo à borda do tumor mostra um aumento do nível de inflamação e infiltração de células imunes.
2. A inflamação e a infiltração de células imunes atenuam-se com o aumento da distância da borda do tumor.
3. Existem diferenças na inflamação e na infiltração de células imunes entre os diferentes subtipos de câncer de mama (Luminal A, Luminal B e Basal like).
4. O aumento da inflamação e a infiltração de células imunes estão correlacionados com resultados clínicos adversos (ou seja, recaída da doença).

WP 1: MAPEAMENTO MORFOLÓGICO E GENÔMICO DA INFILTRAÇÃO DE CÉLULAS IMUNE NO TECIDO ADIPOSO AO CÂNCER DE MAMA

Antecedentes: A inflamação é um importante facilitador para o desenvolvimento do tumor (16). Foi demonstrado que o tecido adiposo próximo ao câncer de mama aumenta a infiltração de células imunes, mas ainda não se sabe como isso se relaciona com subtipos moleculares e/ou proximidade com o tumor. As pesquisas usarão IHC e sequenciamento de RNA para avaliar o nível de inflamação, a infiltração de células imunes e as assinaturas de expressão de genes imunes no tecido adiposo ao redor do câncer de mama.

Projeto: Estudo exploratório prospectivo Pacientes, material e cálculo de potência: O tecido adiposo é coletado das amostras de mastectomia coletadas prospectivamente. Amostras de tecido são coletadas de três subgrupos moleculares diferentes (Luminal A, Luminal B e Basal como câncer de mama), 10 em cada grupo. As biópsias centrais são coletadas em um gradiente com o aumento da distância da borda do tumor (fig. 1). O Norwegian Genomics Consortium (NGC) confirmou que os tamanhos de amostra baseados na seleção de subtipos específicos de câncer de mama são suficientes para poder estatístico.

Métodos: Lâminas de tecido fixado em formalina de tumor, frente invasiva e tecido adiposo (fig. 1) serão coradas usando IHC e anticorpos contra células imunes (células imunes totais, CD45; células T, CD3, CD8, FoxP3; células mieloides, CD68 , HLA-DR). As lâminas serão avaliadas por microscopia e os resultados serão correlacionados com subgrupos moleculares de câncer de mama, localização em relação a marcadores tumorais e de proliferação (i.e. Ki67, PPH3 e MAI). Paralelamente, as pesquisas realizarão sequenciamento de RNA em tecido congelado coletado das mesmas amostras de tecido descritas acima. Várias abordagens de análise serão usadas nos dados de RNAseq. Exceto para a análise exploratória de dados, algoritmos de análise específicos, incluindo deconvolução de células imunes (ABIS, CIBERSORTx) e, mais especificamente, olhar para assinaturas imunes tumorais (análise TIP), entre outros.

Resultado esperado: As pesquisas esperam encontrar aumento da inflamação e infiltração de células imunes no tecido adiposo justa-tumoral e expressão alterada de assinaturas de genes inflamatórios que as pesquisas podem investigar mais a fundo no WP 2.

WP 2: AVALIAÇÃO DA REAÇÃO INFLAMATÓRIA NO TECIDO ADIPOSO JUXTA-TUMORAL NO CÂNCER DE MAMA USANDO IMUNO-HISTOQUÍMICA E CITOMETRIA DE MASSAS POR IMAGEM.

Introdução: As células do câncer de mama interagem com o tecido circundante e causam inflamação e infiltração de células imunes no tumor e no tecido adiposo. A citometria de massa por imagem mostrou que a infiltração de células imunes em tumores se correlaciona com o prognóstico, mas até o momento não há estudos examinando se o tecido adiposo ao redor do tumor também mostra padrões estruturais de infiltração de células imunes. Portanto, as pesquisas examinarão o tecido adiposo ao redor dos tumores de câncer de mama usando a Citometria de Massa por Imagem Hyperion™.

Desenho: Estudo prospectivo exploratório Pacientes, material e cálculo de poder: Amostras de tecido são coletadas de 30 espécimes de mastectomia obtidos prospectivamente com três subgrupos moleculares diferentes (Luminal A, Luminal B e Basal like cancer de mama), 10 em cada grupo. O tecido adiposo é coletado em um gradiente distante do tumor e do quadrante contralateral como uma amostra de controle (fig. 2). Um tamanho de amostra de 30 pacientes é considerado suficiente para um estudo exploratório desse tipo.

Métodos: Um painel Hyperion™ IMC de até 50 anticorpos únicos será desenvolvido com base em um painel já existente e validado disponível na instalação principal da UoB que os pesquisadores já usaram com sucesso em outros projetos. O painel disponível será ampliado ainda mais com base nas descobertas do WP 1 e primeiro validado em amostras de tecido mamário "não essenciais" antes de ser usado nas amostras de estudo descritas acima. Utilizando o Hyperion™ IMC as pesquisas pretendem analisar os níveis de reação inflamatória no tecido adiposo justa-tumoral. Os dados IMC serão analisados ​​com histoCAT+, MAV e FlowJo (normalmente usados ​​para análise de dados de citometria de fluxo, mas também altamente adequados para análise de imagem de alto parâmetro). Além disso, os pesquisadores poderão utilizar dados de expressão gênica de fatores conhecidos e novos, identificados no WP 1, e visualizar se a expressão é generalizada ou compartimentada no tecido adiposo. O tecido adiposo normal da mama do quadrante contralateral será usado como controle. A fim de examinar mais detalhadamente a influência do BC na inflamação do tecido adiposo justa-tumoral dos vários subtipos moleculares, as pesquisas também pretendem corar o tecido de três segmentos de tecido que se estendem do tumor para determinar se os níveis dependem a distância do tumor ou o subtipo molecular (Fig. 1). A inflamação no tecido adiposo justa-tumoral também será avaliada morfologicamente por IHQ. Isso nos permitirá selecionar regiões de interesse para investigar usando o IMC.

Resultado esperado: As pesquisas esperam encontrar aumento da inflamação e infiltração de células imunes no tecido adiposo próximo ao tumor e identificar novos biomarcadores no tecido adiposo, permitindo a investigação do significado clínico da WP 3.

WP 3: REAÇÃO INFLAMATÓRIA NO TECIDO ADIPOSO JUXTA-TUMORAL NO CÂNCER DE MAMA E RESULTADO CLÍNICO.

Fundo:

A imuno-histoquímica é uma pedra angular no diagnóstico do câncer de mama e serve como a principal modalidade para identificar subgrupos moleculares de câncer de mama e marcadores de proliferação, como o Ki-67. Isso é essencial para determinar qual regime de tratamento é mais adequado para o paciente em particular. A heterogeneidade no tecido tumoral (tanto as células tumorais quanto as células imunes infiltradas) tem sido associada a diferenças no resultado clínico, mas ainda não se sabe se o mesmo se aplica ao tecido adiposo ao redor do tumor. Assim, as pesquisas examinarão o tecido adiposo justa-tumoral para inflamação e infiltração de células imunes e correlacionarão isso com o resultado clínico em pacientes com câncer de mama.

Desenho: Estudo observacional clínico

Pacientes e Métodos: Um número de 3.500 pacientes com câncer de mama são acumulados em um biobanco com um tempo médio de acompanhamento de 15 anos. Uma grande seleção de amostras de tecido desses pacientes será avaliada em relação às células imunes no tecido adiposo e biomarcadores descobertos em WP 1 e 2 usando IHC. As amostras serão estratificadas em três grupos de acordo com os subgrupos moleculares (i.e. Luminal A, Luminal B e Basal como câncer de mama). As lâminas de tecido serão analisadas e os resultados correlacionados com os resultados clínicos dos diários dos pacientes (o acesso aos diários já está aprovado pela REK). Usando a taxa de risco proporcional de Cox e o teste de log-rank, as pesquisas avaliarão o efeito do aumento da inflamação no tecido adiposo sobre a capacidade de sobrevivência do paciente.

Cálculo do poder: As pesquisas estimaram o poder do teste da diferença na sobrevida livre de recorrência entre pacientes positivos e negativos para inflamação tumoral justa conforme avaliado por IHC e IMC. A medida do efeito é a taxa de risco (HR) calculada pelo método de regressão de Cox. Por exemplo: 1.000 pacientes com uma taxa de recorrência de 15% terão criado pelo menos 150 endpoints. Se a taxa de inflamação for de 20%, as pesquisas terão um poder de 80% para detectar uma diferença de sobrevida com uma taxa de risco (HR) de 1,80 ou superior.

Resultado esperado: Este último pacote de trabalho foi concebido para provar o princípio de que é viável incorporar o exame histológico do tecido adiposo justa-tumoral como parte do diagnóstico do câncer de mama. Em uma perspectiva mais longa, as pesquisas visam identificar novos biomarcadores específicos de infiltração imune no tecido adiposo que se correlacionam com resultados adversos em pacientes com câncer de mama. Esses biomarcadores podem servir como ferramentas preditivas para identificar pacientes elegíveis para tratamento adjuvante anti-inflamatório ou imunomodulador.

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D. Monitorar efeitos colaterais, qualidade de vida, depressão, fadiga e participação na vida profissional Contexto

O tratamento do câncer de mama emprega todas as cirurgias, quimioterapia, radioterapia e várias opções de terapia direcionada, como antiestrogênio e terapia anti-HER-2. Essas opções de tratamento criam efeitos colaterais incômodos tanto em uma perspectiva de curto como de longo prazo. É importante ressaltar que relações mais complexas entre modalidades de terapia oncológica e queixas subjetivas de saúde em pacientes com câncer de mama foram descobertas recentemente. Os escores de fadiga, ansiedade e depressão são provavelmente leituras funcionais da carga total do tratamento. O tratamento anticancerígeno também tem um impacto substancial na qualidade de vida e nos aspectos sociais dos sobreviventes do câncer, o que se estende à participação na vida profissional. A licença médica (SL) cinco anos após o diagnóstico do câncer de mama é mais dependente de fatores sociais do que da doença (2). Assim, o câncer de mama atinge duas vezes as mulheres; primeiro o peso da doença e depois as preocupações sócio-econômicas. Sobreviventes de câncer de mama têm um risco quase 3 vezes maior de receber pensão por invalidez (DP) em comparação com pacientes sem câncer em um estudo retrospectivo baseado em registros (3). No entanto, este estudo foi baseado em regimes de tratamento oncológico abandonados.

Mira

O objetivo deste estudo é identificar fatores de risco para se tornar um receptor de SL, WAA ou DP de longo prazo por meio de uma análise qualitativa aprofundada e abordagem de método misto, triangulando dados PROM, dados clínicos/biológicos e dados NAV. O uso de dados NAV como endpoints fornecerá informações valiosas para médicos e clínicos gerais que podem otimizar o acompanhamento também em relação à participação na vida profissional. Portanto, os investigadores têm um desenho de estudo robusto para identificar fatores fisk para altas taxas de SL, WAA e DP. Em última análise, os investigadores visam reduzir as despesas financeiras que o câncer de mama gera para a sociedade.

Projeto de estudo / material e métodos.

O desenho do estudo é um estudo observacional onde os investigadores mapearão, no presente estudo, as taxas e os fatores de risco de dentadura para alto SL, WAA e DP entre sobreviventes de câncer de mama com os esquemas de tratamento atualizados. Os investigadores seguirão uma abordagem translacional de 4 etapas:

1. Os investigadores conduzirão primeiro um estudo qualitativo exploratório usando análise documental da política de saúde e vida profissional no contexto norueguês, combinado com dados empíricos de entrevistas semiestruturadas e grupo focal com 20 pacientes de alto risco) para serem analisados ​​tematicamente. O referencial teórico para este projeto qualitativo é derivado do interacionismo simbólico em que descobrir e compreender o significado em contextos específicos é um objetivo. Uma vez que interações sociais e profissionais significativas são importantes para a reabilitação psicossocial de indivíduos com câncer de mama, o interacionismo simbólico é uma estrutura metodológica apropriada. Esta abordagem qualitativa criará as bases da abordagem nos estudos baseados em PROM e NAV-base de dados orientados abaixo.

2. NAV- dados

   Os investigadores atualmente colaboram com a vice-diretora Anneline Christine Teigen e o consultor sênior Günter Olsborg na NAV-Rogaland e na seção Mikrodata da Statistics Norway (SSB). O objetivo desta colaboração é obter mais conhecimento sobre o uso de serviços de seguridade social entre pacientes com câncer de mama, juntamente com os especialistas do NAV-Rogaland e, juntamente com o SSB, usar o banco de dados FD-trygd para obter dados sociodemográficos prospectivos confiáveis ​​sobre SLs (curtos e longos termo), Subsídio para Avaliação de Trabalho (WAA) (Arbeidsavklaringspenger) e DPs (ambos com tempo limitado

   e ao longo da vida) para cada paciente no presente estudo PerMoBreCan.

3. Os dados da medida de resultados relatados pelo paciente (PROM) são obtidos na linha de base e, posteriormente, anualmente de todos os pacientes PerMoBreCan. Os dados do PROM consistem em 1. instrumentos HRQoL (EORTC QLQ-C30, EORTC QLQ-BR23 e FACT B), 2. Escala Hospitalar de Ansiedade e Depressão, HAD, 3. Instrumentos de Fadiga Escala de Impacto de Fadiga, FIS; Escala de Gravidade da Fadiga (FSS) e VAS-fadiga, 4. Questionários de efeitos colaterais, 5. Questionário de dor nas articulações, 6. A Escala de Incerteza na Doença de Mishel, MUIS; e 7. Questionário de hábitos alimentares e 8.ROMA III questionário de queixas intestinais (DII e SII).
4. Identificação de biomarcadores.

Todos os pacientes que participarem deste estudo serão rastreados em biomarcadores circulantes relacionados à fadiga. Esses biomarcadores estão no nível da proteína, no nível da expressão genética e também no nível epigenético. Nossa agradável cooperação estabelecida há muito tempo com o prof. Roald Omdal, do Stavanger University Hospital, que é um imunologista clínico e pesquisador de fadiga transalcional, está empenhado em conduzir essas análises em seu laboratório de pesquisa.