Biobanque prospective du cancer du sein (PBCB)

A. Détection précoce des rechutes systémiques du cancer du sein.

WP 1. Analyse de la tumeur primitive.

Analyse de la tumeur primitive et des métastases (groupe Pathologie). Dans ce lot de travaux, l'ADN et l'ARN des tumeurs primaires de 125 patients à haut risque (Luminal-B) seront analysés par séquençage de nouvelle génération (NGS). En outre, les enquêteurs analyseront également l'ADN et l'ARN des lésions métastatiques disponibles (matériel actuellement disponible pour 3/8) qui sont apparues et apparaîtront au cours de la période d'étude.

Les miARN et les ARNm seront profilés à l'aide du kit d'isolation de miARN PureLink™ (Invitrogen), du kit de micro-ARNm direct Dynabeads (Ambion) et du kit Ion total RNA-seq V2 (Life Technologies) sur notre instrument Ion Proton NGS. Des analyses bioinformatiques des profils d'expression appariés d'ARNm et de microARN seront utilisées pour révéler des microARN différentiellement exprimés entre les patients avec et sans récidive sous traitement. Ces données seront liées à nos études précédentes et utilisées pour identifier des candidats cibles pour l'analyse des microARN dans les exosomes et les TEP.

En outre, une NGS sera également effectuée sur l'ADN des tumeurs primaires et des métastases pour vérifier les mutations de l'ADN, en particulier dans le RE et d'autres oncogènes connus, y compris ceux examinés dans le WP3. Le séquençage de l'ADN sera effectué à l'aide du test complet Oncomine. Il s'agit d'une approche basée sur les amplicons analysant les SNV, les indels et les CNV des points chauds. Ces analyses nous fourniront une compréhension biologique et des connaissances de base pour chacune des tumeurs individuelles, et ces ensembles de données peuvent également être comparés aux données récemment publiées.

WP 2. Cellules tumorales circulantes (CTC).

Cellules tumorales circulantes (groupe d'oncologie) Les cellules tumorales circulantes sont enrichies à partir d'échantillons de sang périphérique par centrifugation de densité et déplétion immunomagnétique subséquente des leucocytes. Le groupe d'oncologie a récemment développé et publié une nouvelle méthode de déplétion, appelée MINDEC (Multi-marker Immuno-magnetic Negative Depletion Enrichment of CTCs), qui a des taux de récupération et d'enrichissement supérieurs. L'ARN et l'ADN sont isolés simultanément de la fraction enrichie, pour permettre la détection des CTC par des approches basées à la fois sur l'ARN et l'ADN. Des marqueurs d'ARNm spécifiques, avec des niveaux élevés dans les cellules tumorales et de faibles niveaux dans les leucocytes normaux, sont pré-amplifiés et quantifiés par PCR en temps réel en tant que marqueurs de substitution pour les CTC. Les marqueurs épithéliaux spécifiques et les marqueurs liés à la transition mésenchymateuse épithéliale font partie du panel de marqueurs. Jusqu'à présent, les enquêteurs ont analysé 170 échantillons de sang consécutifs de la plus grande cohorte de PBCB, enrichis par la procédure MINDEC et ont trouvé des preuves de CTC dans environ 20 % des échantillons (provenant de patients à faible et à haut risque), une découverte qui nous encourage pour continuer ce projet. Les enquêteurs ont également analysé des échantillons de sang de 30 femmes volontaires en bonne santé à des fins de comparaison. Tous les échantillons de sang prélevés sur 125 patients à haut risque seront analysés (environ 575 échantillons). La présence ou le niveau de CTC dans les échantillons analysés sera ensuite comparé à des facteurs pronostiques connus, à l'effet du traitement et à l'issue de la maladie.

WP 3. ADN tumoral circulant (ctDNA).

Des mutations spécifiques à la tumeur peuvent être utilisées comme marqueurs pour l'ADNct car elles ne sont pas présentes dans les cellules normales et l'ADN plasmatique normal. Le groupe d'oncologie a récemment démontré la pertinence clinique des mesures d'ADNct dans le cancer du pancréas. Les chercheurs vont maintenant mesurer les niveaux d'ADNct dans des échantillons de plasma de patientes atteintes d'un cancer du sein à haut risque par séquençage ciblé de nouvelle génération. Le "Oncomine breast cfDNA assay" (Thermo Fisher) récemment publié sera utilisé pour détecter des mutations dans un panel de dix gènes qui sont fréquemment mutés dans le cancer du sein. Le test est basé sur le code-barres moléculaire des matrices et permet une détection reproductible des mutations jusqu'à 0,1 % d'échantillons de contrôle. Compte tenu de la faible concentration d'ADN acellulaire (=cfDNA) dans le plasma (typiquement 10 ng par ml de sang), une sensibilité de 0,1 % est considérée comme suffisante. Le séquençage sera effectué sur notre instrument Ion Proton NGS (Life Technologies). L'échantillon de sang préopératoire et les échantillons de suivi annuels des 125 patients à haut risque seront analysés dans ce WP. Des échantillons de sang de 30 femmes volontaires en bonne santé ont déjà été prélevés et seront analysés à des fins de comparaison.

La présence et le niveau de mutations spécifiques à la tumeur seront analysés en relation avec l'effet du traitement et l'issue de la maladie. Le profil mutationnel dans la biopsie de la tumeur primaire et les échantillons de plasma seront comparés afin de révéler une hétérogénéité potentielle. De plus, les changements longitudinaux dans le profil de mutation de l'ADNct seront comparés au développement de la maladie pour éventuellement éclairer les mécanismes biologiques à l'origine de la résistance au traitement ou des rechutes tardives de la maladie.

WP 4. microARN (miARN)

MicroARN circulant des exosomes et des TEP (Groupe Pathologie) L'ARN total sera isolé des exosomes et des TEP à partir des prélèvements sanguins effectués avant et pendant le traitement. Les chercheurs ont récemment établi des méthodes d'isolement de l'ARN total à partir d'exosomes (à l'aide du kit exoRNeasy serum Plasma (Qiagen) et du kit d'isolement d'ARN miRCURY (Exiqon)) et des TEP. En utilisant le protocole mentionné, l'ARN total des exosomes a déjà été isolé de tous les 125 patients à haut risque lors de la première visite/avant le traitement, en plus des derniers échantillons de sang prélevés sur ces patients, l'ARN total sera isolé des exosomes et des TEP. De plus, le profil de microARN sera effectué sur l'ARN isolé en utilisant le pipeline et la plate-forme déjà établis pour notre instrument Ion Proton. Ces profils seront comparés à l'analyse bioinformatique des profils ARNm-miARN de la tumeur primitive (WP1) et des prélèvements effectués avant traitement. Les microARN qui ne sont pas présents dans l'échantillon de tissu et/ou dans l'échantillon de sang avant le traitement, mais qui apparaissent dans le sang juste avant l'apparition d'une récidive peuvent ensuite être retrouvés rétrospectivement dans des échantillons de sang précédents afin de voir à quel point ces microARN sont sensibles pour prédire le traitement la résistance. Le profil de microARN des TEP sera comparé au profil de microARN des exosomes et aux profils d'ARNm-miARN de la tumeur primaire (WP1, pour voir si les TEP reflètent la tumeur et s'ils ont le potentiel de prédire la rechute.

WP 5. Métabolomique

La métabolomique est l'étude de petites molécules comprenant des substrats, des intermédiaires et des produits finaux du métabolisme cellulaire, tels que les acides aminés, les sucres et les petits acides organiques. L'état métabolique des cellules cancéreuses est considérablement modifié par rapport aux cellules normales, un fait qui peut être utilisé à des fins de diagnostic. Les signatures métaboliques spécifiques du tissu tumoral fournissent des informations supplémentaires pour la détermination des sous-types de cancer du sein et la prédiction des résultats1. Par exemple, l'augmentation des taux de lactate et de glycine dans les tumeurs est liée à un mauvais pronostic chez les patients atteints d'un cancer positif aux récepteurs des œstrogènes (RE). Les analyses métabolomiques des tumeurs primaires ont également démontré une valeur prédictive par rapport au traitement néoadjuvant des patients atteints d'une maladie localement avancée.

Il a également été démontré que les métabolites circulants fournissent des informations pronostiques sur le cancer du sein opérable et stratifient davantage le risque au sein des catégories de risque génétiquement déterminées existantes. Il est important de noter que les altérations métabolomiques peuvent découler directement ou indirectement d'une maladie micrométastatique, plutôt que d'une tumeur primaire. Récemment, les chercheurs ont montré que les niveaux systémiques de lactate et de pyruvate prédisent des résultats inférieurs chez les patientes atteintes de cancers du sein opérables ER-positifs. Les tissus adjacents à la tumeur et les réponses immunologiques peuvent également contribuer à un profil métabolomique altéré. Il existe également des preuves que le profilage métabolique peut être utilisé pour le suivi des patients dans certains cancers, bien que de telles preuves manquent encore dans le cas du cancer du sein. Par conséquent, les chercheurs ont l'intention d'étudier si la surveillance postopératoire au moyen d'un profilage métabolique dans le sang est utile pour la détection précoce de la récidive du cancer du sein.

WP 6. Surveillance moléculaire intégrative pour la détection des récidives

Les nouvelles technologies ont révolutionné le niveau d'informations biologiques pouvant être obtenues à partir d'échantillons cliniques, représentés par les nouveaux termes «omiques» génomique, transcriptomique, métabolomique, etc. La disponibilité de ces grands ensembles de données, même dans le domaine public, a encouragé le développement de méthodes intégratives capables d'extraire des informations vitales à partir de plusieurs sources de données combinées. De nouvelles connexions surprenantes entre les ensembles de données omiques ont été révélées par de telles approches, illustrées par un lien entre la fragmentation de l'ADN acellulaire et l'expression des gènes46. En conséquence, nos connaissances sur le cancer du sein ont également été étendues par des approches intégratives, aboutissant à une compréhension plus complète de la maladie. La sous-classification pronostique des cancers du sein a par exemple été affinée et de nouveaux antigènes spécifiques aux tumeurs ont été identifiés. Il a même été démontré que les données moléculaires intégrées ont un pouvoir pronostique plus élevé que les niveaux moléculaires séparés dans le cancer du sein. Ainsi, une analyse combinée des niveaux de données génétiques (ctDNA), transcriptomiques (miARN) et métabolomiques dans des échantillons de sang périphérique est donc prévue dans le projet actuel afin de maximiser leur potentiel de biomarqueur conjoint dans le cancer du sein opérable.

Calculs de taille d'échantillon.

Les enquêteurs ont effectué des calculs de taille d'échantillon à l'aide du logiciel SPSS Sample Power. Ces calculs ont démontré que 125 patients à haut risque devraient être suffisants pour donner une puissance de test du log-rang de 80 %, lors du test de la valeur pronostique de la détection d'ADNct/CTC avant la chirurgie. Les calculs de la taille de l'échantillon étaient basés sur l'hypothèse qualifiée que le taux de survie moyen à 5 ans dans le groupe à haut risque est de 90 %, alors qu'il est de 75 % et 95 % dans les sous-groupes positifs et négatifs pour l'ADNct/CTC, respectivement. Sur les 125 patients estimés, 30 étaient supposés positifs pour l'ADNct/CTC et 95 négatifs.

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B. Améliorer la pharmacovigilance du tamoxifène dans le cancer du sein

Environ 75 % de tous les cancers du sein appartiennent aux sous-types luminaux, qui expriment les récepteurs hormonaux récepteur des œstrogènes et récepteur de la progestérone. Ces patients sont traités avec des médicaments anti-oestrogéniques ; les inhibiteurs du tamoxifène et/ou de l'aromatase. Les deux métabolites les plus actifs du tamoxifène sont le Z-4OHtam et le Z-4OHNDtam (Z-endoxifène) qui ont une affinité 30 à 100 fois plus élevée pour le RE que le tamoxifène. Ces métabolites constituent in fine l'effet bloquant au niveau du RE visant à éradiquer la maladie micro métastatique et sont responsables de l'amélioration de la survie suite à la mise en place de ce traitement systémique adjuvant. La mesure directe de ces métabolites contourne toutes les perturbations de la diversité de l'activité du CYP2D6, c'est-à-dire les voies métaboliques alternatives, l'adhésion au médicament et l'inhibition des interactions médicamenteuses. Notre nouvelle méthodologie LC / MS-MS prend en compte toutes les variables mentionnées ci-dessus et fournit un rapport de lecture fonctionnelle du taux sérique des métabolites actifs du tamoxifène chez chaque patient. Cette méthode peut également faire la distinction entre les isomères inactifs et actifs de l'endoxifène et du 4-OHtam, qui sont les métabolites ER-bloquants les plus actifs du tamoxifène. En collaboration avec le groupe de recherche sur le cancer du sein d'Oslo, les chercheurs ont récemment montré dans une étude observationnelle rétrospective que les patients présentant de faibles concentrations sériques de Z-4OHtam < 3,26 nM ou de Z-endoxifène < 9,00 nM (environ 12 % de tous les patients) ont des survie spécifique et totale du cancer du sein moins bonne que les patientes dont les concentrations sériques sont supérieures à ces seuils (RR ajusté = 4,3 ; IC95 = 1,9-13,6) (courbes rouges sur la figure 4). Les patientes présentant un niveau très élevé de ces métabolites (environ 12 % des patientes) n'avaient aucun critère d'évaluation spécifique au sein. Désormais, les chercheurs doivent valider cette découverte dans des documents de patients indépendants. S'il est validé, cela apportera un bénéfice clinique direct à 25 % des patientes ER + cancer du sein prévoyant un traitement adjuvant au tamoxifène. Un tel suivi thérapeutique des médicaments (TDM) pourrait identifier les patients à risque présentant des niveaux inadéquats de métabolites actifs du tamoxifène. Cela pourrait conduire à une augmentation de dose ou à un passage à une autre forme de traitement endocrinien chez ces patientes. Les patients présentant des taux de métabolites très élevés peuvent continuer à prendre du tamoxifène et n'ont pas besoin de passer à un inhibiteur de l'aromatase.

Ainsi, le TDM peut s'avérer être un changement paradigmatique dans le traitement endocrinien tam du cancer du sein ER-positif. Il est important de noter que la distance entre le "banc et le lit" dans cette étude est très courte en raison de nos découvertes récentes, d'une méthode réalisable et de plus de 30 ans d'expérience avec le tamoxifène en milieu clinique.

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C. Microenvironnement tumoral dans le cancer du sein - infiltration immunitaire stromale adipeuse et interaction avec la tumeur au niveau de la zone de croissance

Contexte : Le cancer du sein reste le type de cancer le plus courant chez les femmes du monde occidental, y compris la Norvège. Chaque année, environ 3500 nouvelles patientes norvégiennes atteintes d'un cancer du sein sont diagnostiquées. Au cours des 50 dernières années, l'incidence du cancer du sein en Norvège a plus que doublé. Fait intéressant, au cours de la même période, le surpoids et l'obésité ont augmenté de façon alarmante. Le sous-typage moléculaire des tumeurs du cancer du sein a amélioré la compréhension de sa biologie intrinsèque. Cela a ouvert la voie à une approche de traitement plus personnalisée et amélioré les résultats pour les patientes atteintes d'un cancer du sein au cours des 20 dernières années.

Outre le sous-typage moléculaire, le diagnostic du cancer du sein consiste aujourd'hui en une stadification (via le système de classification TNM) et un examen microscopique par un pathologiste. Il existe de plus en plus de preuves de la valeur pronostique de l'évaluation du microenvironnement tumoral (par ex. lymphocytes infiltrant les tumeurs (TIL)) dans le cadre du diagnostic du cancer du sein, mais cela n'est pas encore mis en œuvre dans la pratique clinique. Un nombre élevé de TIL est fortement associé à un bon pronostic chez les patientes atteintes d'un cancer du sein triple négatif, mais n'a pas montré une telle corrélation dans le cancer du sein luminal. Les macrophages du tissu adipeux mammaire se différencient en deux phénotypes distincts, souvent classés en M1 et M2 avec une augmentation de ce dernier dans le cancer du sein. M1 attaque et phagocyte les cellules cancéreuses, tandis que M2 a des propriétés anti-inflammatoires et il a été démontré qu'il a des fonctions de promotion des tumeurs.

Le présent projet permettra d'approfondir nos connaissances sur l'interaction entre la tumeur primitive du sein et l'infiltration des cellules immunitaires dans le tissu adipeux juxta-tumoral. Nos résultats seront corrélés aux sous-types moléculaires du cancer du sein, à la proximité de la tumeur, aux marqueurs de prolifération et, finalement, aux résultats cliniques. Les chercheurs estiment que ces connaissances fourniront de nouvelles cibles prédictives pour le traitement adjuvant immunomodulateur du cancer. Ce projet de doctorat comprend trois modules de travail (WP) interdépendants dont le but ultime est d'identifier des marqueurs de l'inflammation dans le tissu adipeux juxta-tumoral qui sont pertinents dans l'évaluation clinique du traitement adjuvant du cancer du sein. Dans les WP 1 et 2, le paysage phénotypique et génomique du tissu adipeux juxta-tumoral sera caractérisé, et dans le WP 3, les recherches étudieront si ces connaissances peuvent prédire les résultats cliniques.

Le projet repose sur une forte collaboration régionale entre le Haukeland University Hospital (HUH) et le Stavanger University Hospital (SUH). Pour le projet actuel, les chercheurs ont collecté de manière systématique des tissus adipeux et tumoraux de 30 patientes consécutives atteintes d'un cancer du sein et subissant une mastectomie au SUH. Les prélèvements chirurgicaux du sein sont transmis sans délai au pathologiste qui, sous contrôle morphologique, prélève les tissus pertinents du front invasif et du noyau (0,5x1x1 cm) de la tumeur primitive. Les contrôles du tissu mammaire normal (2000 mg) du quadrant controlatéral distant seront également collectés et vérifiés morphologiquement par le pathologiste. Le tissu est collecté par paires en double. L'un des échantillons est immédiatement congelé dans de l'azote liquide pour être conservé, tandis que l'autre moitié de chaque paire est conservée dans du formol et fixée dans de la paraffine (FFPE). En outre, trois paires d'échantillons de tissu adipeux (chacun de 1x1x1 cm) avec une distance croissante de la frontière de la tumeur constitueront un gradient de tissu adipeux à partir du front invasif de la zone tumorale. Les gradients collectés sont également immédiatement congelés instantanément dans de l'azote liquide et la moitié de chaque paire est stockée sous forme de FFPE. Les chercheurs ont réalisé une étude pilote confirmant un rendement suffisant en ARN à partir des échantillons de tissus congelés pour le séquençage de l'ARN.

Le tissu est collecté dans le cadre de la biobanque de recherche générale, Prospective Breast Cancer Biobank (PBCB) (REK # 2010/1957), un projet de biobanque en cours.

La cohorte rétrospective de Stavanger se compose de toutes les patientes atteintes d'un cancer du sein diagnostiquées avec un premier cancer du sein invasif au département de pathologie de l'hôpital universitaire de Stavanger entre 1993 et ​​2004. Le SUH étant le seul hôpital de la région, il s'agit d'une véritable biobanque basée sur la population. Les données clinicopathologiques telles que : le classement, le stade, le TNM, le traitement et les marqueurs de prolifération (Ki-67, PPH3/MAI) sont déjà incluses ; le dernier suivi clinique a eu lieu en 2016.

Les recherches ont quatre hypothèses principales liées à l'inflammation et à l'infiltration des cellules immunitaires dans le cancer du sein :

1. Le tissu adipeux juxta-tumoral proche de la bordure tumorale montre un niveau accru d'inflammation et d'infiltration de cellules immunitaires.
2. L'inflammation et l'infiltration des cellules immunitaires s'atténuent avec l'éloignement de la frontière tumorale.
3. Il existe des différences dans l'inflammation et l'infiltration des cellules immunitaires entre les différents sous-types de cancer du sein (Luminal A, Luminal B et Basal like).
4. Une inflammation accrue et une infiltration de cellules immunitaires sont corrélées à des résultats cliniques indésirables (c.-à-d. rechute de la maladie).

4.1 CONCEPTION, MÉTHODES ET ANALYSES DE L'ÉTUDE

Les recherches ont quatre hypothèses principales liées à l'inflammation et à l'infiltration des cellules immunitaires dans le cancer du sein :

1. Le tissu adipeux juxta-tumoral proche de la bordure tumorale montre un niveau accru d'inflammation et d'infiltration de cellules immunitaires.
2. L'inflammation et l'infiltration des cellules immunitaires s'atténuent avec l'éloignement de la frontière tumorale.
3. Il existe des différences dans l'inflammation et l'infiltration des cellules immunitaires entre les différents sous-types de cancer du sein (Luminal A, Luminal B et Basal like).
4. Une inflammation accrue et une infiltration de cellules immunitaires sont corrélées à des résultats cliniques indésirables (c.-à-d. rechute de la maladie).

WP 1 : CARTOGRAPHIE MORPHOLOGIQUE ET GÉNOMIQUE DE L'INFILTRATION DE CELLULES IMMUNITAIRES DANS LE TISSU ADIPEUX ENTOURANT LE CANCER DU SEIN

Contexte : L'inflammation est un facilitateur important du développement tumoral (16). Il a été démontré que le tissu adipeux près du cancer du sein a une infiltration accrue de cellules immunitaires, mais on ne sait pas encore comment cela se rapporte aux sous-types moléculaires et/ou à la proximité de la tumeur. Les recherches utiliseront l'IHC et le séquençage de l'ARN pour évaluer le niveau d'inflammation, l'infiltration des cellules immunitaires et les signatures d'expression des gènes immunitaires dans le tissu adipeux entourant le cancer du sein.

Conception : Étude exploratoire prospective Patients, matériel et calcul de puissance : Le tissu adipeux est prélevé à partir des spécimens de mastectomie prélevés de manière prospective. Des échantillons de tissus sont prélevés dans trois sous-groupes moléculaires différents (Luminal A, Luminal B et Basal comme le cancer du sein), 10 dans chaque groupe. Les biopsies au trocart sont prélevées dans un gradient avec une distance croissante du bord tumoral (fig. 1). Le Consortium norvégien de génomique (NGC) a confirmé que la taille des échantillons basée sur la sélection de sous-types spécifiques de cancer du sein est suffisante pour la puissance statistique.

Méthodes : Des lames de tissu fixé au formol provenant de la tumeur, du front invasif et du tissu adipeux (fig. 1) seront colorées à l'aide d'IHC et d'anticorps dirigés contre les cellules immunitaires (cellules immunitaires totales, CD45 ; lymphocytes T, CD3, CD8, FoxP3 ; cellules myéloïdes, CD68 , HLA-DR). Les lames seront évaluées par microscopie et les résultats seront corrélés aux sous-groupes moléculaires du cancer du sein, à la localisation par rapport à la tumeur et aux marqueurs de prolifération (i.e. Ki67, PPH3 et MAI). En parallèle, les recherches effectueront un séquençage d'ARN sur des tissus congelés prélevés à partir des mêmes échantillons de tissus que ceux décrits ci-dessus. Plusieurs approches d'analyse seront utilisées sur les données RNAseq. Hormis l'analyse des données exploratoires, des algorithmes d'analyse spécifiques incluant la déconvolution des cellules immunitaires (ABIS, CIBERSORTx) et plus spécifiquement l'examen des signatures immunitaires tumorales (analyse TIP), entre autres.

Résultat attendu : Les recherches s'attendent à trouver une inflammation accrue et une infiltration de cellules immunitaires dans le tissu adipeux juxta-tumoral et une expression altérée des signatures génétiques inflammatoires que les recherches pourront étudier plus en détail dans le WP 2.

WP 2 : ÉVALUATION DE LA RÉACTION INFLAMMATOIRE DANS LE TISSU ADIPEUX JUXTA-TUMORAL DANS LE CANCER DU SEIN PAR IMMUNOHISTOCHIMIE ET ​​IMAGERIE DE CYTOMÉTRIE DE MASSE.

Contexte : Les cellules cancéreuses du sein interagissent avec les tissus environnants et provoquent une inflammation et une infiltration de cellules immunitaires dans la tumeur et le tissu adipeux. La cytométrie de masse par imagerie a montré que l'infiltration des cellules immunitaires dans les tumeurs est corrélée au pronostic, mais pour l'instant, aucune étude n'a examiné si le tissu adipeux entourant la tumeur présente également des schémas structurels d'infiltration des cellules immunitaires. Par conséquent, les recherches examineront le tissu adipeux entourant les tumeurs cancéreuses du sein à l'aide de la cytométrie de masse par imagerie Hyperion™.

Conception : Étude exploratoire prospective Patients, matériel et calcul de puissance : Des échantillons de tissus sont prélevés à partir de 30 spécimens de mastectomie obtenus de manière prospective avec trois sous-groupes moléculaires différents (Luminal A, Luminal B et Basal comme le cancer du sein), 10 dans chaque groupe. Le tissu adipeux est prélevé dans un gradient éloigné de la tumeur et du quadrant controlatéral comme échantillon témoin (fig. 2). Une taille d'échantillon de 30 patients est jugée suffisante pour une étude exploratoire de ce type.

Méthodes : Un panel Hyperion™ IMC de jusqu'à 50 anticorps uniques sera développé sur la base d'un panel déjà existant et validé disponible à l'installation centrale de l'UoB que les chercheurs ont déjà utilisé avec succès dans d'autres projets. Le panel disponible sera encore étendu sur la base des résultats du WP 1 et d'abord validé sur des échantillons de tissus mammaires "non essentiels" avant d'être utilisé sur les échantillons d'étude décrits ci-dessus. En utilisant Hyperion™ IMC, les recherches visent à analyser les niveaux de réaction inflammatoire dans le tissu adipeux juxta-tumoral. Les données IMC seront analysées avec histoCAT+, MAV et FlowJo (généralement utilisé pour l'analyse des données de cytométrie en flux mais également très adapté à l'analyse d'imagerie à haut paramètre). De plus, les recherches pourront utiliser les données d'expression génique de facteurs connus et nouveaux, identifiés dans le WP 1, et visualiser si l'expression est généralisée ou compartimentée dans le tissu adipeux. Le tissu mammaire adipeux normal du quadrant controlatéral sera utilisé comme contrôle. Afin d'examiner plus en détail l'influence du BC sur l'inflammation du tissu adipeux juxta-tumoral des différents sous-types moléculaires, les recherches visent également à colorer les tissus de trois segments tissulaires s'étendant de la tumeur afin de déterminer si les niveaux dépendent de la distance à la tumeur ou le sous-type moléculaire (Fig. 1). L'inflammation du tissu adipeux juxta-tumoral sera également évaluée morphologiquement en utilisant l'IHC. Cela nous permettra de sélectionner les régions d'intérêt à étudier à l'aide de l'IMC.

Résultat attendu : Les recherches s'attendent à trouver une inflammation accrue et une infiltration de cellules immunitaires dans le tissu adipeux près de la tumeur et à identifier de nouveaux biomarqueurs dans le tissu adipeux permettant d'étudier la signification clinique dans le WP 3.

WP 3 : RÉACTION INFLAMMATOIRE DANS LE TISSU ADIPEUX JUXTA-TUMORAL DANS LE CANCER DU SEIN ET RÉSULTAT CLINIQUE.

Arrière plan:

L'immunohistochimie est une pierre angulaire du diagnostic du cancer du sein et sert de principale modalité d'identification des sous-groupes moléculaires du cancer du sein et des marqueurs de prolifération tels que Ki-67. Ceci est essentiel pour déterminer quel régime de traitement est le mieux adapté à un patient particulier. L'hétérogénéité du tissu tumoral (à la fois les cellules tumorales et les cellules immunitaires infiltrantes) a été associée à une différence dans les résultats cliniques, mais on ne sait pas encore s'il en va de même pour le tissu adipeux entourant la tumeur. Ainsi, les recherches examineront le tissu adipeux juxta-tumoral pour l'inflammation et l'infiltration des cellules immunitaires et corréleront cela avec les résultats cliniques chez les patientes atteintes d'un cancer du sein.

Conception : Étude observationnelle clinique

Patientes et méthodes : Un nombre de 3500 patientes atteintes d'un cancer du sein sont inscrites dans une biobanque avec un suivi médian de 15 ans. Une large sélection d'échantillons de tissus de ces patients sera évaluée en ce qui concerne les cellules immunitaires du tissu adipeux et les biomarqueurs découverts dans les WP 1 et 2 à l'aide de l'IHC. Les échantillons seront stratifiés en trois groupes selon les sous-groupes moléculaires (c.-à-d. Luminal A, Luminal B et Basal comme le cancer du sein). Les lames de tissus seront analysées et les résultats corrélés avec les résultats cliniques des journaux des patients (l'accès aux journaux est déjà approuvé par REK). À l'aide du rapport de risque proportionnel de Cox et du test du log-rank, les recherches évalueront l'effet de l'augmentation de l'inflammation dans le tissu adipeux sur la capacité de survie des patients.

Calcul de la puissance : les recherches ont estimé la puissance du test de la différence de survie sans récidive entre les patients positifs et négatifs pour l'inflammation tumorale juxta, telle qu'évaluée par l'IHC et l'IMC. La mesure de l'effet est le taux de risque (HR) tel que calculé par la méthode de régression de Cox. Par exemple : 1000 patients avec un taux de récidive de 15% auront créé au moins 150 critères d'évaluation. Si le taux d'inflammation est de 20 %, les recherches auront une puissance de 80 % pour détecter une différence de survie avec un rapport de risque (HR) de 1,80 ou plus.

Résultat attendu : Ce dernier lot de travaux est conçu pour donner la preuve de principe qu'il est possible d'intégrer l'examen histologique du tissu adipeux juxta-tumoral dans le cadre du diagnostic du cancer du sein. Dans une perspective à plus long terme, les recherches visent à identifier de nouveaux biomarqueurs spécifiques de l'infiltration immunitaire dans le tissu adipeux qui sont corrélés aux résultats indésirables chez les patientes atteintes d'un cancer du sein. De tels biomarqueurs peuvent servir d'outils prédictifs pour identifier les patients éligibles à un traitement adjuvant anti-inflammatoire ou immunomodulateur.

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D.Surveiller les effets secondaires, la qualité de vie, la dépression, la fatigue et la participation à la vie professionnelle Contexte

Le traitement du cancer du sein fait appel à la chirurgie, à la chimiothérapie, à la radiothérapie et à diverses options thérapeutiques ciblées telles que la thérapie anti-œstrogène et anti-HER-2. Ces options de traitement créent des effets secondaires gênants à court et à long terme. Il est important de noter que des relations plus complexes entre les modalités de traitement oncologique et les problèmes de santé subjectifs chez les patientes atteintes d'un cancer du sein ont été récemment découvertes. Les scores de fatigue, d'anxiété et de dépression sont probablement des lectures fonctionnelles du fardeau total du traitement. Le traitement anticancéreux a également un impact substantiel sur la qualité de vie et les aspects sociaux des survivants du cancer, ce qui s'étend à la participation à la vie professionnelle. L'arrêt de travail (AS) cinq ans après le diagnostic de cancer du sein est plus dépendant de facteurs sociaux que de la maladie (2). Par conséquent, le cancer du sein frappe les femmes deux fois ; d'abord le fardeau de la maladie puis les soucis socio-économiques. Les survivantes du cancer du sein ont un risque presque 3 fois plus élevé de recevoir une pension d'invalidité (DP) par rapport aux patientes sans cancer dans une étude rétrospective basée sur un registre (3). Cependant, cette étude était basée sur des schémas thérapeutiques oncologiques pour la plupart abandonnés.

Objectifs

Le but de cette étude est d'identifier les facteurs de risque pour devenir un récepteur SL, WAA ou DP à long terme par une analyse qualitative approfondie et une approche à méthodes mixtes en triangulant les données PROM, les données cliniques/biologiques et les données NAV. L'utilisation des données NAV comme paramètres fournira des informations précieuses aux cliniciens et aux médecins généralistes qui pourront optimiser le suivi également en ce qui concerne la participation au travail et à la vie personnelle. Par conséquent, les chercheurs ont une conception d'étude robuste pour identifier les facteurs fisk pour les taux élevés de SL, WAA et DP. En fin de compte, les chercheurs visent à réduire les dépenses financières que le cancer du sein génère pour la société.

Conception de l'étude / matériel et méthodes.

La conception de l'étude est une étude observationnelle où les chercheurs cartographieront dans la présente étude les taux et les facteurs de denty fisk pour les niveaux élevés de SL, WAA et DP chez les survivantes du cancer du sein avec les calendriers de traitement à jour. Les enquêteurs suivront une approche translationnelle en 4 étapes :

1. Les enquêteurs mèneront d'abord une étude qualitative exploratoire utilisant une analyse documentaire de la politique de santé et de vie au travail dans le contexte norvégien, combinée à des données empiriques provenant d'entretiens semi-structurés et d'un groupe de discussion avec 20 patients à haut risque) à analyser thématiquement. Le cadre théorique de ce projet qualitatif est dérivé de l'interactionnisme symbolique dans lequel découvrir et comprendre le sens dans des contextes spécifiques est un objectif. Étant donné que des interactions sociales et professionnelles significatives sont importantes pour la réadaptation psychosociale des personnes atteintes d'un cancer du sein, l'interactionnisme symbolique est un cadre méthodologique approprié. Cette approche qualitative créera les bases de l'approche dans les études basées sur la PROM et orientées sur la base de données NAV ci-dessous.

2. Données NAV

   Les enquêteurs collaborent actuellement avec la vice-directrice Anneline Christine Teigen et le consultant senior Günter Olsborg à NAV-Rogaland et la section Mikrodata de Statistics Norway (SSB). L'objectif de cette collaboration est d'acquérir plus de connaissances sur l'utilisation des services de sécurité sociale chez les patientes atteintes d'un cancer du sein avec les experts de NAV-Rogaland et, avec SSB, d'utiliser la base de données FD-trygd pour obtenir des données sociodémographiques prospectives fiables sur les SL (courtes et longues). terme), l'allocation d'évaluation du travail (WAA) (Arbeidsavklaringspenger) et les DP (tous deux à durée

   & à vie) pour chaque patient de la présente étude PerMoBreCan.

3. Les données de mesure des résultats rapportés par les patients (PROM) sont obtenues au départ et par la suite annuellement auprès de tous les patients PerMoBreCan. Les données PROM se composent d'instruments 1.HRQoL (EORTC QLQ-C30, EORTC QLQ-BR23 et FACT B), 2.Hospital Anxiety and Depression Scale, HAD, 3. Instruments de fatigue Fatique Impact Scale, FIS ; Fatugue Severity Scale (FSS) et VAS-fatigue, 4. Questionnaires sur les effets secondaires, 5. Questionnaire sur les douleurs articulaires, 6. L'échelle d'incertitude de Mishel sur la maladie, MUIS ; et 7. Questionnaire sur les habitudes alimentaires et questionnaire 8.ROMA III sur les plaintes intestinales (IBD et IBS).
4. Identification de biomarqueurs.

Tous les patients participant à cette étude seront dépistés sur des biomarqueurs circulants liés à la fatigue. Ces biomarqueurs se situent au niveau protéique, au niveau de l'expression génétique et également au niveau épigénétique. Notre coopération agréable de longue date avec le prof. Roald Omdal de l'hôpital universitaire de Stavanger, qui est immunologiste clinique et chercheur sur la fatigue transnationale, s'est engagé à effectuer ces analyses dans son laboratoire de recherche.