Перспективный биобанк рака молочной железы (PBCB)

А. Раннее выявление системных рецидивов рака молочной железы.

РП 1. Анализ первичной опухоли.

Анализ первичной опухоли и метастазов (группа патологии). В этом рабочем пакете ДНК и РНК из первичных опухолей 125 пациентов с высоким риском (Luminal-B) будут проанализированы с помощью секвенирования следующего поколения (NGS). Кроме того, исследователи также проанализируют ДНК и РНК из имеющихся метастатических поражений (в настоящее время доступен материал для 3/8), которые появились и появятся в течение периода исследования.

МикроРНК и мРНК будут профилированы с использованием набора для выделения микроРНК PureLink™ (Invitrogen), прямого микронабора Dynabeads mRNA (Ambion) и набора Ion total RNA-seq Kit V2 (Life Technologies) на нашем приборе Ion Proton NGS. Биоинформатический анализ парных профилей экспрессии мРНК и микроРНК будет использоваться для выявления дифференциально экспрессируемых микроРНК между пациентами с рецидивами и без рецидивов, находящихся на лечении. Эти данные будут связаны с нашими предыдущими исследованиями и использованы для выявления кандидатов-мишеней для анализа микроРНК в экзосомах и ТЕР.

Кроме того, NGS также будет выполняться на ДНК из первичных опухолей и метастазов для проверки мутаций ДНК, особенно в ER и других известных онкогенах, в том числе исследованных в WP3. Секвенирование ДНК будет проводиться с использованием комплексного анализа Oncomine. Это основанный на ампликоне подход к анализу горячих точек SNV, indels и CNV. Эти анализы предоставят нам биологическое понимание и базовые знания для каждой отдельной опухоли, и эти наборы данных также можно будет сравнить с недавно опубликованными данными.

WP 2. Циркулирующие опухолевые клетки (ЦОК).

Циркулирующие опухолевые клетки (группа онкологии) Циркулирующие опухолевые клетки обогащают из образцов периферической крови путем центрифугирования плотности и последующего иммуномагнитного истощения лейкоцитов. Группа онкологии недавно разработала и опубликовала новый метод истощения, названный MINDEC (мультимаркерное иммуномагнитное отрицательное истощение, обогащение ЦОК), который имеет превосходные показатели восстановления и обогащения. Из обогащенной фракции одновременно выделяют РНК и ДНК, что позволяет обнаруживать ЦОК с помощью подходов, основанных как на РНК, так и на ДНК. Специфические маркеры мРНК с высоким уровнем в опухолевых клетках и низким уровнем в нормальных лейкоцитах предварительно амплифицируют и количественно определяют с помощью ПЦР в реальном времени в качестве суррогатных маркеров ЦОК. Как эпителиально-специфические маркеры, так и маркеры, связанные с эпителиально-мезенхимальным переходом, являются частью панели маркеров. К настоящему времени исследователи проанализировали 170 последовательных образцов крови из более крупной когорты ПБЦБ, обогащенных с помощью процедуры MINDEC, и обнаружили доказательства наличия ЦОК примерно в 20% образцов (от пациентов как с низким, так и с высоким риском), что обнадеживает нас. для продолжения этого проекта. Исследователи также проанализировали образцы крови 30 здоровых женщин-добровольцев для сравнения. Будут проанализированы все собранные образцы крови от 125 пациентов с высоким риском (около 575 образцов). Наличие или уровень ЦОК в проанализированных образцах позже будет сравниваться с известными прогностическими факторами, эффектом лечения и исходом заболевания.

WP 3. Циркулирующая опухолевая ДНК (цДНК).

Опухолеспецифические мутации можно использовать в качестве маркеров цДНК, поскольку они отсутствуют в нормальных клетках и ДНК нормальной плазмы. Группа онкологии недавно продемонстрировала клиническую значимость измерений ctDNA при раке поджелудочной железы. Исследователи теперь будут измерять уровни ctDNA в образцах плазмы от пациентов с высоким риском рака молочной железы с помощью целевого секвенирования следующего поколения. Недавно выпущенный «анализ вкДНК молочной железы Oncomine» (Thermo Fisher) будет использоваться для обнаружения мутаций в группе из десяти генов, которые часто мутируют при раке молочной железы. Анализ основан на молекулярном штрих-кодировании матриц и позволяет воспроизводимо обнаруживать мутации вплоть до 0,1% контрольных образцов. Принимая во внимание низкую концентрацию внеклеточной ДНК (=вкДНК) в плазме (обычно 10 нг на мл крови), чувствительность 0,1% считается достаточной. Секвенирование будет проводиться на нашем приборе Ion Proton NGS (Life Technologies). В этом WP будут проанализированы предоперационный образец крови и ежегодные последующие образцы от 125 пациентов с высоким риском. Образцы крови от 30 здоровых женщин-добровольцев уже собраны и будут проанализированы для сравнения.

Наличие и уровень опухолеспецифических мутаций будут проанализированы в зависимости от эффекта лечения и исхода заболевания. Мутационный профиль в биопсии первичной опухоли и образцах плазмы будет сравниваться, чтобы выявить потенциальную гетерогенность. Кроме того, продольные изменения в профиле мутаций цДНК будут сравниваться с развитием заболевания, чтобы потенциально пролить свет на биологические механизмы, вызывающие резистентность к лечению или поздние рецидивы заболевания.

WP 4. микроРНК (миРНК)

Циркулирующая микроРНК из экзосом и ТЭП (группа патологии) Общая РНК будет выделена из экзосом и ТЭП из образцов крови, взятых до и во время лечения. Исследователи недавно разработали методы выделения тотальной РНК из экзосом (используя набор для выделения плазмы сыворотки exoRNeasy (Qiagen) и набор для выделения РНК miRCURY (Exiqon)) и ТЭП. Используя упомянутый протокол, общая РНК из экзосом уже была выделена из всех 125 пациентов с высоким риском при первом посещении / до лечения, дополнительно из последних образцов крови, собранных у этих пациентов, общая РНК будет выделена как из экзосом, так и из TEP. Кроме того, профиль микроРНК будет выполняться на изолированной РНК с использованием конвейера и платформы, уже установленных для нашего инструмента Ion Proton. Эти профили будут сравниваться с биоинформационным анализом профилей мРНК-миРНК из первичной опухоли (WP1) и образцов, взятых до лечения. МикроРНК, которые не присутствуют в образце ткани и/или в образце крови до лечения, но появляются в крови непосредственно перед появлением рецидива, можно затем ретроспективно проследить в предыдущих образцах крови, чтобы увидеть, насколько чувствительны эти микроРНК в прогнозировании лечения. сопротивление. Профиль микроРНК из TEP будет сравниваться с профилем микроРНК из экзосом и профилями мРНК-миРНК из первичной опухоли (WP1, чтобы увидеть, отражают ли TEP опухоль и могут ли они предсказать рецидив.

WP 5. Метаболомика

Метаболомика — это изучение малых молекул, включающих субстраты, промежуточные и конечные продукты клеточного метаболизма, такие как аминокислоты, сахара и малые органические кислоты. Метаболическое состояние раковых клеток существенно изменено по сравнению с нормальными клетками, что может быть использовано в диагностических целях. Специфические метаболические признаки опухолевой ткани предоставляют дополнительную информацию для определения подтипов рака молочной железы и прогнозирования исхода1. Например, повышенный уровень лактата и глицина в опухоли связан с плохим прогнозом у пациентов с раком, положительным по рецептору эстрогена (ER). Метаболический анализ первичных опухолей также продемонстрировал прогностическую ценность в отношении неоадъювантного лечения пациентов с местнораспространенным заболеванием.

Также было показано, что циркулирующие метаболиты предоставляют прогностическую информацию при операбельном раке молочной железы и дополнительно стратифицируют риск в рамках существующих генетически обусловленных категорий риска. Важно отметить, что метаболические изменения могут прямо или косвенно возникать в результате микрометастатического заболевания, а не первичной опухоли. Недавно исследователи показали, что системные уровни лактата и пирувата предсказывают худшие результаты у пациентов с операбельным ER-положительным раком молочной железы. Прилежащие к опухоли ткани и иммунологические реакции также могут способствовать изменению метаболического профиля. Имеются также данные о том, что метаболическое профилирование можно использовать для наблюдения за пациентами при некоторых видах рака, хотя таких данных по раку молочной железы по-прежнему нет. Поэтому исследователи намерены выяснить, полезен ли послеоперационный мониторинг с помощью метаболического профиля в крови для раннего выявления рецидива рака молочной железы.

Рабочий документ WP 6. Интегративный молекулярный мониторинг для выявления рецидивов

Новые технологии произвели революцию в уровне биологической информации, которую можно получить из клинических образцов, представленных новыми «омическими» терминами: геномикой, транскриптомикой, метаболомикой и т. д. Доступность таких больших наборов данных, даже в открытом доступе, способствовала развитию комплексных методов, позволяющих извлекать важную информацию из нескольких комбинированных источников данных. С помощью таких подходов были обнаружены удивительные новые связи между omics-наборами данных, примером которых является связь между бесклеточной фрагментацией ДНК и экспрессией генов 46 . Соответственно, наши знания о раке молочной железы также расширились за счет интегративных подходов, что привело к более полному пониманию болезни. Например, была уточнена прогностическая подклассификация рака молочной железы и идентифицированы новые опухолеспецифические антигены. Было даже показано, что интегрированные молекулярные данные имеют более высокую прогностическую силу, чем отдельные молекулярные уровни при раке молочной железы. Таким образом, в текущем проекте планируется комбинированный анализ уровней генетических (цтДНК), транскриптомных (миРНК) и метаболических данных в образцах периферической крови, чтобы максимизировать их совместный биомаркерный потенциал при операбельном раке молочной железы.

Расчет размера выборки.

Исследователи выполнили расчет размера выборки с помощью программного обеспечения SPSS Sample Power. Эти расчеты продемонстрировали, что 125 пациентов с высоким риском должны быть достаточными для получения мощности логарифмического рангового теста 80% при проверке прогностической ценности обнаружения цДНК/ЦОК до операции. Расчеты размера выборки были основаны на условном предположении, что средняя 5-летняя выживаемость в группе высокого риска составляет 90%, тогда как она составляет 75% и 95% в положительных и отрицательных подгруппах ctDNA/CTC соответственно. Из примерно 125 пациентов 30 были признаны положительными по ctDNA/CTC и 95 отрицательными.

-------------------------------------------------- -------------------------------------------------- -----

B. Улучшить лекарственный мониторинг тамоксифена при раке молочной железы.

Около 75% всех случаев рака молочной железы относятся к люминальным подтипам, которые экспрессируют гормональные рецепторы рецептора эстрогена и рецептора прогестерона. Этих пациентов лечат антиэстрогенными препаратами; тамоксифен и/или ингибиторы ароматазы. Двумя наиболее активными метаболитами тамоксифена являются Z-4OHtam и Z-4OHNDtam (Z-эндоксифен), которые обладают в 30-100 раз более высоким сродством к ER, чем тамоксифен. Эти метаболиты в конечном итоге обеспечивают блокирующий эффект на уровне ER, направленный на искоренение микрометастатического заболевания, и отвечают за улучшение выживаемости после установления этого адъювантного системного лечения. Прямое измерение этих метаболитов позволяет обойти все нарушения из-за разнообразия активности CYP2D6, т.е. альтернативные метаболические пути, приверженность к лекарству и ингибирование взаимодействия с лекарствами. Наша новая методология ЖХ/МС-МС учитывает все вышеупомянутые переменные и предоставляет функциональный отчет о считывании уровня активных метаболитов тамоксифена в сыворотке у отдельного пациента. Этот метод также может различать неактивные и активные изомеры эндоксифена и 4-OHtam, которые являются наиболее активными метаболитами тамоксифена, блокирующими ER. В сотрудничестве с Исследовательской группой рака молочной железы Осло исследователи недавно показали в ретроспективном обсервационном исследовании, что пациенты с низкими концентрациями Z-4OHtam в сыворотке < 3,26 нМ или Z-эндоксифена < 9,00 нМ (около 12% всех пациентов) имеют значительные худшая специфическая и общая выживаемость при раке молочной железы, чем у пациентов с концентрациями в сыворотке выше этих пороговых значений (скорректированный HR = 4,3; CI95 = 1,9-13,6) (красные кривые на рис. 4). Пациенты с очень высоким уровнем этих метаболитов (примерно 12% пациентов) не имели конечных точек, характерных для молочной железы. Теперь исследователям необходимо подтвердить это открытие в независимых материалах пациентов. Если это будет подтверждено, это будет иметь прямую клиническую пользу для 25% пациентов с ER + раком молочной железы, планирующих адъювантное лечение тамоксифеном. Такой терапевтический лекарственный мониторинг (TDM) мог бы выявить пациентов с риском и неадекватными уровнями активных метаболитов тамоксифена. Это может привести к увеличению дозы или переходу на альтернативную форму эндокринного лечения у этих пациентов. Пациенты с очень высоким уровнем метаболитов могут продолжать принимать тамоксифен, и им не нужно переходить на ингибитор ароматазы.

Таким образом, TDM может оказаться парадигматическим сдвигом в эндокринной терапии ER-положительного рака молочной железы. Важно отметить, что расстояние от «скамейки до кровати» в этом исследовании очень короткое благодаря нашим недавним открытиям, выполнимому методу и более чем 30-летнему опыту применения тамоксифена в клинических условиях.

-------------------------------------------------- -------------------------------------------------- -----

C. Микроокружение опухоли при раке молочной железы - жировая стромальная иммунная инфильтрация и взаимодействие с опухолью в зоне роста

Справочная информация: Рак молочной железы по-прежнему является наиболее распространенным типом рака среди женщин в западном мире, включая Норвегию. Ежегодно в Норвегии диагностируется около 3500 новых пациентов с раком молочной железы. За последние 50 лет заболеваемость раком молочной железы в Норвегии увеличилась более чем вдвое. Интересно, что в то же время избыточный вес и ожирение тревожно увеличились. Молекулярное подтипирование опухолей рака молочной железы улучшило понимание его внутренней биологии. Это открыло путь к более персонализированному подходу к лечению и улучшило результаты лечения больных раком молочной железы за последние 20 лет.

В дополнение к молекулярному субтипированию диагностика рака молочной железы сегодня состоит из стадирования (по системе TNM-классификации) и микроскопического исследования патологоанатомом. Появляется все больше доказательств прогностической ценности оценки микроокружения опухоли (например, опухолевые инфильтрирующие лимфоциты (ОИЛ)) в составе диагностики при раке молочной железы, но в клинической практике это пока не реализовано. Большое количество TIL тесно связано с хорошим прогнозом у пациентов с тройным негативным раком молочной железы, но не показало такой корреляции при люминальном раке молочной железы. Макрофаги в жировой ткани молочной железы дифференцируются на два различных фенотипа, часто классифицируемых как М1 и М2, с увеличением количества последних при раке молочной железы. M1 атакует и фагоцитирует раковые клетки, в то время как M2 обладает противовоспалительными свойствами и, как было показано, обладает функциями, способствующими развитию опухоли.

Настоящий проект расширит наши знания о взаимодействии между первичной опухолью молочной железы и инфильтрацией иммунных клеток в околоопухолевой жировой ткани. Наши результаты будут соотнесены с молекулярными подтипами рака молочной железы, близостью к опухоли, маркерами пролиферации и, в конечном итоге, с клиническим исходом. Исследователи считают, что эти знания обеспечат новые прогностические цели для иммуномодулирующей адъювантной терапии рака. Этот проект PhD состоит из трех взаимосвязанных рабочих пакетов (WP), конечной целью которых является выявление маркеров воспаления в околоопухолевой жировой ткани, которые имеют значение для клинической оценки адъювантной терапии рака молочной железы. В РП 1 и 2 будет охарактеризован фенотипический и геномный ландшафт околоопухолевой жировой ткани, а в РП 3 исследователи изучат, могут ли эти знания предсказать клинический исход.

Проект основан на тесном региональном сотрудничестве между Университетской больницей Хаукеланда (HUH) и Университетской больницей Ставангера (SUH). Для текущего проекта исследователи систематически собирали жировую и опухолевую ткани у 30 последовательных пациентов с раком молочной железы, перенесших мастэктомию в SUH. Хирургические препараты молочной железы незамедлительно направляются патологоанатому, который под морфологическим контролем берет образцы соответствующей ткани с инвазивного фронта и сердцевины (0,5x1x1 см) первичной опухоли. Контрольные образцы из нормальной ткани молочной железы (2000 мг) из дальнего контралатерального квадранта также будут собраны и проверены патологоанатомом морфологически. Ткань собирают парами дубликатов. Один из образцов немедленно замораживают в жидком азоте для консервации, а другую половину каждой пары консервируют в формалине и фиксируют в парафине (FFPE). Кроме того, три пары образцов жировой ткани (каждая размером 1х1х1 см) по мере удаления от границы опухоли будут составлять градиент жировой ткани от инвазивного фронта области опухоли. Собранные градиенты также немедленно замораживают в жидком азоте, и половина каждой пары хранится как FFPE. Исследователи провели пилотное исследование, подтвердив достаточный выход РНК из образцов замороженных тканей для секвенирования РНК.

Ткань собирается в рамках общего исследовательского биобанка, Перспективного биобанка рака молочной железы (PBCB) (REK # 2010/1957), текущего проекта биобанка.

Ретроспективная когорта Ставангера состоит из всех пациентов с раком молочной железы, у которых впервые диагностирован инвазивный рак молочной железы в отделении патологии Университетской больницы Ставангера в период с 1993 по 2004 год. Поскольку SUH является единственной больницей в регионе, это настоящий популяционный биобанк, в который уже включены клинико-патологические данные, такие как классификация, стадия, TNM, маркеры лечения и пролиферации (Ki-67, PPH3/MAI); последнее клиническое наблюдение состоялось в 2016 году.

У исследований есть четыре основные гипотезы, связанные с воспалением и инфильтрацией иммунных клеток при раке молочной железы:

1. Околоопухолевая жировая ткань вблизи границы опухоли показывает повышенный уровень воспаления и инфильтрацию иммунными клетками.
2. Воспаление и инфильтрация иммунными клетками ослабевают по мере удаления от границы опухоли.
3. Существуют различия в воспалении и инфильтрации иммунными клетками между различными подтипами рака молочной железы (люминальный А, люминальный В и базальный).
4. Усиленное воспаление и инфильтрация иммунными клетками коррелируют с неблагоприятным клиническим исходом (т. рецидив заболевания).

4.1 ДИЗАЙН ИССЛЕДОВАНИЯ, МЕТОДЫ И АНАЛИЗ

У исследований есть четыре основные гипотезы, связанные с воспалением и инфильтрацией иммунных клеток при раке молочной железы:

1. Околоопухолевая жировая ткань вблизи границы опухоли показывает повышенный уровень воспаления и инфильтрацию иммунными клетками.
2. Воспаление и инфильтрация иммунными клетками ослабевают по мере удаления от границы опухоли.
3. Существуют различия в воспалении и инфильтрации иммунными клетками между различными подтипами рака молочной железы (люминальный А, люминальный В и базальный).
4. Усиленное воспаление и инфильтрация иммунными клетками коррелируют с неблагоприятным клиническим исходом (т. рецидив заболевания).

Рабочий документ WP 1: МОРФОЛОГИЧЕСКОЕ И ГЕНОМНОЕ КАРТИРОВАНИЕ ИММУНОКЛЕТОЧНОЙ ИНФИЛЬТРАЦИИ В ЖИРОВОЙ ТКАНИ, ОКРУЖАЮЩЕЙ РАК МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ

Актуальность: Воспаление является важным фактором, способствующим развитию опухоли (16). Было показано, что жировая ткань вблизи рака молочной железы имеет повышенную инфильтрацию иммунных клеток, но пока неизвестно, как это связано с молекулярными подтипами и/или близостью к опухоли. Исследователи будут использовать ИГХ и секвенирование РНК для оценки уровня воспаления, инфильтрации иммунных клеток и сигнатур экспрессии иммунных генов в жировой ткани, окружающей рак молочной железы.

Дизайн: Проспективное исследовательское исследование Пациенты, материал и расчет мощности: Жировая ткань собирается из проспективно собранных образцов мастэктомии. Образцы тканей собирают из трех различных молекулярных подгрупп (люминальный А, люминальный В и базальный рак молочной железы), по 10 в каждой группе. Основные биопсии собирают в градиенте с увеличением расстояния от границы опухоли (рис. 1). Норвежский консорциум геномики (NGC) подтвердил, что размеры выборки, основанные на отборе конкретных подтипов рака молочной железы, достаточны для статистической достоверности.

Методы: Препараты фиксированной формалином ткани опухоли, инвазивной передней и жировой ткани (рис. 1) будут окрашены с использованием ИГХ и антител против иммунных клеток (общие иммунные клетки, CD45; Т-клетки, CD3, CD8, FoxP3; миелоидные клетки, CD68). , HLA-DR). Слайды будут оцениваться с помощью микроскопии, и результаты будут соотнесены с молекулярными подгруппами рака молочной железы, локализацией по отношению к опухолевым маркерам и маркерам пролиферации (т.е. Ki67, PPH3 и MAI). Параллельно исследователи проведут секвенирование РНК на замороженных тканях, взятых из тех же образцов тканей, которые описаны выше. Для данных RNAseq будет использоваться несколько подходов к анализу. За исключением анализа поисковых данных, специальные алгоритмы анализа, включая, среди прочего, деконволюцию иммунных клеток (ABIS, CIBERSORTx) и более конкретно изучение иммунных сигнатур опухоли (анализ TIP).

Ожидаемый результат: исследователи ожидают обнаружить повышенное воспаление и инфильтрацию иммунных клеток в околоопухолевой жировой ткани, а также измененную экспрессию сигнатур воспалительных генов, которые исследователи могут дополнительно изучить в WP 2.

WP 2: ОЦЕНКА ВОСПАЛИТЕЛЬНОЙ РЕАКЦИИ В ПРИОПУХОЛЕВОЙ ЖИРОВОЙ ТКАНИ ПРИ РАКЕ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ИММУНОГИСТОХИМИИ И ВИЗУАЛИЗАЦИОННОЙ МАСС-ЦИТОМЕТРИИ.

Актуальность: Клетки рака молочной железы взаимодействуют с окружающей тканью и вызывают воспаление и инфильтрацию иммунных клеток в опухоли и жировой ткани. Визуализирующая масс-цитометрия показала, что инфильтрация иммунных клеток в опухолях коррелирует с прогнозом, но пока нет исследований, изучающих, проявляет ли жировая ткань, окружающая опухоль, структурные паттерны инфильтрации иммунных клеток. Поэтому исследователи изучат жировую ткань, окружающую опухоли рака молочной железы, с помощью масс-цитометрии с визуализацией Hyperion™.

Дизайн: проспективное исследовательское исследование Пациенты, расчет материала и мощности: Образцы тканей собирают из 30 проспективно полученных образцов мастэктомии с тремя различными молекулярными подгруппами (люминальный А, люминальный В и базальноподобный рак молочной железы), по 10 в каждой группе. Жировая ткань берется в градиенте от опухоли и из контралатерального квадранта в качестве контрольного образца (рис. 2). Размер выборки в 30 пациентов считается достаточным для исследовательского исследования такого рода.

Методы: Панель Hyperion™ IMC, содержащая до 50 уникальных антител, будет разработана на основе уже существующей и проверенной панели, доступной в основном центре UoB, которую исследователи ранее успешно использовали в других проектах. Доступная панель будет дополнительно расширена на основе результатов WP 1 и сначала проверена на «второстепенных» образцах ткани молочной железы, прежде чем использоваться на описанных выше образцах исследования. С помощью Hyperion™ IMC исследователи намерены проанализировать уровни воспалительной реакции в околоопухолевой жировой ткани. Данные IMC будут проанализированы с помощью histoCAT+, MAV и FlowJo (обычно используются для анализа данных проточной цитометрии, но также хорошо подходят для анализа изображений с высокими параметрами). Кроме того, исследователи смогут использовать данные об экспрессии генов известных и новых факторов, идентифицированных в WP 1, и визуализировать, является ли экспрессия генерализованной или компартментализованной в жировой ткани. Нормальная жировая ткань молочной железы из контралатерального квадранта будет использоваться в качестве контроля. Чтобы более подробно изучить влияние РМЖ на воспаление околоопухолевой жировой ткани различных молекулярных подтипов, исследователи также намерены окрасить ткань из трех сегментов ткани, отходящих от опухоли, чтобы определить, зависят ли уровни от расстояние от опухоли или молекулярного подтипа (рис. 1). Воспаление в околоопухолевой жировой ткани также будет оцениваться морфологически с помощью ИГХ. Это позволит нам выбрать области интереса для исследования с помощью IMC.

Ожидаемый результат: исследователи ожидают обнаружить повышенное воспаление и инфильтрацию иммунных клеток в жировой ткани вблизи опухоли, а также выявить новые биомаркеры в жировой ткани, что позволит изучить клиническую значимость WP 3.

WP 3: ВОСПАЛИТЕЛЬНАЯ РЕАКЦИЯ В ПРИОПУХОЛЕВОЙ ЖИРОВОЙ ТКАНИ ПРИ РАКЕ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ И КЛИНИЧЕСКИЙ РЕЗУЛЬТАТ.

Фон:

Иммуногистохимия является краеугольным камнем в диагностике рака молочной железы и служит основным методом идентификации молекулярных подгрупп рака молочной железы и маркеров пролиферации, таких как Ki-67. Это важно для определения того, какая схема лечения лучше всего подходит для конкретного пациента. Неоднородность опухолевой ткани (как опухолевых клеток, так и инфильтрирующих иммунных клеток) была связана с различием в клиническом исходе, но пока неизвестно, относится ли то же самое к жировой ткани, окружающей опухоль. Таким образом, исследователи изучат околоопухолевую жировую ткань на наличие воспаления и инфильтрации иммунных клеток и сопоставят это с клиническим исходом у пациентов с раком молочной железы.

Дизайн: клиническое обсервационное исследование.

Пациенты и методы. В биобанке насчитывается 3500 пациентов с раком молочной железы со средним периодом наблюдения 15 лет. Большой выбор образцов тканей от этих пациентов будет оцениваться в отношении иммунных клеток в жировой ткани и биомаркеров, обнаруженных в WP 1 и 2, с использованием IHC. Образцы будут разделены на три группы в соответствии с молекулярными подгруппами (т.е. Luminal A, Luminal B и Basal (подобно раку молочной железы). Предметные стекла тканей будут проанализированы, и результаты будут сопоставлены с клиническими результатами из журналов пациентов (доступ к журналам уже одобрен REK). Используя коэффициент пропорционального риска Кокса и логарифмический ранговый критерий, исследователи оценят влияние повышенного воспаления в жировой ткани на выживаемость пациентов.

Расчет мощности: исследователи оценили мощность теста разницы в безрецидивной выживаемости между пациентами, положительными и отрицательными для опухолевого воспаления юкста, по оценке IHC и IMC. Мерой эффекта является уровень опасности (HR), рассчитанный методом регрессии Кокса. Например: у 1000 пациентов с частотой рецидивов 15% будет создано не менее 150 конечных точек. Если уровень воспаления составляет 20%, исследования будут иметь мощность 80% для обнаружения разницы в выживаемости с коэффициентом риска (HR) 1,80 или выше.

Ожидаемый результат: Этот последний рабочий пакет разработан, чтобы доказать принципиальную возможность включения гистологического исследования околоопухолевой жировой ткани как часть диагностики рака молочной железы. В более долгосрочной перспективе исследования направлены на выявление новых специфических биомаркеров иммунной инфильтрации в жировой ткани, которые коррелируют с неблагоприятным исходом у больных раком молочной железы. Такие биомаркеры могут служить прогностическими инструментами для выявления пациентов, которым может быть назначено адъювантное противовоспалительное или иммуномодулирующее лечение.

-------------------------------------------------- --------------------------------------------------------------

D. Мониторинг побочных эффектов, качества жизни, депрессии, утомляемости и участия в трудовой жизни.

Лечение рака молочной железы включает все операции, химиотерапию, лучевую терапию и различные варианты таргетной терапии, такие как антиэстрогенная и антиHER-2 терапия. Эти варианты лечения создают неприятные побочные эффекты как в краткосрочной, так и в долгосрочной перспективе. Важно отметить, что в последнее время обнаружены более сложные взаимосвязи между методами онкологической терапии и субъективными жалобами на здоровье у больных раком молочной железы. Показатели утомляемости, тревоги и депрессии, вероятно, являются функциональными показателями общего бремени лечения. Противораковое лечение также оказывает существенное влияние на качество жизни и социальные аспекты выживших после рака, что распространяется на участие в трудовой жизни. Больничный лист (SL) через пять лет после постановки диагноза рака молочной железы больше зависит от социальных факторов, чем от болезни (2). Следовательно, рак молочной железы поражает женщин дважды; сначала бремя болезней, затем социально-экономические проблемы. Риск получения пенсии по инвалидности (DP) у женщин, перенесших рак молочной железы, почти в 3 раза выше по сравнению с пациентами без рака в ретроспективном исследовании на основе регистров (3). Тем не менее, это исследование было основано в основном на заброшенных схемах лечения онкологических заболеваний.

Цели

Целью данного исследования является выявление факторов риска для того, чтобы стать долгосрочным получателем SL, WAA или DP, путем углубленного качественного анализа и подхода смешанного метода путем триангуляции данных PROM, клинических/биологических данных и данных NAV. Использование данных NAV в качестве конечных точек предоставит ценную информацию клиницистам и врачам общей практики, которые могут оптимизировать последующее наблюдение также в отношении участия в работе и личной жизни. Следовательно, у исследователей есть надежный дизайн исследования для определения факторов fisk для высоких показателей SL, WAA и DP. В конечном счете, исследователи стремятся снизить финансовые расходы общества, связанные с раком молочной железы.

Дизайн исследования / материал и методы.

Дизайн исследования представляет собой обсервационное исследование, в котором исследователи в настоящем исследовании составят карту частоты и факторов denty fisk для высоких SL, WAA и DP среди выживших после рака молочной железы с современными схемами лечения. Исследователи будут следовать 4-этапному трансляционному подходу:

1. Исследователи сначала проведут предварительное качественное исследование с использованием анализа документов о политике в области здравоохранения и трудовой жизни в норвежском контексте в сочетании с эмпирическими данными полуструктурированных интервью и фокус-группы с 20 пациентами с высоким риском для тематического анализа. Теоретическая основа этого качественного проекта основана на символическом интеракционизме, целью которого является раскрытие и понимание значения в конкретных контекстах. Поскольку значимые социальные и профессиональные взаимодействия важны для психосоциальной реабилитации больных раком молочной железы, символический интеракционизм является подходящей методологической основой. Этот качественный подход заложит основы подхода в исследованиях, основанных на PROM и ориентированных на базу данных NAV, ниже.

2. NAV-данные

   В настоящее время следователи сотрудничают с заместителем директора Аннелин Кристин Тейген и старшим консультантом Гюнтером Олсборгом в NAV-Rogaland и в отделе микроданных Статистического управления Норвегии (SSB). Целью этого сотрудничества является получение дополнительных знаний об использовании служб социального обеспечения среди пациентов с раком молочной железы вместе с экспертами NAV-Rogaland и совместно с SSB использование базы данных FD-trygd для получения надежных проспективных социально-демографических данных о SL (как коротких, так и длинных). срок), Пособие по оценке работы (WAA) (Arbeidsavklaringspenger) и DP (оба ограничены по времени

   и на всю жизнь) для каждого пациента в настоящем исследовании PerMoBreCan.

3. Данные о показателях результатов, сообщаемых пациентами (PROM), получают на исходном уровне, а затем ежегодно от всех пациентов PerMoBreCan. Данные PROM состоят из 1. инструментов HRQoL (EORTC QLQ-C30, EORTC QLQ-BR23 и FACT B), 2. госпитальной шкалы тревоги и депрессии, HAD, 3. инструментов усталости, шкалы воздействия усталости, FIS; Шкала тяжести утомляемости (FSS) и ВАШ-усталость, 4. Опросники побочных эффектов, 5. Опросник боли в суставах, 6. Шкала неопределенности Мишеля в заболевании, MUIS; и 7. Опросник пищевых привычек и опросник 8.ROMA III жалоб на кишечник (ВЗК и СРК).
4. Идентификация биомаркеров.

Все пациенты, участвующие в этом исследовании, будут проверены на циркулирующие биомаркеры, связанные с усталостью. Эти биомаркеры находятся на уровне белка, уровне генетической экспрессии, а также на эпигенетическом уровне. Наше давнее приятное сотрудничество с проф. Роальд Омдал из Университетской больницы Ставангера, клинический иммунолог и исследователь транснациональной усталости, взял на себя обязательство проводить эти анализы в своей исследовательской лаборатории.