Prospektiv bröstcancerbiobank (PBCB)

A. Tidig upptäckt av systemiska skov vid bröstcancer.

WP 1. Analys av primärtumör.

Analys av primärtumör och metastaser (Patologigrupp). I detta arbetspaket kommer både DNA och RNA från primärtumörerna hos 125 högriskpatienter (Luminal-B) att analyseras med nästa generations sekvensering (NGS). Vidare kommer utredarna också att analysera DNA och RNA från tillgängliga metastaserande lesioner (för närvarande tillgängligt material för 3/8) som har dykt upp och kommer att dyka upp under studieperioden.

MiRNA och mRNA kommer att profileras med PureLink™ miRNA Isolation Kit (Invitrogen), Dynabeads mRNA direkt mikrokit (Ambion) och Ion total RNA-seq kit V2 (Life Technologies) på vårt Ion Proton NGS-instrument. Bioinformatiska analyser av parade mRNA- och mikroRNA-expressionsprofiler kommer att användas för att avslöja differentiellt uttryckta mikroRNA mellan patienter med och utan återfall under behandling. Dessa data kommer att kopplas till våra tidigare studier och användas för att identifiera målkandidater för mikroRNA-analys i exosomer och TEP.

Dessutom kommer NGS också att utföras på DNA från de primära tumörerna och metastaserna för att verifiera DNA-mutationer speciellt i ER och andra kända onkogener, inklusive de som undersökts i WP3. DNA-sekvenseringen kommer att utföras med Oncomine Comprehensive Assay. Detta är ett amplikonbaserat tillvägagångssätt som analyserar hotspot-SNVs, indels och CNVs. Dessa analyser kommer att ge oss en biologisk förståelse och bakgrundskunskap för var och en av de enskilda tumörerna, och dessa datauppsättningar kan också jämföras med de nyligen publicerade data.

WP 2. Cirkulerande tumörceller (CTC).

Cirkulerande tumörceller (onkologigruppen) Cirkulerande tumörceller berikas från perifera blodprover genom densitetscentrifugering och efterföljande immunomagnetisk utarmning av leukocyter. Onkologigruppen har nyligen utvecklat och publicerat en ny utarmningsmetod, kallad MINDEC (Multi-marker Immunomagnetic Negative Depletion Enrichment of CTCs), som har överlägsen återhämtning och anrikningshastighet. RNA och DNA isoleras samtidigt från den anrikade fraktionen för att möjliggöra CTC-detektion med både RNA och DNA-baserade metoder. Specifika mRNA-markörer, med höga nivåer i tumörceller och låga nivåer i normala leukocyter, pre-amplifieras och kvantifieras genom realtids-PCR som surrogatmarkörer för CTC. Både epitelspecifika markörer och markörer relaterade till epitelial mesenkymal övergång är en del av markörpanelen. Fram till nu har utredarna analyserat 170 på varandra följande blodprover från den större PBCB-kohorten, berikade med MINDEC-proceduren och hittat bevis för CTC i cirka 20 % av proverna (från både låg- och högriskpatienter), ett fynd som uppmuntrar oss att fortsätta detta projekt. Utredarna har också analyserat blodprover från 30 friska kvinnliga frivilliga för jämförelse. Alla insamlade blodprover från 125 högriskpatienter kommer att analyseras (cirka 575 prover). Förekomsten eller nivån av CTC i de analyserade proverna kommer senare att jämföras med kända prognostiska faktorer, behandlingseffekt och sjukdomsutfall.

WP 3. cirkulerande tumör-DNA (ctDNA).

Tumörspecifika mutationer kan användas som markörer för ctDNA eftersom de inte finns i normala celler och normalt plasma-DNA. Onkologigruppen har nyligen visat den kliniska relevansen av ctDNA-mätningar vid pankreascancer. Utredarna kommer nu att mäta ctDNA-nivåer i plasmaprover från bröstcancerpatienter med hög risk genom riktad nästa generations sekvensering. Den nyligen släppta "Oncomine breast cfDNA assay" (Thermo Fisher) kommer att användas för att upptäcka mutationer i en panel med tio gener som ofta muteras i bröstcancer. Analysen är baserad på molekylär streckkodning av mallar och möjliggör reproducerbar detektering av mutationer ner till 0,1 % kontrollprover. Om man tar hänsyn till den låga koncentrationen av cellfritt DNA (=cfDNA) i plasma (vanligtvis 10 ng per ml blod), anses en känslighet på 0,1 % vara tillräcklig. Sekvenseringen kommer att utföras på vårt Ion Proton NGS-instrument (Life Technologies). Det preoperativa blodprovet och årliga uppföljningsprover från de 125 högriskpatienterna kommer att analyseras i denna WP. Blodprover från 30 friska kvinnliga frivilliga har redan samlats in och kommer att analyseras för jämförelse.

Förekomst och nivå av tumörspecifika mutationer kommer att analyseras i relation till behandlingseffekt och sjukdomsutfall. Mutationsprofilen i primärtumörbiopsi och plasmaprover kommer att jämföras för att avslöja potentiell heterogenitet. Dessutom kommer longitudinella förändringar i mutationsprofilen för ctDNA att jämföras med sjukdomsutveckling för att potentiellt belysa de biologiska mekanismer som orsakar behandlingsresistens eller sena sjukdomsåterfall.

WP 4. mikroRNA (miRNA)

Cirkulerande mikroRNA från exosomer och TEPs (patologigruppen) Totalt RNA kommer att isoleras från exosomer och TEP från blodprover som tagits före och under behandlingen. Utredarna har nyligen etablerat metoder för isolering av totalt RNA från exosomer (med exoRNeasy serum Plasma kit (Qiagen) och miRCURY RNA isolation kit (Exiqon)) och TEPs. Genom att använda det nämnda protokollet har totalt RNA från exosomer redan isolerats från alla 125 högriskpatienter första besöket/före behandling, dessutom från de sista blodproverna som samlats in från dessa patienter, kommer totalt RNA att isoleras från både exosomer och TEP. Dessutom kommer mikroRNA-profilen att utföras på det isolerade RNA:t med hjälp av pipeline och plattform som redan etablerats för vårt Ion Proton-instrument. Dessa profiler kommer att jämföras med den bioinformatiska analysen av mRNA-miRNA-profiler från primärtumören (WP1) och proverna som tagits före behandling. MikroRNA som inte finns i vävnadsprovet och/eller i blodprovet före behandlingen, men som förekommer i blodet precis innan ett återfall uppträder kan sedan spåras i efterhand i tidigare blodprover för att se hur känsliga dessa mikroRNA är för att förutsäga behandling motstånd. MikroRNA-profilen från TEPs kommer att jämföras med mikroRNA-profilen från exosomer och med mRNA-miRNA-profilerna från den primära tumören (WP1, för att se om TEPs återspeglar tumören och om de har potential att förutsäga återfall.

WP 5. Metabolomics

Metabolomics är studiet av små molekyler som omfattar substrat, intermediärer och slutprodukter av cellulär metabolism, såsom aminosyror, sockerarter och små organiska syror. Det metaboliska tillståndet hos cancerceller är väsentligt förändrat jämfört med normala celler, ett faktum som kan användas för diagnostiska ändamål. Specifika metaboliska signaturer från tumörvävnad ger ytterligare information för bestämning av bröstcancersubtyper och förutsägelse av utfall1. Till exempel är ökade tumörlaktat- och glycinnivåer relaterade till dålig prognos hos patienter med östrogenreceptor (ER) positiv cancer. Metabolomiska analyser av primärtumörer har också visat prediktivt värde i relation till neoadjuvant behandling av patienter med lokalt avancerad sjukdom.

Cirkulerande metaboliter har också visat sig ge prognostisk information vid operation av bröstcancer och ytterligare stratifiera risker inom befintliga genetiskt bestämda riskkategorier. Viktigt är att metabolomiska förändringar kan uppstå direkt eller indirekt från mikrometastatisk sjukdom snarare än primär tumör. Nyligen har forskarna visat att systemiska laktat- och pyruvatnivåer förutsäger sämre resultat hos patienter med operationerbar ER-positiv bröstcancer. Tumörangränsande vävnad och immunologiska svar kan också bidra till en förändrad metabolomisk profil. Det finns också bevis för att metabolisk profilering kan användas för patientövervakning i vissa cancerformer, även om sådana bevis fortfarande saknas vid bröstcancer. Därför avser utredarna att undersöka om postoperativ övervakning med hjälp av metabolisk profilering i blod är användbar för tidig upptäckt av återfall i bröstcancer.

WP 6. Integrativ molekylär övervakning för recidivdetektion

Ny teknologi har revolutionerat nivån av biologisk information som kan erhållas från kliniska prover, representerade av de nya "omics"-termerna genomik, transkriptomik, metabolomik, etc. Tillgången till sådana stora datamängder, även i det offentliga området, har uppmuntrat utvecklingen av integrerande metoder som kan extrahera viktig information från flera kombinerade datakällor. Överraskande nya kopplingar mellan omics-dataset har avslöjats genom sådana tillvägagångssätt, exemplifierade av en koppling mellan cellfri DNA-fragmentering och genuttryck46. Följaktligen har vår kunskap om bröstcancer också utökats med integrerande tillvägagångssätt, vilket resulterat i en mer omfattande förståelse av sjukdomen. Den prognostiska underklassificeringen av bröstcancer har till exempel förfinats och nya tumörspecifika antigener identifierats. Integrerade molekylära data har till och med visat sig ha en högre prognostisk kraft än separata molekylära nivåer vid bröstcancer. En kombinerad analys av de genetiska (ctDNA), transkriptomiska (miRNA) och metabolomiska datanivåerna i perifera blodprover planeras därför i det aktuella projektet för att maximera deras gemensamma biomarkörpotential vid operationerbar bröstcancer.

Provstorleksberäkningar.

Utredarna utförde provstorleksberäkningar med SPSS Sample Power-programvara. Dessa beräkningar visade att 125 högriskpatienter borde vara tillräckligt för att ge en log rank teststyrka på 80 %, när man testade det prognostiska värdet av ctDNA/CTC-detektion före operation. Provstorleksberäkningarna baserades på det kvalificerade antagandet att den genomsnittliga 5-årsöverlevnaden i högriskgruppen är 90 %, medan den är 75 % och 95 % i ctDNA/CTC positiva respektive negativa undergrupper. Av de uppskattade 125 patienterna antogs 30 vara positiva för ctDNA/CTC och 95 negativa.

-------------------------------------------------- -------------------------------------------------- -----

B. Förbättra läkemedelsövervakningen av tamoxifen vid bröstcancer

Cirka 75 % av all bröstcancer tillhör de luminala subtyperna, som uttrycker hormonreceptorerna östrogenreceptorn och progesteronreceptorn. Dessa patienter behandlas med antiöstrogena läkemedel; tamoxifen och/eller aromatashämmare. De två mest aktiva tamoxifenmetaboliterna är Z-4OHtam och Z-4OHNDtam (Z-endoxifen) har 30-100 gånger högre affinitet för ER än tamoxifen. Dessa metaboliter utgör i slutändan den blockerande effekten på ER-nivå som syftar till att utrota mikrometastaserande sjukdom och är ansvariga för den förbättrade överlevnaden efter etableringen av denna adjuvanta systemiska behandling. Direkt mätning av dessa metaboliter förbigår alla störningar från mångfalden av CYP2D6-aktivitet, dvs alternativa metaboliska vägar, adherens till läkemedlet och hämmande läkemedelsinteraktioner. Vår nya LC / MS-MS-metodik tar hänsyn till alla ovan nämnda variabler och ger en funktionell utläsningsrapport av serumnivån av de aktiva tamoxifenmetaboliterna i den enskilda patienten. Denna metod kan också skilja mellan de inaktiva och aktiva isomererna av Endoxifen och 4-OHtam, som är de mest aktiva ER-blockerande metaboliterna av tamoxifen. I samarbete med Oslo Breast Cancer Research Group har utredarna nyligen visat i en retrospektiv observationsstudie att patienter med låga serumkoncentrationer av Z-4OHtam < 3,26 nM eller Z-Endoxifen < 9,00 nM (ca 12 % av alla patienter) har signifikanta sämre bröstcancerspecifik och total överlevnad än patienter med serumkoncentrationer över dessa tröskelvärden (justerad HR = 4,3; CI95 = 1,9-13,6) (röda kurvor i figur 4). Patienter med en mycket hög nivå av dessa metaboliter (ungefär 12 % av patienterna) hade inga bröstspecifika effektmått. Nu måste utredarna validera denna upptäckt i oberoende patientmaterial. Om det är validerat kommer detta att vara till direkt klinisk nytta för 25 % av akuta patienter + bröstcancerpatienter som planerar adjuvant tamoxifenbehandling. Sådan terapeutisk läkemedelsövervakning (TDM) skulle kunna identifiera riskpatienter med otillräckliga nivåer av aktiva tamoxifenmetaboliter. Detta kan leda till en dosökning eller byte till en alternativ endokrin behandlingsform hos dessa patienter. Patienter med mycket höga metabolitnivåer kan fortsätta på tamoxifen och behöver inte byta till en aromatashämmare.

Således kan TDM visa sig vara ett paradigmatiskt skifte i endokrin behandling av ER-positiv bröstcancer. Viktigt är att avståndet från "bänk till säng" i denna studie är mycket kort på grund av våra senaste fynd, en genomförbar metod och över 30 års erfarenhet av tamoxifen i klinisk miljö.

-------------------------------------------------- -------------------------------------------------- -----

C. Tumörmikromiljö vid bröstcancer - fettstromal immuninfiltration och interaktion med tumör i tillväxtzonen

Bakgrund: Bröstcancer är fortfarande den vanligaste cancertypen bland kvinnor i västvärlden, inklusive Norge. Årligen diagnostiseras cirka 3500 nya norska bröstcancerpatienter. Under de senaste 50 åren har förekomsten av bröstcancer i Norge mer än fördubblats. Intressant nog har övervikt och fetma ökat oroväckande under samma tidsperiod. Molekylär subtypning av bröstcancertumörer har förbättrat förståelsen av dess inneboende biologi. Detta har öppnat upp för en mer personlig behandlingsmetod och förbättrat resultatet för bröstcancerpatienter under de senaste 20 åren.

Utöver den molekylära subtypningen består diagnostiken av bröstcancer idag av stadieindelning (genom TNM-klassificeringssystemet) och mikroskopisk undersökning av en patolog. Det finns ökande bevis för det prognostiska värdet av att utvärdera tumörmikromiljö (t.ex. tumörinfiltrerande lymfocyter (TIL) som en del av diagnostik vid bröstcancer, men än så länge är detta inte implementerat i klinisk praxis. Höga antal TIL är starkt associerade med god prognos hos patienter med trippelnegativ bröstcancer, men har inte visat någon sådan korrelation vid luminal bröstcancer. Makrofager i bröstfettvävnad differentieras i två distinkta fenotyper, ofta klassificerade som M1 och M2 med en ökning av den senare vid bröstcancer. M1 attackerar och fagocyterar cancerceller, medan M2 har antiinflammatoriska egenskaper och har visat sig ha tumörfrämjande funktioner.

Det aktuella projektet kommer att öka vår kunskap om interaktionen mellan den primära brösttumören och immuncellsinfiltrationen i den juxta-tumorala fettvävnaden. Våra fynd kommer att vara korrelerade till molekylära bröstcancersubtyper, närhet till tumör, markörer för proliferation och i slutändan till kliniskt resultat. Forskarna motiverar att denna kunskap kommer att ge nya prediktiva mål för immunmodulerande adjuvant cancerterapi. Detta doktorandprojekt har tre inbördes relaterade arbetspaket (WP) med det slutliga målet att identifiera markörer för inflammation i juxta-tumoral fettvävnad som är relevanta vid klinisk bedömning av adjuvant behandling av bröstcancer. I WP 1 och 2 kommer det fenotypiska och genomiska landskapet av juxta-tumoral fettvävnad att karakteriseras, och i WP 3 kommer forskningen att undersöka om denna kunskap kan förutsäga kliniska resultat.

Projektet bygger på ett starkt regionalt samarbete mellan Haukeland University Hospital (HUH) och Stavanger University Hospital (SUH). För det aktuella projektet har forskarna på ett systematiskt sätt samlat in fett- och tumörvävnad från 30 på varandra följande bröstcancerpatienter som genomgår mastektomi vid SUH. Kirurgiska prover av bröstet skickas utan dröjsmål vidare till patologen som under morfologisk kontroll tar prov på relevant vävnad från den invasiva fronten och kärnan (0,5x1x1 cm) av den primära tumören. Kontroller från normal bröstvävnad (2000 mg) från den avlägsna kontralaterala kvadranten kommer också att samlas in och verifieras morfologiskt av patologen. Vävnaden samlas i dubbla par. Ett av proverna snabbfryss omedelbart i flytande kväve för konservering, medan den andra hälften av varje par konserveras i formalin och fixeras i paraffin (FFPE). Dessutom kommer tre par av prover av fettvävnad (vardera på 1x1x1 cm) med ökande avstånd från tumörgränsen att utgöra en gradient av fettvävnad från den invasiva fronten av tumörområdet. De uppsamlade gradienterna snabbfryses också omedelbart i flytande kväve och hälften av varje par lagras som FFPE. Forskarna har utfört en pilotstudie som bekräftar ett tillräckligt RNA-utbyte från de frusna vävnadsproverna för RNA-sekvensering.

Vävnaden samlas in som en del av den allmänna forskningsbiobanken, Prospective Breast Cancer Biobank (PBCB) (REK# 2010/1957), ett pågående biobanksprojekt.

Den retrospektiva Stavanger-kohorten består av alla bröstcancerpatienter som diagnostiserats med första debuterande invasiv bröstcancer vid avdelningen för patologi, Stavanger Universitetssjukhus, mellan 1993 - 2004. Eftersom SUH är det enda sjukhuset i regionen är detta en sann befolkningsbaserad biobank, redan inkluderad är klinisk patologiska data som: gradering, stadium, TNM, behandlings- och spridningsmarkörer (Ki-67, PPH3/MAI); senaste kliniska uppföljningen ägde rum 2016.

Forskningen har fyra huvudhypoteser relaterade till inflammation och immuncellsinfiltration vid bröstcancer:

1. Den juxta-tumorala fettvävnaden nära tumörgränsen visar en ökad nivå av inflammation och immuncellsinfiltration.
2. Inflammationen och immuncellsinfiltrationen dämpas med ökat avstånd från tumörgränsen.
3. Det finns skillnader i inflammation och immuncellsinfiltration mellan olika subtyper av bröstcancer (Luminal A, Luminal B och Basalliknande).
4. Ökad inflammation och immuncellsinfiltration är korrelerade till negativa kliniska resultat (dvs. återfall av sjukdom).

4.1 STUDIEDESIGN, METODER OCH ANALYSER

Forskningen har fyra huvudhypoteser relaterade till inflammation och immuncellsinfiltration vid bröstcancer:

1. Den juxta-tumorala fettvävnaden nära tumörgränsen visar en ökad nivå av inflammation och immuncellsinfiltration.
2. Inflammationen och immuncellsinfiltrationen dämpas med ökat avstånd från tumörgränsen.
3. Det finns skillnader i inflammation och immuncellsinfiltration mellan olika subtyper av bröstcancer (Luminal A, Luminal B och Basalliknande).
4. Ökad inflammation och immuncellsinfiltration är korrelerade till negativa kliniska resultat (dvs. återfall av sjukdom).

WP 1: MORFOLOGISK OCH GENOMISK KARTERING AV IMMUNCELLINFILTRATION I FETTVÄVNAD OMGIVANDE BRÖSTCANCER

Bakgrund: Inflammation är en viktig facilitator för tumörutveckling (16). Fettvävnad nära bröstcancer har visat sig ha ökad immuncellsinfiltration, men det är ännu inte känt hur detta relaterar till molekylära subtyper och/eller närhet till tumör. Forskarna kommer att använda IHC- och RNA-sekvensering för att utvärdera nivån av inflammation, infiltration av immunceller och immungenexpressionssignaturer i fettvävnaden som omger bröstcancer.

Design: Prospektiv explorativ studie Patienter, material och kraftberäkning: Fettvävnad samlas in från de prospektivt insamlade mastektomiproverna. Vävnadsprover samlas in från tre olika molekylära undergrupper (Luminal A, Luminal B och Basal liknande bröstcancer), 10 i varje grupp. Kärnbiopsier samlas in i en gradient med ökande avstånd från tumörgränsen (fig. 1). Norwegian Genomics Consortium (NGC) har bekräftat att provstorlekarna som är baserade på urvalet i specifika bröstcancersubtyper är tillräckliga för statistisk styrka.

Metoder: Objektglas av formalinfixerad vävnad från tumör, invasiv front- och fettvävnad (fig. 1) kommer att färgas med IHC och antikroppar mot immunceller (totala immunceller, CD45; T-celler, CD3, CD8, FoxP3; myeloida celler, CD68 HLA-DR). Objektglasen kommer att utvärderas med mikroskopi och resultaten kommer att korreleras till molekylära undergrupper av bröstcancer, lokalisering i förhållande till tumör- och proliferationsmarkörer (dvs. Ki67, PPH3 och MAI). Parallellt kommer forskningen att utföra RNA-sekvensering på frusen vävnad som samlats in från samma vävnadsprover som beskrivits ovan. Flera analysmetoder kommer att användas på RNAseq-data. Förutom att analysera datautforskande, specifika analysalgoritmer inklusive dekonvoluterande immunceller (ABIS, CIBERSORTx) och mer specifikt titta på tumörimmunsignaturer (TIP-analys), bland annat.

Förväntat resultat: Forskarna förväntar sig att hitta ökad inflammation och immuncellsinfiltration i den juxta-tumorala fettvävnaden och förändrat uttryck av inflammatoriska gensignaturer som forskarna kan undersöka ytterligare i WP 2.

WP 2: BEDÖMNING AV INFLAMMATORISK REAKTION I JUXTA-TUMORAL FETTVÄVNAD I BRÖSTCANCER MED ANVÄNDNING AV IMMUNOHISTOCHEMI OCH MASSCYTOMETRI.

Bakgrund: Bröstcancerceller interagerar med den omgivande vävnaden och orsakar inflammation och immuncellsinfiltration i tumören och fettvävnaden. Imaging masscytometri har visat att immuncellsinfiltration i tumörer korrelerar med prognos, men ännu finns det inga studier som undersöker om fettvävnaden som omger tumören också visar strukturella mönster av immuncellsinfiltration. Därför kommer forskningen att undersöka fettvävnaden som omger bröstcancertumörer med hjälp av Hyperion™ Imaging Mass Cytometri.

Design: Prospektiv explorativ studie Patienter, material och kraftberäkning: Vävnadsprover samlas in från 30 prospektivt erhållna mastektomiprover med tre olika molekylära undergrupper (Luminal A, Luminal B och Basal som bröstcancer), 10 i varje grupp. Fettvävnad samlas in i en gradient bort från tumören och från den kontralaterala kvadranten som ett kontrollprov (fig. 2). En urvalsstorlek på 30 patienter bedöms vara tillräcklig för en explorativ studie av detta slag.

Metoder: En Hyperion™ IMC-panel med upp till 50 unika antikroppar kommer att utvecklas baserat på en redan befintlig och validerad panel tillgänglig vid UoB:s kärnanläggning som forskarna tidigare framgångsrikt har använt i andra projekt. Den tillgängliga panelen kommer att utökas ytterligare baserat på resultat från WP 1 och först valideras på "icke-essentiella" bröstvävnadsprover innan de används på de ovan beskrivna studieproverna. Med hjälp av Hyperion™ IMC avser forskarna att analysera nivåerna av inflammatorisk reaktion i den juxta-tumorala fettvävnaden. IMC-data kommer att analyseras med histoCAT+, MAV och FlowJo (används vanligtvis för flödescytometridataanalys men också mycket lämpligt för högparameteravbildningsanalys). Vidare kommer forskarna att kunna använda genuttrycksdata för kända och nya faktorer, identifierade i WP 1, och visualisera om uttrycket är generaliserat eller uppdelat i fettvävnaden. Normal fettvävnad från den kontralaterala kvadranten kommer att användas som kontroll. För att närmare undersöka BC:s inverkan på inflammationen av juxta-tumoral fettvävnad hos de olika molekylära subtyperna, avser forskarna också att färga vävnad från tre vävnadssegment som sträcker sig från tumören för att avgöra om nivåerna beror på avståndet från tumören eller den molekylära subtypen (Fig. 1). Inflammationen i den juxta-tumorala fettvävnaden kommer också att bedömas morfologiskt med hjälp av IHC. Detta gör att vi kan välja regioner av intresse att undersöka med hjälp av IMC.

Förväntat resultat: Forskarna förväntar sig att hitta ökad inflammation och immuncellsinfiltration i fettvävnaden nära tumören och att identifiera nya biomarkörer i fettvävnaden som möjliggör undersökning av den kliniska betydelsen i WP 3.

WP 3: INFLAMMATORISK REAKTION I JUXTA-TUMOURAL FETTVÄVNAD I BRÖSTCANCER OCH KLINISKT UTFALL.

Bakgrund:

Immunhistokemi är en hörnsten i bröstcancerdiagnostik och fungerar som huvudmodaliteten för att identifiera molekylära undergrupper av bröstcancer och spridningsmarkörer som Ki-67. Detta är viktigt för att avgöra vilken behandlingsregim som är bäst lämpad för den specifika patienten. Heterogenitet i tumörvävnaden (både tumörceller och infiltrerande immunceller) har kopplats till skillnader i kliniskt utfall, men det är ännu inte känt om detsamma gäller för fettvävnaden som omger tumören. Således kommer forskarna att undersöka juxta-tumoral fettvävnad för inflammation och immuncellsinfiltration och korrelera detta med kliniskt utfall hos bröstcancerpatienter.

Design: Klinisk observationsstudie

Patienter och metoder: Ett antal av 3500 bröstcancerpatienter samlas i en biobank med en medianuppföljningstid på 15 år. Ett stort urval av vävnadsprover från dessa patienter kommer att bedömas med avseende på immunceller i fettvävnaden och biomarkörer som upptäckts i WP 1 och 2 med hjälp av IHC. Proverna kommer att stratifieras i tre grupper enligt molekylära undergrupper (dvs. Luminal A, Luminal B och Basal som bröstcancer). Vävnadsglasen kommer att analyseras och resultaten korreleras med kliniskt utfall från patientjournalerna (tillgång till journaler är redan godkänd av REK). Med hjälp av Cox proportional hazard ratio och log-rank test, kommer forskarna att utvärdera effekten ökad inflammation i fettvävnad har på patientens överlevnadsförmåga.

Kraftberäkning: Forskarna uppskattade testkraften för skillnaden i återfallsfri överlevnad mellan patienter positiva och negativa för juxtatumörinflammation enligt bedömning av IHC och IMC. Effektmåttet är riskhastigheten (HR) beräknad med Cox-regressionsmetoden. Till exempel: 1000 patienter med en återfallsfrekvens på 15 % kommer att ha skapat minst 150 endpoints. Om inflammationsfrekvensen är 20 % kommer forskarna att ha 80 % förmåga att upptäcka en överlevnadsskillnad med en riskkvot (HR) på 1,80 eller högre.

Förväntat resultat: Detta sista arbetspaket är utformat för att ge principbevis på att det är möjligt att inkludera histologisk undersökning av juxta-tumör fettvävnad som en del av bröstcancerdiagnostik. I ett längre perspektiv syftar forskningen till att identifiera nya specifika biomarkörer för immuninfiltration i fettvävnad som korrelerar med ogynnsamt resultat hos bröstcancerpatienter. Sådana biomarkörer kan fungera som prediktiva verktyg för att identifiera patienter som är kvalificerade för adjuvant antiinflammatorisk eller immunmodulerande behandling.

-------------------------------------------------- ----------------------------------------------------

D. Övervaka biverkningar, QoL, depression, trötthet och arbetslivsdeltagande Bakgrund

Behandling av bröstcancer omfattar all kirurgi, kemoterapi, strålbehandling och olika riktade terapialternativ som antiöstrogen och anti HER-2-terapi. Dessa behandlingsalternativ skapar besvärande biverkningar både i ett kortsiktigt och långsiktigt perspektiv. Viktigt är att mer komplexa samband mellan onkologiska terapimodaliteter och subjektiva hälsoproblem hos bröstcancerpatienter nyligen upptäckts. Trötthet, ångest och depressionspoäng är troligen funktionella avläsningar av den totala behandlingsbördan. Behandlingen mot cancer har också en betydande inverkan på livskvalitet och sociala aspekter för canceröverlevande, vilket sträcker sig till deltagande i arbetslivet. Sjukskrivning (SL) fem år efter bröstcancerdiagnosen är mer beroende av sociala faktorer än av sjukdom (2). Därför drabbar bröstcancer kvinnorna två gånger; först sjukdomsbördan sedan de sosioekonomiska oron. Bröstcanceröverlevande har nästan 3 gånger högre risk att få sjukpension (DP) jämfört med cancerfria patienter i en retrospektiv registerbaserad studie (3). Denna studie baserades dock på mestadels övergivna onkologiska behandlingsregimer.

Mål

Syftet med denna studie är att identifiera riskfaktorer för att bli en långsiktig SL-, WAA- eller DP-mottagare genom en djupgående kvalitativ analys och blandad metod genom att triangulera PROM-data, kliniska/biologiska data och NAV-data. Användning av NAV-data som endpoints kommer att ge värdefull information till läkare och allmänläkare som kan optimera uppföljningen även när det gäller deltagande i arbetslivet. Därför har utredarna en robust studiedesign för att identifiera fiskfaktorer för höga SL-, WAA- och DP-hastigheter. I slutändan syftar utredarna till att sänka de ekonomiska utgifterna som bröstcancer genererar för samhället.

Studiedesign / material & metoder.

Studiedesignen är en observationsstudie där utredarna i den aktuella studien kommer att kartlägga frekvensen och denty fiskfaktorer för hög SL, WAA och DP bland bröstcanceröverlevande med uppdaterade behandlingsscheman. Utredarna kommer att följa en 4-stegs translationell metod:

1. Utredarna kommer först att genomföra en explorativ kvalitativ studie med dokumentanalys av hälso- och arbetslivspolitik i norsk kontext, kombinerat med empirisk data från semistrukturerade intervjuer och fokusgrupp med 20 högriskpatienter) för att analyseras tematiskt. Den teoretiska ramen för detta kvalitativa projekt är härledd från symbolisk interaktionism där att avslöja och förstå mening i specifika sammanhang är ett mål. Eftersom meningsfulla sociala och professionella interaktioner är viktiga för psykosocial rehabilitering av bröstcancerindivider är symbolisk interaktionism en lämplig metodologisk ram. Detta kvalitativa tillvägagångssätt kommer att skapa grunderna för tillvägagångssättet i de PROM-baserade och NAV-databasinriktade studierna nedan.

2. NAV- data

   Utredarna samarbetar för närvarande med vice direktör Anneline Christine Teigen och seniorkonsulten Günter Olsborg i NAV-Rogaland och sektionen Mikrodata vid Statistisk sentralbyrå (SSB). Syftet med detta samarbete är att få mer kunskap om användningen av socialförsäkringstjänster bland bröstcancerpatienter tillsammans med NAV-Rogalands experter och tillsammans med SSB använda databasen FD-trygd för att få tillförlitliga prospektiva sociodemografiska data om SL (både korta och långa). termin), Work Assessment Allowance (WAA) (Arbeidsavklaringspenger) och UP (båda tidsbegränsade

   & livslångt) för varje patient i den aktuella PerMoBreCan-studien.

3. Patientrapporterade resultatmått (PROM)-data erhålls vid baslinjen och därefter årligen från alla PerMoBreCan-patienter. PROM-datan består av 1.HRQoL-instrument (EORTC QLQ-C30,EORTC QLQ-BR23 och FAKTA B), 2.Sjukhusångest- och depressionsskalan, HAD, 3. Trötthetsinstrument Fatique Impact Scale, FIS; Fatugue Severity Scale (FSS) och VAS-fatigue, 4. Biverkningsenkäter, 5. Ledsmärta frågeformulär, 6. The Mishel Uncertainty in Illness Scale, MUIS; och 7. Frågeformulär för matvanor och 8.ROMA III-frågeformuläret om tarmbesvär (IBD och IBS).
4. Identifiering av biomarkörer.

Alla patienter som deltar i denna studie kommer att screenas på cirkulerande biomarkörer relaterat till trötthet. Dessa biomarkörer finns på proteinnivå, genetisk uttrycksnivå och även på epigenetisk nivå. Vårt sedan länge trevliga samarbete med prof. Roald Omdal vid Stavanger Universitetssjukhus, som är klinisk immuolog och transaltional trötthetsforskare, har åtagit sig att genomföra dessa analyser i sitt forskningslabb.