Genetikk av selvskadende atferd

Teoretisk bakgrunn Etiologien til Nonsuicidal Self-Injury (NSSI) er fortsatt ikke forklart. Studier som er utført så langt indikerer både genetiske og miljømessige faktorer. Det har blitt antydet at NSSI er en polygen lidelse. To nevrotransmittersystemer, det serotonerge systemet og det endogene opioidsystemet, er hovedkandidatsystemene i etiologien til NSSI.

Serotoninsystemet er viktig ved komorbide lidelser av NSSI (depresjon, angst ...). Det er også økende betydning av dets direkte engasjement i NSSI. Mangel på tryptofan, en forløper for serotonin, har vært forbundet med økende frekvens av NSSI. Variabel-tall tandem repeterende polymorfisme av serotonin transporter genet - SLC6A4 (VNTR STin2) har blitt assosiert med borderline personlighetsforstyrrelse, en lidelse med hyppig NSSI, i en studie. Det er noen viktige polymorfismer av genet for tryptofanhydroksylase-enzymet, hovedenzymet i syntesen av serotonin. Polymorfismen rs1799913 har vært assosiert med depresjon og parasuicidal atferd. Denne polymorfismen er, sammen med noen andre polymorfismer (f. rs4537731, rs7933505), en del av en haplotype. Denne haplotypen har allerede vist noen sammenhenger med borderline personlighetsforstyrrelse.

Det er også økende bevis på at endringene i konsentrasjonen av endogene opioider (EO) kan være assosiert med NSSI. Signifikant lavere β-endorfin- og met-enkefalinverdier i brennevinet til personer med NSSI var påvist. En fersk studie har vist betydelig lavere basale β-endorfinnivåer hos ungdom med NSSI sammenlignet med friske kontroller. Naomi I. Eisenberger er en leder i å studere polymorfismer av endogene opioider i forbindelse med "emosjonell" smerte. Personer med lavere terskel for fysisk smerte beskrev også en større følsomhet for følelsesmessig smerte. Det er mange bevis på den signifikante effekten av polymorfismen til genet for mu-opioidreseptoren OPRM1 (A118G; rs1799971) på endret følsomhet for fysisk smerte, smerteoppfatning og respons på opiat-analgetika. En signifikant økt følsomhet av G-allelbærere for sosial avvisning (dvs. på en modell for "emosjonell" smerte) er påvist. En rekke studier har blitt utført på virkningen av rs1799971 polymorfisme på trang og avhengighet. Gitt den teoretiske vanedannende bakgrunnen til NSSI og sammenkoblingen av fysisk og emosjonell smerte og rollen til rs1799971 polymorfismen, er denne polymorfismen en viktig kandidatpolymorfisme i NSSI. For individuelle avhengigheter vises ulike, til dels motstridende resultater. Ulike studier har bekreftet G-allelen som en risikofaktor for ulike avhengigheter, mens andre ikke har vist noen påvirkning eller har funnet redusert risiko for avhengighet hos G-allelbærere. I 2016 ble derfor den første samarbeidsanalysen utført der 9064 personer av den kaukasiske befolkningen ble inkludert. I denne store europeiske prøven viste G-allelen seg å være en signifikant (OR = 0,90; konfidensintervall 95 % (0,83 - 0,97); p = 0,0095) beskyttende faktor for avhengighet generelt. Direkte studier av trang og virkningen av rs1799971 på trang er sjeldne og motstridende. Det har vært lite forskning på potensiell genetisk påvirkning på utviklingen av NSSI og rs1799971 ser ikke ut til å ha blitt studert på dette feltet.

Hovedmålet for antipsykotika, dopaminreseptoren D2, er også viktig i forskningen på avhengighet. Den mest kjente polymorfismen til dopaminreseptor 2-genet er Taq1A (TaqIA) (rs1800497) polymorfisme. To alleler av rs1800497 er kjent - A1 og A2. Allel A1 har blitt assosiert med patologisk gambling, en typisk atferdsavhengighet, i en studie. Det har også vært assosiert med impulsivitet og vanedannende atferd i noen andre studier. A1-allelen har også vært assosiert med borderline personlighetstrekk. G - proteiner har vært forbundet med riktig aktivitet av mange reseptorer. Polymorfismen C825T (rs5443) til G-proteinet beta 3-genet (GNbeta3) har i en del forskning vært forbundet med depresjon. I en studie hadde T-allelbærerne en statistisk høyere risiko for NSSI som andre depressive pasienter.

Redusert smerteoppfatning og høyere smerteterskel hos personer med NSSI er vist.

Godkjenning av etisk komité og prosjektregistrering Studien er godkjent av den medisinske etiske komiteen i Republikken Slovenia (nummer 69/06/13). Det er valgt og registrert som et internt vitenskapelig forsknings- og utviklingsprosjekt ved University Medical Center Maribor, Slovenia, 1.8.2013 (prosjektnummer IRP-2013/01-07).

Spørreskjema Alle ungdommer fra det kliniske utvalget og den opprinnelige kontrollgruppen fylte ut den slovenske versjonen av selvevalueringsspørreskjemaet til State-Trait Anxiety Inventory for Adults (STAI) og følgende spørreskjemaer, oversatt til slovensk: Barratt Impulsiveness Scale (BIS- 11), MacLean Screening Instrument for BPD (MSI-BPD), Early Trauma Inventory Self Report-Short Form (ETISR-SF). STAI måler to former for angst. "Statsangst" måler den nåværende tilstanden, dvs. nivået av angst som individet føler ved en gitt hendelse. "Trekkens angst" refererer til den langsiktige tilstanden til individet. BIS-11 er trolig det mest brukte instrumentet for måling av impulsivitet. MSI-BPD er et spørreskjema som brukes til å søke etter borderline personlighetsforstyrrelse i ungdomsårene. ETISR-SF måler barndomstraumer, inkludert fysiske, følelsesmessige og seksuelle overgrep, samt generelle traumatiske hendelser.

For å identifisere NSSI brukte etterforskerne den slovenske oversettelsen av Inventory of Statements about Self-Injury (ISAS) og den slovenske oversettelsen av Self-Injury Craving Questionnaire (SICQ) for den kliniske prøven. ISAS er et spørreskjema som består av to deler. Den første delen består av 12 spørsmål om selvskadende atferd og den andre delen av spørsmål om 13 funksjoner til NSSI. SICQ inneholder 7 spørsmål om suget etter NSSI.

DNA-ekstraksjon og genotyping Det er lite forskning på genetikk til NSSI. Noen genetiske kandidatpolymorfismer var blitt valgt ved hjelp av denne informasjonen. Overveiende er kandidatgenetiske polymorfismer i studien derfor valgt ved hjelp av informasjon om genetikk ved avhengighet og komorbide lidelser (depresjon, borderline personlighetsforstyrrelse, …).

DNA for genotyping ble ekstrahert fra mononukleære celler fra perifert blod ved å bruke TRI-reagens (Sigma, Steinheim, Tyskland) i henhold til produsentens instruksjoner. Kvalitet og konsentrasjon av ekstrahert DNA ble kontrollert ved bruk av agarosegelelektroforese og SynergyTM 2 (Biotek, Winooski, VT, USA) spektrofotometer.

For genotyping av polymorfismene utførte etterforskerne først sanntids polymerasekjedereaksjon (qPCR) og deretter høyoppløsningssmelting (HRM) eller restriksjonsfragmentlengde polymorfisme (RFLP) metoden. qPCR ble utført som følger: denaturering ved 95 °C i 10 minutter, multiplikasjon, 45 sykluser med 95 °C 10 s, 60 °C 15 s, 72 °C 10 s. HRM er laget etter følgende protokoll: 95 °C 1 min, 40 °C 1 min, 60 - 90 °C ved 0,02 °C/s og avkjøling ved 40 °C i 10 s. HRM-reaksjonen er laget med LightCycler® 480 (Roche) og LC480 HRM Master Mix (Roche) har blitt brukt. Etterforskerne har analysert genotypene fra smeltekurvene (TABELL 1). I RFLP-protokollen har produktet av qPCR blitt inkubert med det riktige restriksjonsenzymet fra New England Biolabs (TABELL 1). Analyse er gjort med agarosegelelektroforese (2 % agarosegel, trisborat EDTA-buffer). DNA-prøvene ble blandet med 0,25 % xylencyanol og 40 % sukrose. Elektroforese har blitt kjørt ved 150 V i 20 minutter. På slutten har agarosegelen blitt analysert under UV-lys.

Gene; genetisk polymorfisme; sekvensen av primeren; temperatur; genotyping metode; restriksjonsenzym:

1. OPRM1; rs1799971; CGGTTCCTGGGTCAACTTGT, GATCGTGATGGCCGTGAT; 60 °C; HRM; /.
2. TPH1; rs4537731; GTTTCATGCAGGTATTAGTG, TGGCATTGAAGTAAGAGCAC; 60 °C; RFLP; Sau3AI.
3. TPH1; rs1799913; GTTAGCACTGCAGCGTGAC, AAGCGGGACATGACCTAAGA; 60 °C; HRM; /.
4. TPH1; rs7933505; AAACTGAGAGGAAAATGCTTGC, CATTGCCGTTGAACTTTTGA; 65 °C; RFLP; NlaIII.
5. DRD2; rs1800497; CTTGCCCTCTAGGAAGGACAT, ACCTTCCTGAGTGTCATCAACC; 65 °C; RFLP; TaqI.
6. GNB3; rs5443; CATCATCTGCGGCATCACG, ACGCTCAGACTTCATGGAGT; 60 °C; HRM; /.
7. SLC6A4; VNTR; GGGCAATGTCTGGCGCTTCCCCTACATA, TTCTGGCCTCTCAAGAGGACCTACAGC; 65,5 °C; PCR; /.

Statistisk analyse Dataene ble analysert ved bruk av IBM SPSS Statistics programpakke (IMB Inc., Armonk, New York). P ≤ 0,05 ble ansett som statistisk signifikant.

Sammenligningen av andelen traumatiserte og misbrukte ungdommer i det kliniske utvalget og i den opprinnelige kontrollgruppen er gjort med Fishers eksakte test. Alle kontinuerlige variabler ble først vurdert for normalitet ved å bruke Kolmogorov-Smirnov normalitetstest. Korrelasjon mellom alderen ved begynnelsen av NSSI og det totale antallet NSSI i livet ble bestemt ved å bruke Spearmans korrelasjon. Sammenhengen mellom totalt antall selvskader (NSSI) i livet og verdien på SICQ-spørreskjemaet er også vurdert ved bruk av Spearmans korrelasjonsanalyse. Sammenhengen mellom verdien av SICQ-spørreskjemaet og tiden som går fra tanken på NSSI til NSSI og også genotype og det totale antallet NSSI i livet er begge blitt vurdert ved hjelp av Kruskal-Wallis H-test. Mann-Whitney U-testen hadde blitt brukt for å bestemme forholdet mellom genotype og alderen ved begynnelsen av NSSI. Det er laget ulike logistiske regresjonsmodeller med parametere for ETISR-SF spørreskjema / BIS-11 / MSI - BPD / STAI STETE / STAI TRAIT og kandidatgenotypene som uavhengige variabler og NSSI som avhengig variabel. Ujusterte analyser av selve rs1799971 / rs1800497 genotypen og craving-variabelen ble utført ved bruk av Mann-Whitney U-test. Bidraget til rs1799971 / rs1800497 genotypen til nivået av sug etter NSSI (SICQ) ble studert ved bruk av generaliserte lineære modeller og ble justert til STAI STATE og STAI TRAIT / ETISR - SF. Det er laget logistiske regresjonsmodeller med kandidatgenotyper som uavhengige variabler og smertepersepsjon under NSSI som avhengig variabel. Bidraget til rs1799971 / rs1800497 genotypen til smertepersepsjon er studert ved bruk av logistiske regresjonsmodeller som ble justert til STAI STATE / STAI TRAIT / MSI - BPD/ETISR - SF. Forholdet mellom smerteoppfatning under NSSI og craving (SICQ) ble vurdert ved hjelp av Mann-Whitney U-test.

Målet med studien og hypotesene Målet med forskningen var å gjennomføre den første G x E-studien på etiologien til NSSI, diagnostisert med de foreslåtte forskningskriteriene fra DSM-5, hos slovenske ungdommer. Etterforskerne ønsket å gjøre den første assosiasjonsstudien av rs1799971 hos ungdom med NSSI og studere sammenhengen mellom OPRM1-genet med vanedannende egenskaper til NSSI og trang til NSSI. Målet var også å gjenskape resultatene fra Joyce og hans høyskoler (assosiasjon av rs5443 og NSSI hos depressive pasienter) i et utvalg ungdommer med NSSI.

Etterforskerne har antatt at NSSI kan være assosiert med en av kandidatpolymorfismer eller en kombinasjon av kandidatpolymorfismer. Videre har etterforskerne antatt at de genetiske polymorfismene assosiert med NSSI er de mest knyttet til NSSI hos traumatiserte individer og at NSSI er assosiert med høyere impulsivitet.