Prospective Breast Cancer Biobanking (PBCB)

A. Tidlig påvisning af systemiske tilbagefald i brystkræft.

WP 1. Analyse af primær tumor.

Analyse af primær tumor og metastaser (patologigruppe). I denne arbejdspakke vil både DNA og RNA fra de primære tumorer fra 125 højrisiko (Luminal-B) patienter blive analyseret ved hjælp af næste generations sekventering (NGS). Endvidere vil efterforskerne også analysere DNA og RNA fra de tilgængelige metastatiske læsioner (i øjeblikket tilgængeligt materiale for 3/8), som er dukket op og vil dukke op i løbet af undersøgelsesperioden.

MiRNA og mRNA vil blive profileret ved hjælp af PureLink™ miRNA Isolation Kit (Invitrogen), Dynabeads mRNA direkte mikrokit (Ambion) og Ion total RNA-seq kit V2 (Life Technologies) på vores Ion Proton NGS instrument. Bioinformatiske analyser af parrede mRNA- og mikroRNA-ekspressionsprofiler vil blive brugt til at afsløre differentielt udtrykte mikroRNA'er mellem patienter med og uden recidiv under behandling. Disse data vil blive knyttet til vores tidligere undersøgelser og brugt til at identificere målkandidater til mikroRNA-analyse i exosomer og TEP'er.

Derudover vil der også blive udført NGS på DNA fra de primære tumorer og metastaser for at verificere DNA-mutationer især i ER og andre kendte onkogener, herunder dem der er undersøgt i WP3. DNA-sekventeringen vil blive udført ved hjælp af Oncomine Comprehensive Assay. Dette er en amplikonbaseret tilgang, der analyserer hotspot-SNV'er, indels og CNV'er. Disse analyser vil give os en biologisk forståelse og baggrundsviden for hver enkelt tumor, og disse datasæt kan også sammenlignes med de nyligt publicerede data.

WP 2. Cirkulerende tumorceller (CTC).

Cirkulerende tumorceller (onkologisk gruppe) Cirkulerende tumorceller beriges fra perifere blodprøver ved densitetscentrifugering og efterfølgende immunomagnetisk udtømning af leukocytter. Onkologigruppen har for nylig udviklet og offentliggjort en ny udtømningsmetode, kaldet MINDEC (Multi-marker Immunomagnetic Negative Depletion Enrichment of CTCs), som har overlegne restitutions- og berigelsesrater. RNA og DNA isoleres samtidigt fra den berigede fraktion for at tillade CTC-detektion ved både RNA- og DNA-baserede tilgange. Specifikke mRNA-markører, med høje niveauer i tumorceller og lave niveauer i normale leukocytter, præ-amplificeres og kvantificeres ved real-time PCR som surrogatmarkører for CTC'er. Både epitelspecifikke markører og markører relateret til epitel mesenchymal overgang er en del af markørpanelet. Indtil nu har efterforskerne analyseret 170 på hinanden følgende blodprøver fra den større PBCB-kohorte, beriget med MINDEC-proceduren og fundet beviser for CTC'er i omkring 20 % af prøverne (fra både lav- og højrisikopatienter), et fund, der opmuntrer os at fortsætte dette projekt. Efterforskerne har også analyseret blodprøver fra 30 raske kvindelige frivillige til sammenligning. Alle indsamlede blodprøver fra 125 højrisikopatienter vil blive analyseret (ca. 575 prøver). Tilstedeværelsen eller niveauet af CTC'er i de analyserede prøver vil senere blive sammenlignet med kendte prognostiske faktorer, behandlingseffekt og sygdomsudfald.

WP 3. cirkulerende tumor-DNA (ctDNA).

Tumorspecifikke mutationer kan bruges som markører for ctDNA, fordi de ikke er til stede i normale celler og normalt plasma-DNA. Onkologigruppen har for nylig påvist den kliniske relevans af ctDNA-målinger ved bugspytkirtelkræft. Efterforskerne vil nu måle ctDNA-niveauer i plasmaprøver fra højrisiko brystkræftpatienter ved målrettet næste generations sekventering. Den nyligt udgivne "Oncomine breast cfDNA assay" (Thermo Fisher) vil blive brugt til at påvise mutationer i et panel på ti gener, der hyppigt muteres i brystkræft. Analysen er baseret på molekylær stregkodning af skabeloner og muliggør reproducerbar påvisning af mutationer ned til 0,1 % kontrolprøver. Tages den lave koncentration af cellefrit DNA (=cfDNA) i plasma i betragtning (typisk 10 ng pr. ml blod), anses en følsomhed på 0,1 % for tilstrækkelig. Sekvenseringen vil blive udført på vores Ion Proton NGS-instrument (Life Technologies). Den præoperative blodprøve og årlige opfølgningsprøver fra de 125 højrisikopatienter vil blive analyseret i denne WP. Blodprøver fra 30 raske kvindelige frivillige er allerede blevet indsamlet og vil blive analyseret til sammenligning.

Tilstedeværelsen og niveauet af tumorspecifikke mutationer vil blive analyseret i forhold til behandlingseffekt og sygdomsudfald. Mutationsprofilen i den primære tumorbiopsi og plasmaprøverne vil blive sammenlignet for at afsløre potentiel heterogenitet. Derudover vil longitudinelle ændringer i mutationsprofilen af ​​ctDNA blive sammenlignet med sygdomsudvikling for potentielt at kaste lidt lys over de biologiske mekanismer, der forårsager behandlingsresistens eller sene sygdomstilbagefald.

WP 4. mikroRNA (miRNA)

Cirkulerende mikroRNA fra exosomer og TEP'er (patologigruppe) Total RNA vil blive isoleret fra exosomer og TEP'er fra blodprøverne taget før og under behandlingen. Efterforskerne har for nylig etableret metoder til isolering af totalt RNA fra exosomer (ved hjælp af exoRNeasy serum Plasma kit (Qiagen) og miRCURY RNA isolation kit (Exiqon)) og TEP'er. Ved hjælp af den nævnte protokol er total RNA fra exosomer allerede blevet isoleret fra alle de 125 højrisikopatienter første besøg/før behandling, desuden fra de sidste blodprøver, der er indsamlet fra disse patienter, vil total RNA blive isoleret fra både exosomer og TEP'er. Desuden vil mikroRNA-profil blive udført på det isolerede RNA ved hjælp af pipeline og platform, der allerede er etableret for vores Ion Proton-instrument. Disse profiler vil blive sammenlignet med den bioinformatiske analyse af mRNA-miRNA profiler fra den primære tumor (WP1) og prøverne taget før behandling. MikroRNA, der ikke er til stede i vævsprøven og/eller i blodprøven før behandling, men som forekommer i blodet lige før et recidiv opstår, kan efterfølgende spores i tidligere blodprøver for at se, hvor følsomme disse mikroRNA'er er til at forudsige behandling modstand. MicroRNA-profilen fra TEP'er vil blive sammenlignet med mikroRNA-profilen fra exosomer og med mRNA-miRNA-profilerne fra den primære tumor (WP1, for at se, om TEP'er afspejler tumoren, og om de har potentiale til at forudsige tilbagefald.

WP 5. Metabolomics

Metabolomics er studiet af små molekyler, der omfatter substrater, mellemprodukter og slutprodukter af cellulær metabolisme, såsom aminosyrer, sukkerarter og små organiske syrer. Kræftcellernes metaboliske tilstand er væsentligt ændret sammenlignet med normale celler, hvilket kan bruges til diagnostiske formål. Specifikke metaboliske signaturer fra tumorvæv giver yderligere information til bestemmelse af brystkræftundertyper og forudsigelse af udfald1. For eksempel er øgede tumorlaktat- og glycinniveauer relateret til dårlig prognose hos patienter med østrogenreceptor (ER) positiv cancer. Metabolomiske analyser af primære tumorer har også vist prædiktiv værdi i forhold til neoadjuverende behandling af patienter med lokalt fremskreden sygdom.

Cirkulerende metabolitter har også vist sig at give prognostisk information i operabel brystkræft og yderligere stratificere risiko inden for eksisterende genetisk bestemte risikokategorier. Det er vigtigt, at metabolomiske ændringer kan opstå direkte eller indirekte fra mikrometastatisk sygdom snarere end primær tumor. For nylig har efterforskerne vist, at systemiske lactat- og pyruvatniveauer forudsiger et dårligere resultat hos patienter med operationerbare ER-positive brystkræftformer. Tumor-tilstødende væv og immunologiske responser kan også bidrage til en ændret metabolomisk profil. Der er også evidens for, at metabolisk profilering kan bruges til patientovervågning i nogle kræftformer, selvom sådanne beviser stadig mangler i brystkræft. Derfor har efterforskerne til hensigt at undersøge, om postoperativ monitorering ved hjælp af metabolisk profilering i blod er nyttig til tidlig påvisning af tilbagefald af brystkræft.

WP 6. Integrativ molekylær overvågning til recidivdetektion

Ny teknologi har revolutioneret niveauet af biologisk information, der kan opnås fra kliniske prøver, repræsenteret ved de nye "omics"-begreber genomics, transcriptomics, metabolomics, etc. Tilgængeligheden af ​​sådanne store datasæt, selv i det offentlige domæne, har fremmet udviklingen af ​​integrerede metoder, der kan udtrække vital information fra flere kombinerede datakilder. Overraskende nye forbindelser mellem omics-datasæt er blevet afsløret ved sådanne tilgange, eksemplificeret ved en forbindelse mellem cellefri DNA-fragmentering og genekspression46. Derfor er vores viden om brystkræft også blevet udvidet med integrative tilgange, hvilket resulterer i en mere omfattende forståelse af sygdommen. Den prognostiske underklassificering af brystkræft er for eksempel blevet forfinet og nye tumorspecifikke antigener identificeret. Integrerede molekylære data har endda vist sig at have en højere prognostisk kraft end separate molekylære niveauer i brystkræft. En kombineret analyse af de genetiske (ctDNA), transkriptomiske (miRNA) og metabolomiske dataniveauer i perifere blodprøver er derfor planlagt i det aktuelle projekt for at maksimere deres fælles biomarkørpotentiale i operabel brystkræft.

Prøvestørrelsesberegninger.

Efterforskerne udførte prøvestørrelsesberegninger ved hjælp af SPSS Sample Power-software. Disse beregninger viste, at 125 højrisikopatienter skulle være tilstrækkeligt til at give en log rank teststyrke på 80 %, når man testede den prognostiske værdi af ctDNA/CTC-detektion før operation. Prøvestørrelsesberegningerne var baseret på den kvalificerede antagelse, at den gennemsnitlige 5-års overlevelsesrate i højrisikogruppen er 90 %, mens den er 75 % og 95 % i henholdsvis ctDNA/CTC positive og negative undergrupper. Af de anslåede 125 patienter blev 30 antaget positive for ctDNA/CTC og 95 negative.

-------------------------------------------------- -------------------------------------------------- -----

B. Forbedre lægemiddelovervågning af tamoxifen ved brystkræft

Omkring 75 % af al brystkræft tilhører de luminale undertyper, som udtrykker hormonreceptorerne østrogenreceptor og progesteronreceptor. Disse patienter behandles med anti-østrogene lægemidler; tamoxifen og/eller aromatasehæmmere. De to mest aktive tamoxifenmetabolitter er Z-4OHtam og Z-4OHNDtam (Z-endoxifen) har 30-100 gange højere affinitet for ER end tamoxifen. Disse metabolitter udgør i sidste ende den blokerende effekt på ER-niveau med det formål at udrydde mikrometastatisk sygdom og er ansvarlige for den forbedrede overlevelse efter etableringen af ​​denne adjuverende systemiske behandling. Direkte måling af disse metabolitter omgår alle forstyrrelser fra mangfoldigheden af ​​CYP2D6-aktivitet, dvs. alternative metaboliske veje, adhærens til lægemidlet og hæmmende lægemiddelinteraktioner. Vores nye LC/MS-MS-metode tager højde for alle de ovennævnte variabler og giver en funktionel udlæsningsrapport af serumniveauet af de aktive tamoxifen-metabolitter hos den enkelte patient. Denne metode kan også skelne mellem de inaktive og aktive isomerer af Endoxifen og 4-OHtam, som er de mest aktive ER-blokerende metabolitter af tamoxifen. I samarbejde med Oslo Breast Cancer Research Group har efterforskerne for nylig vist i et retrospektivt observationsstudie, at patienter med lave serumkoncentrationer af Z-4OHtam < 3,26 nM eller Z-Endoxifen < 9,00 nM (ca. 12 % af alle patienter) har signifikante dårligere brystkræftspecifik og total overlevelse end patienter med serumkoncentrationer over disse tærskler (justeret HR = 4,3; CI95 = 1,9-13,6) (røde kurver i figur 4). Patienter med et meget højt niveau af disse metabolitter (ca. 12 % af patienterne) havde ingen brystspecifikke endepunkter. Nu skal efterforskerne validere denne opdagelse i uafhængigt patientmateriale. Hvis det er valideret, vil dette være til direkte klinisk fordel for 25 % af ER + brystkræftpatienter, der planlægger adjuverende tamoxifenbehandling. Sådan terapeutisk lægemiddelovervågning (TDM) kunne identificere risikopatienter med utilstrækkelige niveauer af aktive tamoxifenmetabolitter. Dette kan føre til en dosisstigning eller skift til en alternativ endokrin behandlingsform hos disse patienter. Patienter med meget høje metabolitniveauer kan fortsætte med tamoxifen og behøver ikke at skifte til en aromatasehæmmer.

TDM kan således vise sig at være et paradigmatisk skift i endokrin behandling af ER-positiv brystkræft. Det er vigtigt, at afstanden fra "bænk til seng" i denne undersøgelse er meget kort på grund af vores seneste resultater, en gennemførlig metode og over 30 års erfaring med tamoxifen i kliniske omgivelser.

-------------------------------------------------- -------------------------------------------------- -----

C. Tumor mikromiljø i brystkræft - fedtstromal immuninfiltration og interaktion med tumor i vækstzonen

Baggrund: Brystkræft er stadig den mest almindelige kræfttype blandt kvinder i den vestlige verden, inklusive Norge. Årligt diagnosticeres omkring 3500 nye norske brystkræftpatienter. I løbet af de sidste 50 år er forekomsten af ​​brystkræft i Norge mere end fordoblet. Interessant nok er overvægt og fedme i samme tidsrum steget alarmerende. Molekylær subtypebestemmelse af brystkræfttumorer har forbedret forståelsen af ​​dens iboende biologi. Dette har åbnet op for en mere personlig behandlingstilgang og forbedret resultatet for brystkræftpatienter i løbet af de sidste 20 år.

Ud over den molekylære subtypning består diagnostikken af ​​brystkræft i dag af stadieinddeling (gennem TNM-klassifikationssystemet) og mikroskopisk undersøgelse af en patolog. Der er stigende evidens for den prognostiske værdi af evaluering af tumormikromiljø (f.eks. tumorinfiltrerende lymfocytter (TIL'er) som en del af diagnostik ved brystkræft, men endnu er dette ikke implementeret i klinisk praksis. Høje antal TIL'er er stærkt forbundet med god prognose hos patienter med triple-negativ brystkræft, men har ikke vist nogen sådan sammenhæng i luminal brystcancer. Makrofager i brystfedtvæv differentieres i to forskellige fænotyper, ofte klassificeret som M1 og M2 med en stigning af sidstnævnte i brystkræft. M1 angriber og fagocytiserer kræftceller, mens M2 har antiinflammatoriske egenskaber og har vist sig at have tumorfremmende funktioner.

Nærværende projekt vil øge vores viden om samspillet mellem den primære brysttumor og immuncelleinfiltrationen i det juxta-tumorale fedtvæv. Vores resultater vil være korreleret til molekylære brystkræftsubtyper, nærhed til tumor, markører for spredning og i sidste ende til klinisk resultat. Dette ph.d.-projekt har tre indbyrdes forbundne arbejdspakker (WP) med det ultimative mål at identificere markører for inflammation i juxta-tumoralt fedtvæv, som er relevante i klinisk vurdering af adjuverende behandling af brystkræft. I WP 1 og 2 vil det fænotypiske og genomiske landskab af juxta-tumoralt fedtvæv blive karakteriseret, og i WP 3 vil forskerne undersøge, om denne viden kan forudsige kliniske resultater.

Projektet er baseret på et stærkt regionalt samarbejde mellem Haukeland Universitetshospital (HUH) og Stavanger Universitetshospital (SUH). Til det aktuelle projekt har forskerne på en systematisk måde indsamlet fedt- og tumorvæv fra 30 på hinanden følgende brystkræftpatienter, der gennemgår mastektomi på SUH. Kirurgiske prøver af brystet videresendes uden forsinkelse til patologen, som under morfologisk kontrol prøver relevant væv fra den invasive front og kernen (0,5x1x1 cm) af den primære tumor. Kontroller fra normalt brystvæv (2000 mg) fra den fjerne kontralaterale kvadrant vil også blive indsamlet og verificeret morfologisk af patologen. Vævet opsamles i dubletter par. En af prøverne lynfryses straks i flydende nitrogen til konservering, mens den anden halvdel af hvert par konserveres i formalin og fikseres i paraffin (FFPE). Derudover vil tre par af prøver af fedtvæv (hver på 1x1x1 cm) med stigende afstand fra tumorgrænsen udgøre en gradient af fedtvæv fra den invasive front af tumorområdet. De opsamlede gradienter bliver også straks lynfrosset i flydende nitrogen, og halvdelen af ​​hvert par opbevares som FFPE. Forskerne har udført et pilotstudie, der bekræfter et tilstrækkeligt RNA-udbytte fra de frosne vævsprøver til RNA-sekventering.

Vævet indsamles som en del af den generelle forskningsbiobank, Prospective Breast Cancer Biobank (PBCB) (REK# 2010/1957), et igangværende biobank-projekt.

Den retrospektive Stavanger-kohorte består af alle brystkræftpatienter diagnosticeret med første debut invasiv brystkræft på patologisk afdeling, Stavanger Universitetshospital, mellem 1993 - 2004. Da SUH er det eneste hospital i regionen, er dette en ægte befolkningsbaseret biobank, der allerede inkluderet er klinisk-patologiske data som: gradering, stadie, TNM, behandlings- og spredningsmarkører (Ki-67, PPH3/MAI); sidste kliniske opfølgning fandt sted i 2016.

Forskerne har fire hovedhypoteser relateret til inflammation og immuncelleinfiltration i brystkræft:

1. Det juxta-tumorale fedtvæv tæt på tumorgrænsen viser et øget niveau af inflammation og immuncelleinfiltration.
2. Inflammationen og immuncelleinfiltrationen dæmpes med øget afstand fra tumorgrænsen.
3. Der er forskelle i inflammation og immuncelleinfiltration mellem forskellige undertyper af brystkræft (Luminal A, Luminal B og Basal lignende).
4. Øget inflammation og immuncelleinfiltration er korreleret til ugunstigt klinisk resultat (dvs. tilbagefald af sygdom).

4.1 STUDIEDESIGN, METODER OG ANALYSER

Forskerne har fire hovedhypoteser relateret til inflammation og immuncelleinfiltration i brystkræft:

1. Det juxta-tumorale fedtvæv tæt på tumorgrænsen viser et øget niveau af inflammation og immuncelleinfiltration.
2. Inflammationen og immuncelleinfiltrationen dæmpes med øget afstand fra tumorgrænsen.
3. Der er forskelle i inflammation og immuncelleinfiltration mellem forskellige undertyper af brystkræft (Luminal A, Luminal B og Basal lignende).
4. Øget inflammation og immuncelleinfiltration er korreleret til ugunstigt klinisk resultat (dvs. tilbagefald af sygdom).

WP 1: MORFOLOGISK OG GENOMISK KORTLÆGNING AF IMMUNCELLE INFILTRATION I FEDTVÆV OMGIVENDE BRYSTKRÆFT

Baggrund: Inflammation er en vigtig facilitator for tumorudvikling (16). Fedtvæv nær brystkræft har vist sig at have øget immuncelleinfiltration, men det vides endnu ikke, hvordan dette forholder sig til molekylære undertyper og/eller nærhed til tumor. Forskerne vil bruge IHC og RNA-sekventering til at evaluere niveauet af inflammation, infiltration af immunceller og immungenekspressionssignaturer i fedtvævet omkring brystkræft.

Design: Prospektivt eksplorativt studie Patienter, materiale og effektberegning: Fedtvæv opsamles fra de prospektivt indsamlede mastektomiprøver. Vævsprøver indsamles fra tre forskellige molekylære undergrupper (Luminal A, Luminal B og Basal lignende brystkræft), 10 i hver gruppe. Kernebiopsier opsamles i en gradient med stigende afstand fra tumorgrænsen (fig. 1). Norwegian Genomics Consortium (NGC) har bekræftet, at de stikprøvestørrelser, der er baseret på udvælgelsen af ​​specifikke brystkræftundertyper, er tilstrækkelige til statistisk styrke.

Metoder: Objektglas af formalinfikseret væv fra tumor, invasivt front- og fedtvæv (fig. 1) vil blive farvet med IHC og antistoffer mod immunceller (totale immunceller, CD45; T-celler, CD3, CD8, FoxP3; myeloidceller, CD68 , HLA-DR). Objektglassene vil blive evalueret ved mikroskopi, og resultaterne vil blive korreleret til molekylære undergrupper af brystkræft, lokalisering i forhold til tumor- og proliferationsmarkører (dvs. Ki67, PPH3 og MAI). Parallelt hermed vil forskerne udføre RNA-sekventering på frosset væv indsamlet fra de samme vævsprøver som beskrevet ovenfor. Adskillige analysemetoder vil blive brugt på RNAseq-dataene. Bortset fra at analysere de dataudforskende, specifikke analysealgoritmer, herunder dekonvoluterende immunceller (ABIS, CIBERSORTx) og mere specifikt at se på tumorimmunsignaturer (TIP-analyse), blandt andre.

Forventet resultat: Forskerne forventer at finde øget inflammation og immuncelleinfiltration i det juxta-tumorale fedtvæv og ændret ekspression af inflammatoriske gensignaturer, som forskerne kan undersøge yderligere i WP 2.

WP 2: VURDERING AF INFLAMMATORISK REAKTION I JUXTA-TUMORAL FEDTVÆV I BRYSTCANCER VED HJÆLP AF IMMUNOHISTOKEMI OG BILLEDMASSE-CYTOMETRI.

Baggrund: Brystkræftceller interagerer med det omgivende væv og forårsager betændelse og immuncelleinfiltration i tumoren og fedtvævet. Billeddiagnostisk massecytometri har vist, at immuncelleinfiltration i tumorer korrelerer med prognose, men endnu er der ingen undersøgelser, der undersøger, om fedtvævet omkring tumoren også viser strukturelle mønstre for immuncelleinfiltration. Derfor vil forskningen undersøge fedtvævet omkring brystkræfttumorer ved hjælp af Hyperion™ Imaging Mass Cytometri.

Design: Prospektivt eksplorativt studie Patienter, materiale og effektberegning: Vævsprøver indsamles fra 30 prospektivt opnåede mastektomiprøver med tre forskellige molekylære undergrupper (Luminal A, Luminal B og Basal lignende brystkræft), 10 i hver gruppe. Fedtvæv opsamles i en gradient væk fra tumor og fra den kontralaterale kvadrant som en kontrolprøve (fig. 2). En stikprøve på 30 patienter vurderes at være tilstrækkelig til en eksplorativ undersøgelse af denne art.

Metoder: Et Hyperion™ IMC-panel på op til 50 unikke antistoffer vil blive udviklet baseret på et allerede eksisterende og valideret panel tilgængeligt på UoB-kernefaciliteten, som forskerne tidligere med succes har brugt i andre projekter. Det tilgængelige panel vil blive yderligere udvidet baseret på resultater fra WP 1 og først valideret på "ikke-essentielle" brystvævsprøver, før de anvendes på de ovenfor beskrevne undersøgelsesprøver. Ved at bruge Hyperion™ IMC har forskerne til hensigt at analysere niveauerne af inflammatorisk reaktion i det juxta-tumorale fedtvæv. IMC-data vil blive analyseret med histoCAT+, MAV og FlowJo (typisk brugt til flowcytometridataanalyse, men også særdeles velegnet til høj-parameter billeddannelsesanalyse). Endvidere vil forskerne være i stand til at bruge genekspressionsdata for kendte og nye faktorer, identificeret i WP 1, og visualisere, om ekspressionen er generaliseret eller opdelt i fedtvævet. Normalt fedtbrystvæv fra den kontralaterale kvadrant vil blive brugt som kontrol. For mere detaljeret at undersøge BC's indflydelse på inflammation af juxta-tumoralt fedtvæv af de forskellige molekylære subtyper, har forskerne også til hensigt at farve væv fra tre vævssegmenter, der strækker sig fra tumoren for at afgøre, om niveauerne afhænger af afstanden fra tumor eller den molekylære subtype (fig. 1). Betændelsen i det juxta-tumorale fedtvæv vil også blive vurderet morfologisk ved brug af IHC. Dette vil give os mulighed for at vælge regioner af interesse at undersøge ved hjælp af IMC.

Forventet resultat: Forskerne forventer at finde øget inflammation og immuncelleinfiltration i fedtvævet nær tumoren og at identificere nye biomarkører i fedtvævet, hvilket muliggør undersøgelse af den kliniske betydning i WP 3.

WP 3: INFLAMMATORISK REAKTION I JUXTA-TUMOURAL FEDTVÆV VED BRYSTCANCER OG KLINISK UDKOMM.

Baggrund:

Immunhistokemi er en hjørnesten i brystkræftdiagnostik og fungerer som hovedmodaliteten til at identificere molekylære undergrupper af brystkræft og spredningsmarkører såsom Ki-67. Dette er afgørende for at bestemme, hvilket behandlingsregime der er bedst egnet til den specifikke patient. Heterogenitet i tumorvævet (både tumorceller og infiltrerende immunceller) er blevet forbundet med forskelle i klinisk udfald, men det vides endnu ikke, om det samme gælder for fedtvævet omkring tumoren. Således vil forskerne undersøge juxta-tumoralt fedtvæv for inflammation og immuncelleinfiltration og korrelere dette med kliniske resultater hos brystkræftpatienter.

Design: Klinisk observationsstudie

Patienter og metoder: Et antal på 3500 brystkræftpatienter opsamles i en biobank med en median opfølgningstid på 15 år. Et stort udvalg af vævsprøver fra disse patienter vil blive vurderet med hensyn til immunceller i fedtvævet og biomarkører opdaget i WP 1 og 2 ved hjælp af IHC. Prøverne vil blive stratificeret i tre grupper i henhold til molekylære undergrupper (dvs. Luminal A, Luminal B og Basal lignende brystkræft). Vævsglassene vil blive analyseret og resultaterne korreleret med det kliniske resultat fra patientjournalerne (adgang til journaler er allerede godkendt af REK). Ved hjælp af Cox proportional hazard ratio og log-rank test vil forskerne evaluere den effekt, øget inflammation i fedtvæv har på patientens overlevelsesevne.

Kraftberegning: Forskerne estimerede teststyrken af ​​forskellen i gentagelsesfri overlevelse mellem patienter positive og negative for juxta-tumorinflammation som vurderet af IHC og IMC. Effektmålet er hazard rate (HR) som beregnet ved Cox-regressionsmetoden. For eksempel: 1000 patienter med en recidivrate på 15 % vil have skabt mindst 150 endepunkter. Hvis inflammationsraten er 20%, vil forskerne have en 80% magt til at opdage en overlevelsesforskel med et hazard ratio (HR) på 1,80 eller derover.

Forventet resultat: Denne sidste arbejdspakke er designet til at give principielt bevis på, at det er muligt at inkorporere histologisk undersøgelse af juxta-tumoralt fedtvæv som en del af brystkræftdiagnostik. I et længere perspektiv sigter forskningen mod at identificere nye specifikke biomarkører for immuninfiltration i fedtvæv, der korrelerer med uønskede resultater hos brystkræftpatienter. Sådanne biomarkører kan tjene som prædiktive værktøjer til at identificere patienter, der er egnede til adjuverende antiinflammatorisk eller immunmodulerende behandling.

-------------------------------------------------- -----------------------------------------------

D. Overvåg bivirkninger, QoL, depression, træthed og arbejdslivsdeltagelse Baggrund

Behandling af brystkræft anvender al kirurgi, kemoterapi, strålebehandling og forskellige målrettede terapimuligheder som antiøstrogen og anti HER-2 terapi. Disse behandlingsmuligheder skaber generende bivirkninger både i et kortsigtet og langsigtet perspektiv. Det er vigtigt, at der for nylig er blevet opdaget mere komplekse sammenhænge mellem onkologiske behandlingsmodaliteter og subjektive helbredsproblemer hos brystkræftpatienter. Trætheds-, angst- og depressionsscore er sandsynligvis funktionelle udlæsninger af den samlede behandlingsbyrde. Behandlingen mod kræft har også en væsentlig indvirkning på livskvalitet og sociale aspekter for de kræftoverlevere, som strækker sig til deltagelse i arbejdslivet. Sygefravær (SL) fem år efter brystkræftdiagnosen er mere afhængig af sociale faktorer end af sygdom (2). Derfor rammer brystkræft kvinderne to gange; først sygdomsbyrden derefter de sosioøkonomiske bekymringer. Brystkræftoverlevere har næsten 3 gange højere risiko for at modtage førtidspension (DP) sammenlignet med kræftfrie patienter i et retrospektivt registerbaseret studie (3). Imidlertid var denne undersøgelse baseret på for det meste forladte onkologiske behandlingsregimer.

Mål

Formålet med denne undersøgelse er at identificere risikofaktorer for at blive en langsigtet SL-, WAA- eller DP-modtager ved en dybdegående kvalitativ analyse og en blandet metode ved at triangulere PROM-data, kliniske/biologiske data og NAV-data. Brug af NAV-data som endepunkter vil give værdifuld information til klinikere og praktiserende læger, som kan optimere opfølgningen også i forhold til deltagelse i arbejdslivet. Derfor har efterforskerne et robust undersøgelsesdesign til at identificere fiskfaktorer for høje SL-, WAA- og DP-rater. I sidste ende sigter efterforskerne mod at sænke de økonomiske udgifter, brystkræft genererer for samfundet.

Studiedesign/materiale & metoder.

Undersøgelsesdesignet er et observationsstudie, hvor efterforskerne i nærværende undersøgelse vil kortlægge raterne af og denty fisk-faktorer for høj SL, WAA og DP blandt brystkræftoverlevere med de opdaterede behandlingsplaner. Efterforskerne vil følge en 4-trins translationel tilgang:

1. Efterforskerne vil først gennemføre en eksplorativ kvalitativ undersøgelse ved hjælp af dokumentanalyse af sundheds- og arbejdslivspolitik i norsk kontekst, kombineret med empiriske data fra semistrukturerede interviews og fokusgruppe med 20 højrisikopatienter) for at blive analyseret tematisk. Den teoretiske ramme for dette kvalitative projekt er udledt af symbolsk interaktionisme, hvor afdækning og forståelse af betydning i specifikke sammenhænge er et mål. Da meningsfulde sociale og professionelle interaktioner er vigtige for psykosocial rehabilitering af brystkræftindivider, er symbolsk interaktionisme en passende metodisk ramme. Denne kvalitative tilgang vil skabe grundlaget for tilgangen i de PROM-baserede og NAV-database-orienterede undersøgelser nedenfor.

2. NAV- data

   Efterforskerne samarbejder i øjeblikket med vicedirektør Anneline Christine Teigen og seniorkonsulent Günter Olsborg i NAV-Rogaland og Mikrodata-sektionen hos Statistisk sentralbyrå (SSB). Målet med dette samarbejde er at få mere viden om brugen af ​​sociale sikringsydelser blandt brystkræftpatienter sammen med NAV-Rogalands eksperter og sammen med SSB bruge FD-trygd databasen til at opnå pålidelige prospektive sociodemografiske data om SL'er (både korte og lange semester), Arbejdsvurderingsgodtgørelse (WAA) (Arbeidsavklaringspenger) og UP'er (begge tidsbegrænsede

   & livslang) for hver patient i denne PerMoBreCan-undersøgelse.

3. Patientrapporterede udfaldsmål (PROM) data opnås ved baseline og derefter årligt fra alle PerMoBreCan-patienter. PROM-dataene består af 1.HRQoL-instrumenter (EORTC QLQ-C30,EORTC QLQ-BR23 og FAKTA B), 2.Hospital Anxiety and Depression Scale, HAD, 3. Fatigue-instrumenter Fatique Impact Scale, FIS; Fatugue Severity Scale (FSS) og VAS-fatigue, 4. Bivirkningsspørgeskemaer, 5. Ledsmertespørgeskema, 6. The Mishel Uncertainty in Illness Scale, MUIS; og 7. Spørgeskemaet om madvaner og 8.ROMA III-spørgeskemaet over tarmproblemer (IBD og IBS).
4. Biomarkør identifikation.

Alle patienter, der deltager i denne undersøgelse, vil blive screenet på cirkulerende biomarkører relateret til træthed. Disse biomarkører er på proteinniveau, genetisk ekspressionsniveau og også på epigenetisk niveau. Vores længe etablerede behagelige samarbejde med prof. Roald Omdal ved Stavanger Universitetshospital, som er klinisk immuolog og transaltional træthedsforsker, er forpligtet til at udføre disse analyser i sit forskningslaboratorium.