Prospektivní biobankování rakoviny prsu (PBCB)

A. Včasná detekce systémových relapsů u karcinomu prsu.

WP 1. Analýza primárního nádoru.

Analýza primárního nádoru a metastáz (skupina Patologie). V tomto pracovním balíčku budou DNA i RNA z primárních nádorů 125 vysoce rizikových (Luminal-B) pacientů analyzovány pomocí sekvenování nové generace (NGS). Kromě toho budou vyšetřovatelé také analyzovat DNA a RNA z dostupných metastatických lézí (aktuálně dostupný materiál pro 3/8), které se objevily a objeví během období studie.

MiRNA a mRNA budou profilovány pomocí PureLink™ miRNA Isolation Kit (Invitrogen), Dynabeads mRNA direct micro kit (Ambion) a Ion total RNA-seq kit V2 (Life Technologies) na našem přístroji Ion Proton NGS. Bioinformatické analýzy párových expresních profilů mRNA a mikroRNA budou použity k odhalení rozdílně exprimovaných mikroRNA mezi pacienty s recidivami a bez nich v průběhu léčby. Tato data budou spojena s našimi předchozími studiemi a použita k identifikaci cílových kandidátů pro analýzu mikroRNA v exozomech a TEP.

Kromě toho bude NGS prováděna také na DNA z primárních nádorů a metastáz k ověření mutací DNA zejména v ER a dalších známých onkogenech, včetně těch, které byly vyšetřeny ve WP3. Sekvenování DNA bude provedeno pomocí Oncomine Comprehensive Assay. Jedná se o přístup založený na amplikonu analyzující aktivní SNV, indely a CNV. Tyto analýzy nám poskytnou biologické porozumění a základní znalosti pro každý z jednotlivých nádorů a tyto soubory dat lze také porovnat s nedávno publikovanými daty.

WP 2. Cirkulující nádorové buňky (CTC).

Cirkulující nádorové buňky (onkologická skupina) Cirkulující nádorové buňky jsou obohacovány ze vzorků periferní krve hustotní centrifugací a následnou imunomagnetickou deplecí leukocytů. Onkologická skupina nedávno vyvinula a zveřejnila novou depleční metodu nazvanou MINDEC (Multimarker Immunomagnetic Negative Depletion Enrichment of CTCs), která má vyšší míru obnovy a obohacení. RNA a DNA jsou izolovány současně z obohacené frakce, aby byla umožněna detekce CTC přístupy na bázi RNA i DNA. Specifické markery mRNA s vysokými hladinami v nádorových buňkách a nízkými hladinami v normálních leukocytech jsou předamplifikovány a kvantifikovány pomocí PCR v reálném čase jako zástupné markery pro CTC. Součástí panelu markerů jsou jak epiteliálně specifické markery, tak markery související s epiteliálním mezenchymálním přechodem. Až dosud vyšetřovatel analyzoval 170 po sobě jdoucích krevních vzorků z větší kohorty PBCB, obohacených o proceduru MINDEC a našel důkazy pro CTC u asi 20 % vzorků (od pacientů s nízkým i vysokým rizikem), což je zjištění, které nás povzbuzuje. pokračovat v tomto projektu. Vyšetřovatelé také analyzovali vzorky krve od 30 zdravých dobrovolnic pro srovnání. Budou analyzovány všechny odebrané vzorky krve od 125 vysoce rizikových pacientů (cca 575 vzorků). Přítomnost nebo hladina CTC v analyzovaných vzorcích bude později porovnána se známými prognostickými faktory, léčebným účinkem a výsledkem onemocnění.

WP 3. cirkulující nádorová DNA (ctDNA).

Nádorově specifické mutace mohou být použity jako markery pro ctDNA, protože nejsou přítomny v normálních buňkách a normální plazmatické DNA. Onkologická skupina nedávno prokázala klinický význam měření ctDNA u rakoviny pankreatu. Vyšetřovatelé nyní budou měřit hladiny ctDNA ve vzorcích plazmy od vysoce rizikových pacientek s rakovinou prsu cíleným sekvenováním nové generace. Nedávno vydaný „Oncomine breast cfDNA assay“ (Thermo Fisher) bude použit k detekci mutací v panelu deseti genů, které jsou u rakoviny prsu často mutovány. Test je založen na molekulárním čárovém kódování templátů a umožňuje reprodukovatelnou detekci mutací až do 0,1 % kontrolních vzorků. Vezmeme-li v úvahu nízkou koncentraci bezbuněčné DNA (=cfDNA) v plazmě (typicky 10 ng na ml krve), považuje se za dostatečnou citlivost 0,1 %. Sekvenování bude provedeno na našem přístroji Ion Proton NGS (Life Technologies). V tomto WP budou analyzovány předoperační vzorky krve a roční kontrolní vzorky od 125 vysoce rizikových pacientů. Vzorky krve od 30 zdravých dobrovolnic již byly odebrány a budou analyzovány pro srovnání.

Přítomnost a úroveň nádorově specifických mutací bude analyzována ve vztahu k účinku léčby a výsledku onemocnění. Bude porovnán mutační profil v biopsii primárního nádoru a ve vzorcích plazmy, aby se odhalila potenciální heterogenita. Kromě toho budou longitudinální změny v mutačním profilu ctDNA porovnány s vývojem onemocnění, aby se potenciálně osvětlily biologické mechanismy způsobující rezistenci na léčbu nebo pozdní relapsy onemocnění.

WP 4. mikroRNA (miRNA)

Cirkulující mikroRNA z exozomů a TEP (skupina patologie) Celková RNA bude izolována z exozomů a TEP z krevních vzorků odebraných před a během léčby. Výzkumníci nedávno zavedli metody pro izolaci celkové RNA z exozomů (pomocí exoRNeasy sérum Plasma kit (Qiagen) a miRCURY RNA isolation kit (Exiqon)) a TEP. Pomocí uvedeného protokolu již byla izolována celková RNA z exozomů ze všech 125 vysoce rizikových pacientů při první návštěvě/před léčbou, navíc z posledních odebraných vzorků krve od těchto pacientů bude izolována celková RNA jak z exozomů, tak z TEP. Kromě toho bude na izolované RNA proveden profil mikroRNA pomocí potrubí a platformy již vytvořené pro náš přístroj Ion Proton. Tyto profily budou porovnány s bioinformatickou analýzou profilů mRNA-miRNA z primárního nádoru (WP1) a vzorků odebraných před léčbou. MikroRNA, která není přítomna ve vzorku tkáně a/nebo ve vzorku krve před léčbou, ale objeví se v krvi těsně předtím, než se objeví recidiva, lze poté zpětně vysledovat v předchozích vzorcích krve, aby bylo možné zjistit, jak citlivé jsou tyto mikroRNA při předpovídání léčby. odpor. Profil mikroRNA z TEP bude porovnán s profilem mikroRNA z exozomů a s profily mRNA-miRNA z primárního nádoru (WP1, aby se zjistilo, zda TEP odráží nádor a zda mají potenciál předpovídat relaps).

WP 5. Metabolomika

Metabolomika je studium malých molekul obsahujících substráty, meziprodukty a konečné produkty buněčného metabolismu, jako jsou aminokyseliny, cukry a malé organické kyseliny. Metabolický stav rakovinných buněk je podstatně změněn ve srovnání s normálními buňkami, což je skutečnost, kterou lze využít pro diagnostické účely. Specifické metabolické signatury z nádorové tkáně poskytují další informace pro určení podtypů karcinomu prsu a predikci výsledku1. Například zvýšené hladiny laktátu a glycinu v nádoru souvisí se špatnou prognózou u pacientů s rakovinou pozitivní na estrogenový receptor (ER). Metabolomické analýzy primárních nádorů také prokázaly prediktivní hodnotu ve vztahu k neoadjuvantní léčbě pacientů s lokálně pokročilým onemocněním.

Ukázalo se také, že cirkulující metabolity poskytují prognostické informace u operabilního karcinomu prsu a dále rozvrstvují riziko v rámci existujících geneticky určených kategorií rizika. Důležité je, že metabolomické změny mohou vzniknout přímo nebo nepřímo z mikrometastatického onemocnění, spíše než z primárního nádoru. Nedávno výzkumníci prokázali, že systémové hladiny laktátu a pyruvátu předpovídají horší výsledek u pacientek s operabilními ER-pozitivními karcinomy prsu. Tkáň sousedící s nádorem a imunologické odpovědi mohou také přispět ke změněnému metabolomickému profilu. Existují také důkazy, že metabolické profilování může být použito pro monitorování pacientů u některých druhů rakoviny, i když u rakoviny prsu takové důkazy stále chybí. Výzkumníci proto hodlají prozkoumat, zda je pooperační monitorování pomocí metabolického profilování v krvi užitečné pro včasnou detekci recidivy karcinomu prsu.

WP 6. Integrativní molekulární monitorování pro detekci recidivy

Nová technologie způsobila revoluci v úrovni biologických informací, které lze získat z klinických vzorků, reprezentovaných novými „omickými“ termíny genomika, transkriptomika, metabolomika atd. Dostupnost tak velkých souborů dat, a to i ve veřejné doméně, podnítila vývoj integračních metod, které mohou extrahovat důležité informace z více kombinovaných zdrojů dat. Tyto přístupy odhalily překvapivá nová spojení mezi omickými datovými soubory, jejichž příkladem je spojení mezi bezbuněčnou fragmentací DNA a genovou expresí46. V souladu s tím byly naše znalosti o rakovině prsu také rozšířeny o integrativní přístupy, což vede k komplexnějšímu porozumění této nemoci. Prognostická subklasifikace rakoviny prsu byla například upřesněna a byly identifikovány nové nádorově specifické antigeny. Bylo dokonce prokázáno, že integrovaná molekulární data mají vyšší prognostickou sílu než samostatné molekulární hladiny u rakoviny prsu. V současném projektu je proto plánována kombinovaná analýza úrovní genetických (ctDNA), transkriptomických (miRNA) a metabolomických dat ve vzorcích periferní krve, aby se maximalizoval jejich společný biomarkerový potenciál u operovatelného karcinomu prsu.

Vzorové výpočty velikosti.

Výzkumníci provedli výpočty velikosti vzorku pomocí softwaru SPSS Sample Power. Tyto výpočty ukázaly, že při testování prognostické hodnoty detekce ctDNA/CTC před operací by mělo být 125 vysoce rizikových pacientů dostačujících k tomu, aby bylo možno získat log rank test 80 %. Výpočty velikosti vzorku vycházely z kvalifikovaného předpokladu, že průměrné 5leté přežití ve vysoce rizikové skupině je 90 %, zatímco v ctDNA/CTC pozitivní a negativní podskupině je to 75 % a 95 %. Z odhadovaných 125 pacientů bylo 30 považováno za pozitivních na ctDNA/CTC a 95 negativních.

-------------------------------------------------- -------------------------------------------------- -----

B. Zlepšit monitorování tamoxifenu u rakoviny prsu

Asi 75 % všech karcinomů prsu patří k luminálním podtypům, které exprimují hormonální receptory Estrogenový receptor a progesteronový receptor. Tito pacienti jsou léčeni antiestrogenními léky; tamoxifen a/nebo inhibitory aromatázy. Dva nejaktivnější metabolity tamoxifenu jsou Z-4OHtam a Z-4OHNDtam (Z-endoxifen) mají 30-100krát vyšší afinitu k ER než tamoxifen. Tyto metabolity v konečném důsledku představují blokující účinek na úrovni ER s cílem vymýtit mikrometastatické onemocnění a jsou zodpovědné za lepší přežití po zavedení této adjuvantní systémové léčby. Přímé měření těchto metabolitů obchází všechny poruchy způsobené rozmanitostí aktivity CYP2D6, tj. alternativními metabolickými cestami, adherencí k léku a inhibicí lékových interakcí. Naše nová metodika LC/MS-MS bere v úvahu všechny výše uvedené proměnné a poskytuje funkční zprávu o sérové ​​hladině aktivních metabolitů tamoxifenu u jednotlivého pacienta. Touto metodou lze také rozlišit mezi neaktivními a aktivními izomery endoxifenu a 4-OHtamu, což jsou nejaktivnější metabolity tamoxifenu blokující ER. Ve spolupráci s Oslo Breast Cancer Research Group výzkumníci nedávno v retrospektivní observační studii prokázali, že pacienti s nízkými sérovými koncentracemi Z-4OHtamu < 3,26 nM nebo Z-Endoxifenu < 9,00 nM (asi 12 % všech pacientů) mají signifikantní horší specifické a celkové přežití pro karcinom prsu než pacientky se sérovými koncentracemi nad těmito prahovými hodnotami (upravená HR = 4,3; CI95 = 1,9-13,6) (červené křivky na obrázku 4). Pacientky s velmi vysokou hladinou těchto metabolitů (přibližně 12 % pacientek) neměly žádné specifické cílové parametry pro prsa Nyní musí výzkumníci tento objev ověřit v nezávislých materiálech od pacientů. Bude-li to ověřeno, bude to mít přímý klinický přínos pro 25 % pacientek s ER+ karcinomem prsu plánujících adjuvantní léčbu tamoxifenem. Takové terapeutické monitorování léčiv (TDM) by mohlo identifikovat rizikové pacienty s neadekvátními hladinami aktivních metabolitů tamoxifenu. To by u těchto pacientů mohlo vést ke zvýšení dávky nebo přechodu na alternativní formu endokrinní léčby. Pacienti s velmi vysokými hladinami metabolitů mohou pokračovat v léčbě tamoxifenem a nemusí přecházet na inhibitor aromatázy.

TDM se tedy může ukázat jako paradigmatický posun v endokrinní tam léčbě ER-pozitivního karcinomu prsu. Důležité je, že vzdálenost od „bench to bed“ v této studii je velmi krátká díky našim nedávným zjištěním, proveditelné metodě a více než 30 letům zkušeností s tamoxifenem v klinickém prostředí.

-------------------------------------------------- -------------------------------------------------- -----

C. Nádorové mikroprostředí u karcinomu prsu - tuková stromální imunitní infiltrace a interakce s nádorem v růstové zóně

Pozadí: Karcinom prsu je stále nejběžnějším typem rakoviny u žen v západním světě, včetně Norska. Ročně je v Norsku diagnostikováno přibližně 3 500 nových pacientek s rakovinou prsu. Během posledních 50 let se výskyt rakoviny prsu v Norsku více než zdvojnásobil. Zajímavé je, že ve stejném časovém rámci se nadváha a obezita znepokojivě zvýšily. Molekulární podtypování nádorů rakoviny prsu zlepšilo pochopení jejich vnitřní biologie. To otevřelo možnost personalizovanějšího přístupu k léčbě a zlepšilo výsledky u pacientek s rakovinou prsu za posledních 20 let.

Kromě molekulární subtypizace se dnes diagnostika karcinomu prsu skládá ze stagingu (prostřednictvím TNM-klasifikačního systému) a mikroskopického vyšetření patologem. Přibývá důkazů o prognostické hodnotě hodnocení nádorového mikroprostředí (např. tumor infiltrující lymfocyty (TIL) jako součást diagnostiky u karcinomu prsu, ale v klinické praxi zatím není implementována. Vysoký počet TIL je silně spojen s dobrou prognózou u pacientek s triple-negativním karcinomem prsu, ale neprokázal žádnou takovou korelaci u luminálního karcinomu prsu. Makrofágy v tukové tkáni prsu se diferencují do dvou odlišných fenotypů, často klasifikovaných jako M1 a M2 s nárůstem druhého u rakoviny prsu. M1 napadá a fagocytuje rakovinné buňky, zatímco M2 má protizánětlivé vlastnosti a bylo prokázáno, že má funkce podporující nádor.

Tento projekt rozšíří naše znalosti o interakci mezi primárním nádorem prsu a infiltrací imunitních buněk v juxta-tumorální tukové tkáni. Naše zjištění budou korelovat s molekulárními podtypy rakoviny prsu, blízkostí nádoru, markery proliferace a nakonec s klinickým výsledkem. Vědci se domnívají, že tyto znalosti poskytnou nové prediktivní cíle pro imunomodulační adjuvantní terapii rakoviny. Tento doktorandský projekt má tři vzájemně propojené pracovní balíčky (WP) s konečným cílem identifikovat markery zánětu v juxta-tumorové tukové tkáni, které jsou relevantní pro klinické hodnocení adjuvantní terapie rakoviny prsu. Ve WP 1 a 2 bude charakterizována fenotypová a genomická krajina juxta-tumorální tukové tkáně a ve WP 3 budou výzkumy zkoumat, zda tyto znalosti mohou předpovídat klinický výsledek.

Projekt je založen na silné regionální spolupráci mezi Univerzitní nemocnicí Haukeland (HUH) a Fakultní nemocnicí Stavanger (SUH). Pro současný projekt výzkumníci systematickým způsobem odebírali tukovou a nádorovou tkáň od 30 po sobě jdoucích pacientek s rakovinou prsu podstupujících mastektomii na SUH. Chirurgické vzorky prsu jsou bez prodlení předány patologovi, který pod morfologickou kontrolou odebere příslušnou tkáň z invazivní fronty a jádra (0,5x1x1 cm) primárního nádoru. Patolog také odebere a morfologicky ověří kontroly z normální prsní tkáně (2000 mg) ze vzdáleného kontralaterálního kvadrantu. Tkáň se odebírá v duplikátech párů. Jeden ze vzorků se okamžitě rychle zmrazí v kapalném dusíku pro konzervaci, zatímco druhá polovina každého páru je konzervována ve formalínu a fixována v parafínu (FFPE). Navíc tři páry vzorků tukové tkáně (každý 1x1x1 cm) s rostoucí vzdáleností od hranice nádoru vytvoří gradient tukové tkáně z invazivní přední části nádorové oblasti. Shromážděné gradienty se také okamžitě rychle zmrazí v kapalném dusíku a jedna polovina z každého páru se uloží jako FFPE. Výzkumníci provedli pilotní studii potvrzující dostatečný výtěžek RNA ze vzorků zmrazené tkáně pro sekvenování RNA.

Tkáň se odebírá jako součást biobanky pro obecný výzkum, Prospective Breast Cancer Biobank (PBCB) (REK# 2010/1957), probíhajícího projektu biobanky.

Retrospektivní kohorta Stavangeru se skládá ze všech pacientek s rakovinou prsu, u kterých byla v letech 1993 - 2004 diagnostikována první invazivní rakovina prsu na katedře patologie Fakultní nemocnice Stavanger. Jelikož je SUH jedinou nemocnicí v regionu, jedná se o skutečnou populační biobanku, již jsou zahrnuty klinicko-patologické údaje jako: grading, stadium, TNM, léčba a markery proliferace (Ki-67, PPH3/MAI); poslední klinické sledování proběhlo v roce 2016.

Výzkumy mají čtyři hlavní hypotézy související se zánětem a infiltrací imunitních buněk u rakoviny prsu:

1. Juxta-tumorální tuková tkáň v blízkosti hranice nádoru vykazuje zvýšenou úroveň zánětu a infiltrace imunitních buněk.
2. Zánět a infiltrace imunitních buněk se tlumí se zvětšující se vzdáleností od hranice nádoru.
3. Existují rozdíly v zánětu a infiltraci imunitních buněk mezi různými podtypy rakoviny prsu (Luminal A, Luminal B a Basal like).
4. Zvýšený zánět a infiltrace imunitních buněk korelují s nepříznivým klinickým výsledkem (tj. relapsu onemocnění).

4.1 NÁVRH STUDIE, METODY A ANALÝZY

Výzkumy mají čtyři hlavní hypotézy související se zánětem a infiltrací imunitních buněk u rakoviny prsu:

1. Juxta-tumorální tuková tkáň v blízkosti hranice nádoru vykazuje zvýšenou úroveň zánětu a infiltrace imunitních buněk.
2. Zánět a infiltrace imunitních buněk se tlumí se zvětšující se vzdáleností od hranice nádoru.
3. Existují rozdíly v zánětu a infiltraci imunitních buněk mezi různými podtypy rakoviny prsu (Luminal A, Luminal B a Basal like).
4. Zvýšený zánět a infiltrace imunitních buněk korelují s nepříznivým klinickým výsledkem (tj. relapsu onemocnění).

WP 1: MORFOLOGICKÉ A GENOMICKÉ MAPOVÁNÍ INFILTRACE IMUNITNÍCH BUNĚK V TUKOVÉ tkáni OKOLNÍ RAKOVINA PRSU

Východiska: Zánět je důležitým faktorem pro rozvoj nádoru (16). Bylo prokázáno, že tuková tkáň v blízkosti rakoviny prsu má zvýšenou infiltraci imunitních buněk, ale zatím není známo, jak to souvisí s molekulárními podtypy a/nebo blízkostí nádoru. Výzkumy použijí IHC a RNA-sekvenování k vyhodnocení úrovně zánětu, infiltrace imunitních buněk a signatur imunitní genové exprese v tukové tkáni obklopující rakovinu prsu.

Typ: Prospektivní explorativní studie Pacienti, výpočet materiálu a výkonu: Z prospektivně odebraných vzorků mastektomie se odebírá tuková tkáň. Vzorky tkání se odebírají ze tří různých molekulárních podskupin (Luminální A, Luminální B a Basal like karcinom prsu), 10 v každé skupině. Jádrové biopsie se odebírají v gradientu s rostoucí vzdáleností od hranice nádoru (obr. 1). Norské konsorcium genomiky (NGC) potvrdilo, že velikosti vzorků, které jsou založeny na výběru konkrétních podtypů rakoviny prsu, jsou dostatečné pro statistickou sílu.

Metody: Sklíčka formalínem fixované tkáně z nádoru, invazivní přední a tukové tkáně (obr. 1) budou barvena pomocí IHC a protilátek proti imunitním buňkám (celkové imunitní buňky, CD45; T buňky, CD3, CD8, FoxP3; myeloidní buňky, CD68 , HLA-DR). Sklíčka budou hodnocena mikroskopicky a výsledky budou korelovány s molekulárními podskupinami karcinomu prsu, lokalizací ve vztahu k nádorovým a proliferačním markerům (tj. Ki67, PPH3 a MAI). Paralelně budou výzkumníci provádět sekvenování RNA na zmrazené tkáni odebrané ze stejných vzorků tkáně, jak je popsáno výše. Na datech RNAseq bude použito několik přístupů analýzy. Kromě analýzy průzkumných dat, specifických analytických algoritmů včetně dekonvolučních imunitních buněk (ABIS, CIBERSORTx) a konkrétněji sledování imunitních signatur nádoru (analýza TIP), mimo jiné.

Očekávaný výsledek: Výzkumy očekávají, že naleznou zvýšený zánět a infiltraci imunitních buněk v juxta-tumorální tukové tkáni a změněnou expresi zánětlivých genových signatur, které mohou výzkumníci dále zkoumat ve WP 2.

WP 2: POSOUZENÍ ZÁNĚTLIVÉ REAKCE V JUXTA-TUMURÁLNÍ TUKOVÉ tkáni U RAKOVINY PRSU POMOCÍ IMUNOHISTOCHEMIE A ZOBRAZENÍ HROMADNÉ CYTOMETRIE.

Pozadí: Buňky rakoviny prsu interagují s okolní tkání a způsobují zánět a infiltraci imunitních buněk do nádoru a tukové tkáně. Zobrazovací hmotnostní cytometrie prokázala, že infiltrace imunitních buněk do nádorů koreluje s prognózou, ale zatím neexistují žádné studie, které by zkoumaly, zda tuková tkáň obklopující nádor také vykazuje strukturální vzorce infiltrace imunitními buňkami. Proto budou výzkumy zkoumat tukovou tkáň obklopující nádory rakoviny prsu pomocí Hyperion™ Imaging Mass Cytometry.

Design: Prospektivní explorativní studie Pacienti, výpočet materiálu a výkonu: Vzorky tkání jsou odebrány z 30 prospektivně získaných mastektomických vzorků se třemi různými molekulárními podskupinami (Luminální A, Luminální B a Basal jako karcinom prsu), 10 v každé skupině. Tuková tkáň se odebírá v gradientu směrem od nádoru a z kontralaterálního kvadrantu jako kontrolní vzorek (obr. 2). Velikost vzorku 30 pacientů se považuje za dostatečnou pro explorativní studii tohoto druhu.

Metody: Bude vyvinut panel Hyperion™ IMC s až 50 unikátními protilátkami na základě již existujícího a ověřeného panelu dostupného v základním zařízení UoB, který výzkumníci dříve úspěšně použili v jiných projektech. Dostupný panel bude dále rozšířen na základě zjištění z WP 1 a nejprve ověřen na "nepodstatných" vzorcích prsní tkáně před použitím na výše popsaných vzorcích pro studii. Pomocí Hyperion™ IMC mají výzkumníci v úmyslu analyzovat úrovně zánětlivé reakce v juxta-tumorové tukové tkáni. Data IMC budou analyzována pomocí histoCAT+, MAV a FlowJo (typicky používané pro analýzu dat průtokové cytometrie, ale také velmi vhodné pro analýzu vysokoparametrového zobrazení). Dále budou výzkumníci schopni využít data genové exprese známých a nových faktorů, identifikovaných ve WP 1, a vizualizovat, zda je exprese v tukové tkáni generalizovaná nebo kompartmentalizovaná. Jako kontrola bude použita normální tuková prsní tkáň z kontralaterálního kvadrantu. Aby bylo možné podrobněji prozkoumat vliv BC na zánět juxta-tumorové tukové tkáně různých molekulárních subtypů, výzkumy také zamýšlejí obarvit tkáň ze tří tkáňových segmentů vyčnívajících z nádoru, aby se zjistilo, zda hladiny závisí na vzdálenost od nádoru nebo molekulární podtyp (obr. 1). Zánět v juxta-tumorální tukové tkáni bude také hodnocen morfologicky pomocí IHC. To nám umožní vybrat oblasti zájmu k prozkoumání pomocí IMC.

Očekávaný výsledek: Výzkumy očekávají, že naleznou zvýšený zánět a infiltraci imunitních buněk v tukové tkáni poblíž nádoru a identifikují nové biomarkery v tukové tkáni, což umožní prozkoumat klinický význam ve WP 3.

WP 3: ZÁNĚTLÁ REAKCE V JUXTA-NÁDOROVÉ TUKOVÉ tkáni U RAKOVINY PRSU A KLINICKÉ VÝSLEDKY.

Pozadí:

Imunohistochemie je základním kamenem diagnostiky rakoviny prsu a slouží jako hlavní modalita pro identifikaci molekulárních podskupin rakoviny prsu a proliferačních markerů, jako je Ki-67. To je zásadní pro určení, jaký léčebný režim je pro konkrétního pacienta nejvhodnější. Heterogenita v nádorové tkáni (nádorových buňkách i infiltrujících imunitních buňkách) byla spojena s rozdílem v klinickém výsledku, ale zatím není známo, zda totéž platí pro tukovou tkáň obklopující nádor. Výzkumy tedy budou zkoumat juxta-tumorovou tukovou tkáň na zánět a infiltraci imunitních buněk a korelovat to s klinickým výsledkem u pacientek s rakovinou prsu.

Typ studie: Klinická observační studie

Pacienti a metody: V biobance se shromáždilo 3500 pacientek s karcinomem prsu s mediánem doby sledování 15 let. Velký výběr vzorků tkání od těchto pacientů bude hodnocen s ohledem na imunitní buňky v tukové tkáni a biomarkery objevené ve WP 1 a 2 pomocí IHC. Vzorky budou stratifikovány do tří skupin podle molekulárních podskupin (tj. Luminální A, Luminální B a Bazální jako rakovina prsu). Tkáňové preparáty budou analyzovány a výsledky budou korelovány s klinickými výsledky z časopisů pacientů (přístup k časopisům je již schválen REK). Pomocí Coxova proporcionálního poměru rizika a log-rank testu budou výzkumy hodnotit účinek zvýšeného zánětu v tukové tkáni na přežití pacienta.

Výpočet síly: Výzkumy odhadly sílu testu rozdílu v přežití bez recidivy mezi pacienty pozitivními a negativními na juxta tumorový zánět, jak bylo hodnoceno pomocí IHC a IMC. Měřítkem účinku je míra rizika (HR) vypočítaná Coxovou regresní metodou. Například: 1000 pacientů s 15% mírou recidivy vytvoří alespoň 150 koncových bodů. Pokud je míra zánětu 20 %, výzkumníci budou mít 80% sílu detekovat rozdíl v přežití s ​​poměrem rizika (HR) 1,80 nebo vyšším.

Očekávaný výstup: Tento poslední pracovní balíček je navržen tak, aby poskytl principiální důkaz, že je možné začlenit histologické vyšetření juxta-tumorové tukové tkáně jako součást diagnostiky karcinomu prsu. V delší perspektivě se výzkumy zaměřují na identifikaci nových specifických biomarkerů imunitní infiltrace v tukové tkáni, které korelují s nepříznivým výsledkem u pacientek s rakovinou prsu. Takové biomarkery mohou sloužit jako prediktivní nástroje pro identifikaci pacientů vhodných pro adjuvantní protizánětlivou nebo imunomodulační léčbu.

-------------------------------------------------- -----------------------------------------------

D. Monitorování vedlejších účinků, kvality života, deprese, únavy a účasti v pracovním životě Pozadí

Léčba rakoviny prsu využívá veškerou chirurgii, chemoterapii, radioterapii a různé možnosti cílené terapie, jako je antiestrogenová a anti HER-2 terapie. Tyto možnosti léčby vytvářejí nepříjemné vedlejší účinky z krátkodobého i dlouhodobého hlediska. Důležité je, že nedávno byly objeveny složitější vztahy mezi modalitami onkologické terapie a subjektivními zdravotními obtížemi u pacientek s rakovinou prsu. Skóre únavy, úzkosti a deprese jsou pravděpodobně funkčními výsledky celkové léčebné zátěže. Protirakovinná léčba má také podstatný dopad na kvalitu života a sociální aspekty pacientů, kteří přežili rakovinu, což se rozšiřuje i na pracovní život. Nemocenská dovolená (SL) pět let po diagnóze rakoviny prsu více závisí na sociálních faktorech než na nemoci (2). Rakovina prsu tedy zasáhne ženy dvakrát; nejprve nemoc, pak socioekonomické starosti. Ženy, které přežily rakovinu prsu, mají téměř 3x vyšší riziko, že poberou invalidní důchod (DP), ve srovnání s pacientkami bez rakoviny v retrospektivní studii založené na registru (3). Tato studie však byla založena na převážně opuštěných režimech onkologické léčby.

Cíle

Cílem této studie je identifikovat rizikové faktory pro to, abyste se stali dlouhodobým přijímačem SL, WAA nebo DP, pomocí hloubkové kvalitativní analýzy a přístupu smíšené metody pomocí triangulace dat PROM, klinických/biologických dat a dat NAV. Použití údajů NAV jako koncových bodů poskytne cenné informace lékařům a praktickým lékařům, kteří mohou optimalizovat sledování také s ohledem na zapojení do pracovního života. Vyšetřovatelé tedy mají k dispozici robustní design studie, aby identifikovali fisk faktory pro vysoké míry SL, WAA a DP. Cílem vyšetřovatelů je v konečném důsledku snížit finanční náklady, které rakovina prsu společnosti generuje.

Návrh studie / materiál a metody.

Design studie je observační studie, kde výzkumníci budou v této studii mapovat četnost a denty fisk faktory pro vysokou SL, WAA a DP mezi pacientkami, které přežily rakovinu prsu, s aktuálními plány léčby. Vyšetřovatelé budou postupovat podle 4krokového translačního přístupu:

1. Vyšetřovatelé nejprve provedou průzkumnou kvalitativní studii využívající analýzu dokumentů politiky zdraví a pracovního života v norském kontextu, kombinovanou s empirickými daty z polostrukturovaných rozhovorů a ohniskové skupiny s 20 vysoce rizikovými pacienty, které budou tematicky analyzovány. Teoretický rámec tohoto kvalitativního projektu vychází ze symbolického interakcionismu, ve kterém je cílem odhalování a pochopení významu v konkrétních kontextech. Vzhledem k tomu, že smysluplné sociální a profesní interakce jsou důležité pro psychosociální rehabilitaci jedinců s rakovinou prsu, je symbolický interakcionismus vhodným metodologickým rámcem. Tento kvalitativní přístup vytvoří základy přístupu v níže uvedených studiích zaměřených na PROM a NAV.

2. NAV- data

   Vyšetřovatelé v současné době spolupracují s viceředitelkou Anneline Christine Teigen a senior konzultantem Günterem Olsborgem v NAV-Rogaland a v sekci Mikrodata ve Statistics Norway (SSB). Cílem této spolupráce je získat více znalostí o využívání služeb sociálního zabezpečení u pacientek s rakovinou prsu společně s experty NAV-Rogaland a společně s SSB využívat databázi FD-trygd k získání spolehlivých prospektivních sociodemografických dat o SL (krátkých i dlouhých). období), Příspěvek za pracovní hodnocení (WAA) (Arbeidsavklaringspenger) a RP (obojí časově omezené

   & celoživotní) pro každého pacienta v této studii PerMoBreCan.

3. Data pacientem hlášených výsledků měření (PROM) se získávají na začátku a poté každý rok od všech pacientů s PerMoBreCan. Data PROM se skládají z 1. HRQoL nástrojů (EORTC QLQ-C30, EORTC QLQ-BR23 a FACT B), 2. Nemocniční škály úzkosti a deprese, HAD, 3. Únavové nástroje Fatique Impact Scale, FIS; Fatugue Severity Scale (FSS) a VAS-únava, 4. Dotazníky vedlejších účinků, 5. Dotazník bolesti kloubů, 6. Mishelova nejistota ve škále nemocí, MUIS; a 7. Dotazník stravovacích návyků a 8.ROMA III dotazník střevních potíží (IBD a IBS).
4. Identifikace biomarkerů.

Všichni pacienti účastnící se této studie budou vyšetřeni na cirkulující biomarkery související s únavou. Tyto biomarkery jsou na úrovni proteinů, na úrovni genetické exprese a také na úrovni epigenetické. Naše dlouholetá příjemná spolupráce s prof. Roald Omdal z Fakultní nemocnice Stavanger, který je klinickým imuologem a výzkumníkem transaltionální únavy, se zavázal provádět tyto analýzy ve své výzkumné laboratoři.