Biobanco prospectivo de cáncer de mama (PBCB)

A. Detección temprana de recaídas sistémicas en cáncer de mama.

WP 1. Análisis del tumor primario.

Análisis de tumor primario y metástasis (grupo de Patología). En este paquete de trabajo, tanto el ADN como el ARN de los tumores primarios de 125 pacientes de alto riesgo (Luminal-B) serán analizados mediante secuenciación de próxima generación (NGS). Además, los investigadores también analizarán el ADN y el ARN de las lesiones metastásicas disponibles (actualmente material disponible para 3/8) que han aparecido y aparecerán durante el período de estudio.

El miARN y el ARNm se perfilarán con el kit de aislamiento de miARN PureLink™ (Invitrogen), el microkit directo de ARNm Dynabeads (Ambion) y el kit Ion total RNA-seq V2 (Life Technologies) en nuestro instrumento Ion Proton NGS. Se utilizarán análisis bioinformáticos de perfiles de expresión de ARNm y microARN emparejados para revelar microARN expresados ​​diferencialmente entre pacientes con y sin recurrencias bajo tratamiento. Estos datos se vincularán con nuestros estudios anteriores y se utilizarán para identificar candidatos objetivo para el análisis de microARN en exosomas y TEP.

Además, la NGS también se realizará en el ADN de los tumores primarios y las metástasis para verificar las mutaciones del ADN, especialmente en ER y otros oncogenes conocidos, incluidos los examinados en WP3. La secuenciación del ADN se realizará mediante el ensayo integral Oncomine. Este es un enfoque basado en amplicón que analiza SNV, indeles y CNV de punto de acceso. Estos análisis nos proporcionarán una comprensión biológica y un conocimiento previo de cada uno de los tumores individuales, y estos conjuntos de datos también se pueden comparar con los datos publicados recientemente.

WP 2. Células tumorales circulantes (CTC).

Células tumorales circulantes (grupo de Oncología) Las células tumorales circulantes se están enriqueciendo a partir de muestras de sangre periférica mediante centrifugación de densidad y el posterior agotamiento inmunomagnético de los leucocitos. El grupo de oncología ha desarrollado y publicado recientemente un nuevo método de agotamiento, denominado MINDEC (Multi-marker Immuno- magnetic Negative Depletion Enrichment of CTCs), que tiene tasas superiores de recuperación y enriquecimiento. El ARN y el ADN se aíslan simultáneamente de la fracción enriquecida, para permitir la detección de CTC mediante enfoques basados ​​en ARN y ADN. Se están preamplificando y cuantificando mediante PCR en tiempo real marcadores de ARNm específicos, con niveles elevados en las células tumorales y niveles bajos en los leucocitos normales, como marcadores sustitutos de las CTC. Tanto los marcadores epiteliales específicos como los marcadores relacionados con la transición mesenquimatosa epitelial forman parte del panel de marcadores. Hasta ahora, los investigadores han analizado 170 muestras de sangre consecutivas de la cohorte más grande de PBCB, enriquecidas por el procedimiento MINDEC y encontraron evidencia de CTC en aproximadamente el 20 % de las muestras (tanto de pacientes de bajo como de alto riesgo), un hallazgo que nos alienta. para continuar con este proyecto. Los investigadores también analizaron muestras de sangre de 30 voluntarias sanas para comparar. Se analizarán todas las muestras de sangre recolectadas de 125 pacientes de alto riesgo (alrededor de 575 muestras). La presencia o el nivel de CTC en las muestras analizadas se comparará más tarde con los factores de pronóstico conocidos, el efecto del tratamiento y el resultado de la enfermedad.

WP 3. ADN tumoral circulante (ctDNA).

Las mutaciones específicas de tumor se pueden utilizar como marcadores para ctDNA porque no están presentes en las células normales y el ADN plasmático normal. El grupo de oncología ha demostrado recientemente la relevancia clínica de las mediciones de ctDNA en el cáncer de páncreas. Los investigadores ahora medirán los niveles de ctDNA en muestras de plasma de pacientes con cáncer de mama de alto riesgo mediante secuenciación dirigida de próxima generación. El "ensayo Oncomine mama cfDNA" (Thermo Fisher) lanzado recientemente se utilizará para detectar mutaciones en un panel de diez genes que mutan con frecuencia en el cáncer de mama. El ensayo se basa en códigos de barras moleculares de plantillas y permite la detección reproducible de mutaciones hasta el 0,1 % de las muestras de control. Teniendo en cuenta la baja concentración de ADN libre de células (=cfDNA) en plasma (normalmente 10 ng por ml de sangre), se considera suficiente una sensibilidad del 0,1 %. La secuenciación se realizará en nuestro instrumento Ion Proton NGS (Life Technologies). En este WP se analizará la muestra de sangre preoperatoria y las muestras de seguimiento anual de los 125 pacientes de alto riesgo. Ya se han recolectado muestras de sangre de 30 voluntarias sanas y se analizarán para comparar.

La presencia y el nivel de mutaciones específicas del tumor se analizarán en relación con el efecto del tratamiento y el resultado de la enfermedad. Se comparará el perfil mutacional en la biopsia del tumor primario y las muestras de plasma para revelar la posible heterogeneidad. Además, los cambios longitudinales en el perfil de mutación de ctDNA se compararán con el desarrollo de la enfermedad para arrojar luz sobre los mecanismos biológicos que causan la resistencia al tratamiento o las recaídas tardías de la enfermedad.

WP 4. microARN (miARN)

MicroARN circulante de exosomas y TEP (grupo de patología) El ARN total se aislará de exosomas y TEP de las muestras de sangre tomadas antes y durante el tratamiento. Los investigadores establecieron recientemente métodos para el aislamiento del ARN total de los exosomas (usando el kit de plasma de suero exoRNeasy (Qiagen) y el kit de aislamiento de ARN miRCURY (Exiqon)) y TEP. Con el protocolo mencionado, ya se aisló el ARN total de los exosomas de la primera visita/antes del tratamiento de los 125 pacientes de alto riesgo; además, de las últimas muestras de sangre recolectadas de estos pacientes, se aislará el ARN total tanto de los exosomas como de los TEP. Además, el perfil de microARN se realizará en el ARN aislado utilizando la canalización y la plataforma ya establecidas para nuestro instrumento Ion Proton. Estos perfiles se compararán con el análisis bioinformático de los perfiles mRNA-miRNA del tumor primario (WP1) y las muestras tomadas antes del tratamiento. Los microARN que no están presentes en la muestra de tejido y/o en la muestra de sangre antes del tratamiento, pero que aparecen en la sangre justo antes de que aparezca una recurrencia, pueden rastrearse retrospectivamente en muestras de sangre anteriores para ver qué tan sensibles son estos microARN para predecir el tratamiento. resistencia. El perfil de microARN de los TEP se comparará con el perfil de microARN de los exosomas y con los perfiles de ARNm-miARN del tumor primario (WP1, para ver si los TEP reflejan el tumor y si tienen el potencial de predecir una recaída.

WP 5. Metabolómica

La metabolómica es el estudio de moléculas pequeñas que comprenden sustratos, productos intermedios y productos finales del metabolismo celular, como aminoácidos, azúcares y ácidos orgánicos pequeños. El estado metabólico de las células cancerosas se altera sustancialmente en comparación con las células normales, un hecho que puede utilizarse con fines de diagnóstico. Las firmas metabólicas específicas del tejido tumoral brindan información adicional para la determinación de los subtipos de cáncer de mama y la predicción del resultado1. Por ejemplo, el aumento de los niveles de lactato y glicina en el tumor está relacionado con un mal pronóstico en pacientes con cáncer con receptor de estrógeno (RE) positivo. Los análisis metabolómicos de tumores primarios también han demostrado valor predictivo en relación con el tratamiento neoadyuvante de pacientes con enfermedad localmente avanzada.

También se ha demostrado que los metabolitos circulantes brindan información pronóstica en el cáncer de mama operable y estratifican aún más el riesgo dentro de las categorías de riesgo determinadas genéticamente existentes. Es importante destacar que las alteraciones metabolómicas pueden surgir directa o indirectamente de la enfermedad micrometastásica, en lugar del tumor primario. Recientemente, los investigadores han demostrado que los niveles sistémicos de lactato y piruvato predicen un resultado inferior en pacientes con cánceres de mama positivos para RE operables. El tejido adyacente al tumor y las respuestas inmunológicas también pueden contribuir a un perfil metabólico alterado. También hay evidencia de que el perfil metabólico se puede usar para el seguimiento de pacientes en algunos tipos de cáncer, aunque aún falta tal evidencia en el cáncer de mama. Por lo tanto, los investigadores tienen la intención de investigar si el seguimiento postoperatorio por medio de perfiles metabólicos en sangre es útil para la detección temprana de la recurrencia del cáncer de mama.

WP 6. Monitoreo molecular integrativo para la detección de recurrencia

La nueva tecnología ha revolucionado el nivel de información biológica que se puede obtener de muestras clínicas, representada por los nuevos términos "ómicos" genómica, transcriptómica, metabolómica, etc. La disponibilidad de conjuntos de datos tan grandes, incluso en el dominio público, ha fomentado el desarrollo de métodos integradores que pueden extraer información vital de múltiples fuentes de datos combinadas. Estos enfoques han revelado nuevas conexiones sorprendentes entre conjuntos de datos ómicos, ejemplificadas por un vínculo entre la fragmentación del ADN libre de células y la expresión génica46. En consecuencia, nuestro conocimiento sobre el cáncer de mama también se ha ampliado mediante enfoques integradores, lo que ha dado como resultado una comprensión más completa de la enfermedad. La subclasificación pronóstica de los cánceres de mama, por ejemplo, se ha perfeccionado y se han identificado nuevos antígenos específicos de tumores. Incluso se ha demostrado que los datos moleculares integrados tienen un mayor poder pronóstico que los niveles moleculares separados en el cáncer de mama. Por lo tanto, en el proyecto actual se planea un análisis combinado de los niveles de datos genéticos (ctDNA), transcriptómicos (miRNA) y metabolómicos en muestras de sangre periférica para maximizar su potencial conjunto de biomarcadores en el cáncer de mama operable.

Cálculos del tamaño de la muestra.

Los investigadores realizaron cálculos del tamaño de la muestra utilizando el software SPSS Sample Power. Estos cálculos demostraron que 125 pacientes de alto riesgo deberían ser suficientes para dar una potencia de prueba de rango logarítmico del 80 %, al probar el valor pronóstico de la detección de ctDNA/CTC antes de la cirugía. Los cálculos del tamaño de la muestra se basaron en la suposición calificada de que la tasa de supervivencia promedio a 5 años en el grupo de alto riesgo es del 90 %, mientras que es del 75 % y el 95 % en los subgrupos positivos y negativos para ctDNA/CTC, respectivamente. De los 125 pacientes estimados, se supuso que 30 eran positivos para ctDNA/CTC y 95 negativos.

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B. Mejorar el seguimiento farmacológico del tamoxifeno en el cáncer de mama

Alrededor del 75% de todos los cánceres de mama pertenecen a los subtipos luminales, que expresan los receptores hormonales Receptor de estrógeno y Receptor de progesterona. Estos pacientes son tratados con fármacos antiestrogénicos; tamoxifeno y/o inhibidores de la aromatasa. Los dos metabolitos de tamoxifeno más activos son Z-4OHtam y Z-4OHNDtam (Z-endoxifeno) que tienen entre 30 y 100 veces más afinidad por la ER que el tamoxifeno. Estos metabolitos constituyen en última instancia el efecto de bloqueo a nivel de ER con el objetivo de erradicar la enfermedad micrometastásica y son responsables de la mejora de la supervivencia tras el establecimiento de este tratamiento sistémico adyuvante. La medición directa de estos metabolitos evita todas las alteraciones de la diversidad de la actividad de CYP2D6, es decir, vías metabólicas alternativas, adherencia al fármaco e inhibición de las interacciones farmacológicas. Nuestra novedosa metodología LC/MS-MS tiene en cuenta todas las variables mencionadas anteriormente y proporciona un informe de lectura funcional del nivel sérico de los metabolitos activos de tamoxifeno en el paciente individual. Este método también puede distinguir entre los isómeros inactivos y activos de endoxifeno y 4-OHtam, que son los metabolitos bloqueadores de ER más activos del tamoxifeno. En colaboración con el Oslo Breast Cancer Research Group, los investigadores demostraron recientemente en un estudio observacional retrospectivo que los pacientes con concentraciones séricas bajas de Z-4OHtam < 3,26 nM o Z-endoxifeno < 9,00 nM (alrededor del 12 % de todos los pacientes) tienen una peor supervivencia específica y total del cáncer de mama que las pacientes con concentraciones séricas por encima de estos umbrales (HR ajustado = 4,3; IC95 = 1,9-13,6) (curvas rojas en la Figura 4). Los pacientes con un nivel muy alto de estos metabolitos (aproximadamente el 12 % de los pacientes) no tenían criterios de valoración específicos de la mama. Ahora, los investigadores deben validar este descubrimiento en materiales de pacientes independientes. Si se valida, supondrá un beneficio clínico directo para el 25 % de las pacientes con cáncer de mama ER + que planifican un tratamiento adyuvante con tamoxifeno. Tal monitoreo de medicamentos terapéuticos (TDM) podría identificar pacientes de riesgo con niveles inadecuados de metabolitos activos de tamoxifeno. Esto podría conducir a un aumento de la dosis o cambiar a una forma alternativa de tratamiento endocrino en estos pacientes. Los pacientes con niveles muy altos de metabolitos pueden continuar con tamoxifeno y no necesitan cambiar a un inhibidor de la aromatasa.

Por lo tanto, TDM puede llegar a ser un cambio paradigmático en el tratamiento endocrino tam del cáncer de mama ER positivo. Es importante destacar que la distancia desde el "banco a la cama" en este estudio es muy corta debido a nuestros hallazgos recientes, un método factible y más de 30 años de experiencia con tamoxifeno en el entorno clínico.

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C. Microambiente tumoral en el cáncer de mama: infiltración inmune del estroma adiposo e interacción con el tumor en la zona de crecimiento

Antecedentes: el cáncer de mama sigue siendo el tipo de cáncer más común entre las mujeres del mundo occidental, incluida Noruega. Anualmente, se diagnostican alrededor de 3500 nuevos pacientes noruegos con cáncer de mama. Durante los últimos 50 años, la incidencia de cáncer de mama en Noruega se ha más que duplicado. Curiosamente, durante el mismo período de tiempo, el sobrepeso y la obesidad han aumentado de manera alarmante. La subtipificación molecular de los tumores de cáncer de mama ha mejorado la comprensión de su biología intrínseca. Esto se ha abierto a un enfoque de tratamiento más personalizado y ha mejorado el resultado de las pacientes con cáncer de mama en los últimos 20 años.

Además de la subtipificación molecular, el diagnóstico del cáncer de mama en la actualidad consiste en la estadificación (a través del sistema de clasificación TNM) y el examen microscópico por parte de un patólogo. Cada vez hay más pruebas del valor pronóstico de evaluar el microambiente tumoral (p. linfocitos infiltrantes de tumores (TIL)) como parte del diagnóstico en el cáncer de mama, pero hasta el momento esto no se implementa en la práctica clínica. Un alto número de TIL está fuertemente asociado con un buen pronóstico en pacientes con cáncer de mama triple negativo, pero no ha mostrado tal correlación en el cáncer de mama luminal. Los macrófagos en el tejido adiposo mamario se diferencian en dos fenotipos distintos, a menudo clasificados como M1 y M2 con un aumento de este último en el cáncer de mama. M1 ataca y fagocita las células cancerosas, mientras que M2 tiene propiedades antiinflamatorias y se ha demostrado que tiene funciones promotoras de tumores.

El presente proyecto aumentará nuestro conocimiento de la interacción entre el tumor primario de mama y la infiltración de células inmunes en el tejido adiposo yuxta-tumoral. Nuestros hallazgos se correlacionarán con los subtipos moleculares de cáncer de mama, la proximidad al tumor, los marcadores de proliferación y, en última instancia, con el resultado clínico. Los investigadores razonan que este conocimiento proporcionará nuevos objetivos predictivos para la terapia adyuvante inmunomoduladora contra el cáncer. Este proyecto de doctorado tiene tres paquetes de trabajo (WP) interrelacionados con el objetivo final de identificar marcadores de inflamación en el tejido adiposo yuxtatumoral que sean relevantes en la evaluación clínica de la terapia adyuvante del cáncer de mama. En los WP 1 y 2, se caracterizará el panorama fenotípico y genómico del tejido adiposo yuxtatumoral, y en el WP 3, los investigadores investigarán si este conocimiento puede predecir el resultado clínico.

El proyecto se basa en una sólida colaboración regional entre el Hospital Universitario de Haukeland (HUH) y el Hospital Universitario de Stavanger (SUH). Para el presente proyecto, los investigadores recolectaron de manera sistemática tejido adiposo y tumoral de 30 pacientes consecutivas con cáncer de mama sometidas a mastectomía en el SUH. Los especímenes quirúrgicos de la mama son enviados sin demora al patólogo quien, bajo control morfológico, toma muestras del tejido relevante del frente invasivo y del núcleo (0,5x1x1 cm) del tumor primario. El patólogo también recolectará y verificará morfológicamente controles de tejido mamario normal (2000 mg) del cuadrante contralateral distante. El tejido se recoge en pares duplicados. Una de las muestras se congela inmediatamente en nitrógeno líquido para su conservación, mientras que la otra mitad de cada par se conserva en formalina y se fija en parafina (FFPE). Además, tres pares de muestras de tejido adiposo (cada una de 1x1x1 cm) con una distancia creciente desde el borde del tumor formarán un gradiente de tejido adiposo desde el frente invasivo del área del tumor. Los gradientes recolectados también se congelan inmediatamente en nitrógeno líquido y la mitad de cada par se almacena como FFPE. Los investigadores han realizado un estudio piloto que confirma un rendimiento suficiente de ARN de las muestras de tejido congelado para la secuenciación de ARN.

El tejido se recolecta como parte del biobanco de investigación general, Prospective Breast Cancer Biobank (PBCB) (REK# 2010/1957), un proyecto de biobanco en curso.

La cohorte retrospectiva de Stavanger consta de todas las pacientes con cáncer de mama diagnosticadas con cáncer de mama invasivo de primera aparición en el departamento de Patología del Hospital Universitario de Stavanger, entre 1993 y 2004. Siendo el SUH el único hospital de la región este es un verdadero biobanco de base poblacional, ya se incluyen datos clinicopatológicos como: clasificación, estadio, TNM, tratamiento y marcadores de proliferación (Ki-67, PPH3/MAI); último seguimiento clínico realizado en 2016.

Las investigaciones tienen cuatro hipótesis principales relacionadas con la inflamación y la infiltración de células inmunitarias en el cáncer de mama:

1. El tejido adiposo yuxtatumoral cercano al borde del tumor muestra un mayor nivel de inflamación e infiltración de células inmunitarias.
2. La inflamación y la infiltración de células inmunitarias se atenúan a medida que aumenta la distancia desde el borde del tumor.
3. Existen diferencias en la inflamación y la infiltración de células inmunitarias entre los diferentes subtipos de cáncer de mama (Luminal A, Luminal B y similar al Basal).
4. El aumento de la inflamación y la infiltración de células inmunitarias se correlacionan con un resultado clínico adverso (es decir, recaída de la enfermedad).

4.1 DISEÑO DEL ESTUDIO, MÉTODOS Y ANÁLISIS

Las investigaciones tienen cuatro hipótesis principales relacionadas con la inflamación y la infiltración de células inmunitarias en el cáncer de mama:

1. El tejido adiposo yuxtatumoral cercano al borde del tumor muestra un mayor nivel de inflamación e infiltración de células inmunitarias.
2. La inflamación y la infiltración de células inmunitarias se atenúan a medida que aumenta la distancia desde el borde del tumor.
3. Existen diferencias en la inflamación y la infiltración de células inmunitarias entre los diferentes subtipos de cáncer de mama (Luminal A, Luminal B y similar al Basal).
4. El aumento de la inflamación y la infiltración de células inmunitarias se correlacionan con un resultado clínico adverso (es decir, recaída de la enfermedad).

WP 1: MAPEO MORFOLÓGICO Y GENÓMICO DE LA INFILTRACIÓN DE CÉLULAS INMUNITARIAS EN EL TEJIDO ADIPOSO ALREDEDOR DEL CÁNCER DE MAMA

Antecedentes: la inflamación es un facilitador importante para el desarrollo de tumores (16). Se ha demostrado que el tejido adiposo cercano al cáncer de mama tiene una mayor infiltración de células inmunitarias, pero aún no se sabe cómo se relaciona esto con los subtipos moleculares y/o la proximidad al tumor. Los investigadores utilizarán IHC y secuenciación de ARN para evaluar el nivel de inflamación, la infiltración de células inmunitarias y las firmas de expresión de genes inmunitarios en el tejido adiposo que rodea el cáncer de mama.

Diseño: Estudio exploratorio prospectivo Pacientes, material y cálculo de potencia: El tejido adiposo se recolecta de las muestras de mastectomía recolectadas prospectivamente. Las muestras de tejido se recolectan de tres subgrupos moleculares diferentes (Luminal A, Luminal B y Basal como el cáncer de mama), 10 en cada grupo. Las biopsias centrales se recogen en un gradiente a medida que aumenta la distancia desde el borde del tumor (fig. 1). El Norwegian Genomics Consortium (NGC) ha confirmado que los tamaños de muestra que se basan en la selección de subtipos específicos de cáncer de mama son suficientes para poder estadístico.

Métodos: Los portaobjetos de tejido tumoral fijado con formalina, frente invasivo y tejido adiposo (fig. 1) se tiñerán mediante IHC y anticuerpos contra las células inmunitarias (células inmunitarias totales, CD45; células T, CD3, CD8, FoxP3; células mieloides, CD68). , HLA-DR). Los portaobjetos se evaluarán mediante microscopía y los resultados se correlacionarán con subgrupos moleculares de cáncer de mama, localización en relación con marcadores tumorales y de proliferación (es decir, Ki67, PPH3 y MAI). Paralelamente, los investigadores realizarán la secuenciación del ARN en tejido congelado recogido de las mismas muestras de tejido descritas anteriormente. Se utilizarán varios enfoques de análisis en los datos de RNAseq. Excepto para el análisis de los datos, los algoritmos de análisis específicos exploratorios incluyen la deconvolución de las células inmunitarias (ABIS, CIBERSORTx) y, más específicamente, la observación de las firmas inmunitarias tumorales (análisis TIP), entre otros.

Resultado esperado: Los investigadores esperan encontrar una mayor inflamación e infiltración de células inmunitarias en el tejido adiposo yuxtatumoral y una expresión alterada de las firmas de genes inflamatorios que los investigadores pueden investigar más a fondo en el WP 2.

WP 2: EVALUACIÓN DE LA REACCIÓN INFLAMATORIA EN TEJIDO ADIPOSO YUXTA-TUMORAL EN CÁNCER DE MAMA MEDIANTE INMUNOHISTOQUÍMICA Y CITOMETRÍA DE MASA POR IMÁGENES.

Antecedentes: las células de cáncer de mama interactúan con el tejido circundante y provocan inflamación e infiltración de células inmunitarias en el tumor y el tejido adiposo. La citometría de masas por imágenes ha demostrado que la infiltración de células inmunitarias en los tumores se correlaciona con el pronóstico, pero hasta el momento no hay estudios que examinen si el tejido adiposo que rodea el tumor también muestra patrones estructurales de infiltración de células inmunitarias. Por lo tanto, los investigadores examinarán el tejido adiposo que rodea los tumores de cáncer de mama utilizando la citometría de masas por imágenes Hyperion™.

Diseño: Estudio exploratorio prospectivo Pacientes, material y cálculo de potencia: Las muestras de tejido se recolectan de 30 especímenes de mastectomía obtenidos prospectivamente con tres subgrupos moleculares diferentes (Luminal A, Luminal B y Basal como cáncer de mama), 10 en cada grupo. El tejido adiposo se recoge en un gradiente lejos del tumor y del cuadrante contralateral como muestra de control (fig. 2). Un tamaño de muestra de 30 pacientes se considera suficiente para un estudio exploratorio de este tipo.

Métodos: Se desarrollará un panel IMC Hyperion™ de hasta 50 anticuerpos únicos basado en un panel ya existente y validado disponible en las instalaciones centrales de la UoB que los investigadores han utilizado previamente con éxito en otros proyectos. El panel disponible se ampliará aún más en función de los hallazgos del WP 1 y se validará primero en muestras de tejido mamario "no esenciales" antes de usarse en las muestras de estudio descritas anteriormente. Utilizando Hyperion™ IMC los investigadores pretenden analizar los niveles de reacción inflamatoria en el tejido adiposo yuxtatumoral. Los datos de IMC se analizarán con histoCAT+, MAV y FlowJo (normalmente utilizados para el análisis de datos de citometría de flujo, pero también muy adecuados para el análisis de imágenes de parámetros elevados). Además, los investigadores podrán utilizar datos de expresión génica de factores conocidos y novedosos, identificados en el WP 1, y visualizar si la expresión es generalizada o compartimentada en el tejido adiposo. Se utilizará como control tejido mamario adiposo normal del cuadrante contralateral. Para examinar con más detalle la influencia de BC en la inflamación del tejido adiposo yuxtatumoral de los diversos subtipos moleculares, los investigadores también pretenden teñir tejido de tres segmentos de tejido que se extienden desde el tumor para determinar si los niveles dependen de la distancia al tumor o el subtipo molecular (fig. 1). La inflamación en el tejido adiposo yuxtatumoral también se evaluará morfológicamente mediante IHC. Esto nos permitirá seleccionar regiones de interés para investigar usando IMC.

Resultado esperado: Los investigadores esperan encontrar un aumento de la inflamación y la infiltración de células inmunitarias en el tejido adiposo cerca del tumor e identificar nuevos biomarcadores en el tejido adiposo que permitan investigar la importancia clínica en el WP 3.

WP 3: REACCIÓN INFLAMATORIA EN TEJIDO ADIPOSO YUXTA-TUMORAL EN CÁNCER DE MAMA Y RESULTADO CLÍNICO.

Fondo:

La inmunohistoquímica es una piedra angular en el diagnóstico del cáncer de mama y sirve como la modalidad principal para identificar subgrupos moleculares de cáncer de mama y marcadores de proliferación como Ki-67. Esto es esencial para determinar qué régimen de tratamiento es el más adecuado para el paciente en particular. La heterogeneidad en el tejido tumoral (tanto las células tumorales como las células inmunitarias infiltrantes) se ha relacionado con la diferencia en el resultado clínico, pero aún no se sabe si lo mismo se aplica al tejido adiposo que rodea el tumor. Por lo tanto, los investigadores examinarán el tejido adiposo yuxtatumoral en busca de inflamación e infiltración de células inmunitarias y correlacionarán esto con el resultado clínico en pacientes con cáncer de mama.

Diseño: Estudio clínico observacional

Pacientes y Métodos: Un número de 3500 pacientes con cáncer de mama se acumulan en un biobanco con una mediana de tiempo de seguimiento de 15 años. Se evaluará una gran selección de muestras de tejido de estos pacientes con respecto a las células inmunitarias en el tejido adiposo y los biomarcadores descubiertos en los WP 1 y 2 mediante IHC. Las muestras se estratificarán en tres grupos según los subgrupos moleculares (es decir, Luminal A, Luminal B y Basal como el cáncer de mama). Los portaobjetos de tejido se analizarán y los resultados se correlacionarán con el resultado clínico de los diarios de los pacientes (el acceso a los diarios ya está aprobado por REK). Usando la razón de riesgo proporcional de Cox y la prueba de rango logarítmico, los investigadores evaluarán el efecto que tiene el aumento de la inflamación en el tejido adiposo sobre la supervivencia del paciente.

Cálculo del poder: Los investigadores estimaron el poder de la prueba de la diferencia en la supervivencia libre de recurrencia entre los pacientes positivos y negativos para la inflamación tumoral yuxta según lo evaluado por IHC e IMC. La medida del efecto es la tasa de riesgo (HR) calculada mediante el método de regresión de Cox. Por ejemplo: 1000 pacientes con una tasa de recurrencia del 15 % habrán creado al menos 150 criterios de valoración. Si la tasa de inflamación es del 20 %, los investigadores tendrán un poder del 80 % para detectar una diferencia de supervivencia con un cociente de riesgos instantáneos (HR) de 1,80 o superior.

Resultado esperado: Este último paquete de trabajo está diseñado para dar una prueba de principio de que es factible incorporar el examen histológico del tejido adiposo yuxtatumoral como parte del diagnóstico del cáncer de mama. A más largo plazo, las investigaciones pretenden identificar nuevos biomarcadores específicos de infiltración inmunitaria en el tejido adiposo que se correlacionen con resultados adversos en pacientes con cáncer de mama. Dichos biomarcadores pueden servir como herramientas predictivas para identificar pacientes elegibles para un tratamiento adyuvante antiinflamatorio o inmunomodulador.

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D. Monitorear los efectos secundarios, la CdV, la depresión, la fatiga y la participación en la vida laboral Antecedentes

El tratamiento del cáncer de mama emplea toda la cirugía, quimioterapia, radioterapia y varias opciones de terapia dirigida, como la terapia antiestrógeno y anti HER-2. Estas opciones de tratamiento crean efectos secundarios molestos tanto a corto como a largo plazo. Es importante destacar que recientemente se han descubierto relaciones más complejas entre las modalidades de terapia oncológica y las quejas de salud subjetivas en pacientes con cáncer de mama. Las puntuaciones de fatiga, ansiedad y depresión son probablemente lecturas funcionales de la carga total del tratamiento. El tratamiento contra el cáncer también tiene un impacto sustancial en la calidad de vida y los aspectos sociales de los sobrevivientes de cáncer que se extienden a la participación en la vida laboral. La baja por enfermedad (SL) cinco años después del diagnóstico de cáncer de mama depende más de factores sociales que de enfermedad (2). Por lo tanto, el cáncer de mama afecta dos veces a las mujeres; primero la carga de la enfermedad, luego las preocupaciones socioeconómicas. Las sobrevivientes de cáncer de mama tienen un riesgo casi 3 veces mayor de recibir una pensión por discapacidad (DP) en comparación con las pacientes sin cáncer en un estudio retrospectivo basado en registros (3). Sin embargo, este estudio se basó en regímenes de tratamiento oncológico en su mayoría abandonados.

Objetivos

El objetivo de este estudio es identificar los factores de riesgo para convertirse en un receptor SL, WAA o DP a largo plazo mediante un análisis cualitativo en profundidad y un enfoque de método mixto mediante la triangulación de datos PROM, datos clínicos/biológicos y datos NAV. El uso de los datos de NAV como puntos finales proporcionará información valiosa a los médicos y médicos generales que pueden optimizar el seguimiento también en lo que respecta a la participación en la vida laboral. Por lo tanto, los investigadores tienen un diseño de estudio robusto para identificar factores fisk para tasas altas de SL, WAA y DP. En última instancia, los investigadores tienen como objetivo reducir los gastos financieros que el cáncer de mama genera a la sociedad.

Diseño del estudio / material y métodos.

El diseño del estudio es un estudio observacional en el que los investigadores mapearán las tasas y los factores de denty fisk para SL, WAA y DP altos entre las sobrevivientes de cáncer de mama con los programas de tratamiento actualizados. Los investigadores seguirán un enfoque traslacional de 4 pasos:

1. Primero, los investigadores realizarán un estudio cualitativo exploratorio utilizando el análisis de documentos de la política de salud y vida laboral en el contexto noruego, combinado con datos empíricos de entrevistas semiestructuradas y grupos focales con 20 pacientes de alto riesgo, para ser analizados temáticamente. El marco teórico de este proyecto cualitativo se deriva del interaccionismo simbólico en el que el objetivo es descubrir y comprender el significado en contextos específicos. Dado que las interacciones sociales y profesionales significativas son importantes para la rehabilitación psicosocial de las personas con cáncer de mama, el interaccionismo simbólico es un marco metodológico apropiado. Este enfoque cualitativo creará las bases del enfoque en los estudios basados ​​en PROM y orientados a bases de datos NAV a continuación.

2. NAV-datos

   Los investigadores colaboran actualmente con la subdirectora Anneline Christine Teigen y el consultor sénior Günter Olsborg en NAV-Rogaland y la sección Mikrodata de Statistics Norway (SSB). El objetivo de esta colaboración es obtener más conocimiento sobre el uso de los servicios de seguridad social entre pacientes con cáncer de mama junto con los expertos de NAV-Rogaland y junto con SSB utilizar la base de datos FD-trygd para obtener datos sociodemográficos prospectivos confiables sobre SL (tanto a corto como a largo plazo). plazo), Work Assessment Allowance (WAA) (Arbeidsavklaringspenger) y DP (ambos por tiempo limitado

   & toda la vida) para cada paciente en el presente estudio PerMoBreCan.

3. Los datos de la medida de resultado informada por el paciente (PROM) se obtienen al inicio y, posteriormente, anualmente de todos los pacientes de PerMoBreCan. Los datos PROM consisten en 1. Instrumentos de CVRS (EORTC QLQ-C30, EORTC QLQ-BR23 y FACT B), 2. Escala de ansiedad y depresión hospitalaria, HAD, 3. Instrumentos de fatiga Escala de impacto de fatiga, FIS; Fatugue Severity Scale (FSS) y VAS-fatiga, 4. Cuestionarios de efectos secundarios, 5. Cuestionario de dolor articular, 6. la Escala de Incertidumbre en la Enfermedad de Mishel, MUIS; y 7. Cuestionario de hábitos alimentarios y 8.Cuestionario ROMA III de molestias intestinales (EII y SII).
4. Identificación de biomarcadores.

Todos los pacientes que asistan a este estudio serán evaluados en biomarcadores circulantes relacionados con la fatiga. Estos biomarcadores se encuentran a nivel proteico, a nivel de expresión genética y también a nivel epigenético. Nuestra agradable cooperación de larga data con el prof. Roald Omdal del Hospital Universitario de Stavanger, que es inmunólogo clínico e investigador de la fatiga transalcional, está comprometido a realizar estos análisis en su laboratorio de investigación.