Genetyka zachowań samookaleczających

Podstawy teoretyczne Etiologia samouszkodzeń niebędących samobójstwami (NSSI) nadal nie została wyjaśniona. Dotychczasowe badania wskazują zarówno na czynniki genetyczne, jak i środowiskowe. Sugerowano, że NSSI jest zaburzeniem wielogenowym. Dwa układy neuroprzekaźników, układ serotonergiczny i układ endogennych opioidów, są głównymi układami kandydującymi w etiologii NSSI.

Układ serotoninowy jest ważny we współistniejących zaburzeniach NSSI (depresja, lęk…). Rośnie również znaczenie jego bezpośredniego zaangażowania w NSSI. Niedobór tryptofanu, prekursora serotoniny, wiązał się ze wzrostem częstości NSSI. W jednym badaniu polimorfizm powtórzeń tandemowych zmiennej liczby genu transportera serotoniny - SLC6A4 (VNTR STin2) został powiązany z zaburzeniem osobowości typu borderline, zaburzeniem z częstymi NSSI. Oto kilka ważnych polimorfizmów genu enzymu hydroksylazy tryptofanu, głównego enzymu w syntezie serotoniny. Polimorfizm rs1799913 został powiązany z depresją i zachowaniami parasamobójczymi. Polimorfizm ten, wraz z innymi polimorfizmami (np. rs4537731, rs7933505), część haplotypu. Ten haplotyp wykazał już pewne powiązania z zaburzeniem osobowości typu borderline.

Istnieje również coraz więcej dowodów na to, że zmiany stężenia endogennych opioidów (EO) mogą być związane z NSSI. Wykazano istotnie niższe wartości β-endorfiny i met-enkefaliny w alkoholu osób z NSSI. Niedawne badanie wykazało znacznie niższe podstawowe poziomy β-endorfiny u nastolatków z NSSI w porównaniu ze zdrowymi osobami z grupy kontrolnej. Naomi I. Eisenberger jest liderem w badaniu polimorfizmów endogennych opioidów w połączeniu z bólem „emocjonalnym”. Osoby z niższym progiem odczuwania bólu fizycznego charakteryzowały się również większą wrażliwością na ból emocjonalny. Istnieje wiele dowodów na istotny wpływ polimorfizmu genu receptora opioidowego mu OPRM1 (A118G; rs1799971) na zmienioną wrażliwość na ból fizyczny, percepcję bólu i odpowiedź na opiatowe leki przeciwbólowe. Wykazano znacznie zwiększoną wrażliwość nosicieli alleli G na odrzucenie społeczne (tj. na modelu bólu „emocjonalnego”). Przeprowadzono szereg badań nad wpływem polimorfizmu rs1799971 na głód i uzależnienie. Biorąc pod uwagę teoretyczne uzależniające tło NSSI i wzajemne powiązania bólu fizycznego i emocjonalnego oraz rolę polimorfizmu rs1799971, ten polimorfizm jest ważnym kandydatem na polimorfizm w NSSI. Dla poszczególnych uzależnień pojawiają się różne, częściowo sprzeczne wyniki. Różne badania potwierdziły, że allel G jest czynnikiem ryzyka różnych uzależnień, podczas gdy inne nie wykazały żadnego wpływu lub wykazały zmniejszone ryzyko uzależnienia u nosicieli allelu G. Tak więc w 2016 roku przeprowadzono pierwszą wspólną analizę, w której uwzględniono 9064 osoby z populacji kaukaskiej. W tej dużej europejskiej próbie allel G okazał się znaczącym (OR = 0,90; przedział ufności 95% (0,83 - 0,97); p = 0,0095) czynnikiem ochronnym dla uzależnienia w ogóle. Bezpośrednie badania głodu i wpływu rs1799971 na głód są rzadkie i sprzeczne. Przeprowadzono niewiele badań dotyczących potencjalnych wpływów genetycznych na rozwój NSSI i wydaje się, że rs1799971 nie był badany w tej dziedzinie.

Główny cel leków przeciwpsychotycznych, receptor dopaminy D2, jest również ważny w badaniach nad uzależnieniami. Najbardziej znanym polimorfizmem genu receptora dopaminy 2 jest polimorfizm Taq1A (TaqIA) (rs1800497). Znane są dwa allele rs1800497 - A1 i A2. Allel A1 został powiązany z patologicznym hazardem, typowym uzależnieniem behawioralnym, w jednym badaniu. W niektórych innych badaniach wiązano go również z impulsywnością i zachowaniami uzależniającymi. Allel A1 został również powiązany z cechami osobowości typu borderline. Białka G zostały powiązane z prawidłową aktywnością wielu receptorów. Polimorfizm C825T (rs5443) genu białka G beta 3 (GNbeta3) był w niektórych badaniach łączony z depresją. W jednym badaniu nosiciele alleli T mieli statystycznie wyższe ryzyko wystąpienia NSSI niż inni pacjenci z depresją.

Wykazano zmniejszoną percepcję bólu i wyższy próg bólu u osób z NSSI.

Zgoda Komisji Etycznej i rejestracja projektu Badanie zostało zatwierdzone przez Komisję Etyki Lekarskiej Republiki Słowenii (nr 69/06/13). Został wybrany i zarejestrowany jako wewnętrzny projekt naukowo-badawczy i rozwojowy Uniwersyteckiego Centrum Medycznego Maribor, Słowenia, w dniu 1.8.2013 (nr projektu IRP-2013/01-07).

Kwestionariusze Wszyscy adolescente z próby klinicznej i pierwotnej grupy kontrolnej wypełnili słoweńską wersję kwestionariusza samooceny Inwentarza Stanu-Cechy Lęku dla Dorosłych (STAI) oraz następujące kwestionariusze, przetłumaczone na język słoweński: Skala Impulsywności Barratta (BIS- 11), MacLean Screening Instrument for BPD (MSI-BPD), Early Trauma Inventory Self Report-Short Form (ETISR-SF). STAI mierzy dwa rodzaje lęku. „Lęk-stan” mierzy aktualny stan, czyli poziom lęku, jaki dana osoba odczuwa w związku z danym wydarzeniem. „Lęk jako cecha” odnosi się do długoterminowego stanu jednostki. BIS-11 jest prawdopodobnie najczęściej używanym przyrządem do pomiaru impulsywności. MSI-BPD to kwestionariusz przesiewowy używany do wyszukiwania zaburzeń osobowości typu borderline u młodzieży. ETISR-SF mierzy traumę z dzieciństwa, w tym przemoc fizyczną, emocjonalną i seksualną, a także ogólne traumatyczne wydarzenia.

W celu zidentyfikowania NSSI badacze wykorzystali słoweńskie tłumaczenie Inwentarza Oświadczeń o Samookaleczeniach (ISAS) oraz słoweńskie tłumaczenie Kwestionariusza Samookaleczenia (SICQ) dla próby klinicznej. ISAS to kwestionariusz składający się z dwóch części. Pierwsza część składa się z 12 pytań dotyczących zachowań autoagresywnych, a druga z pytań dotyczących 13 funkcji NSSI. SICQ zawiera 7 pytań dotyczących pragnienia NSSI.

Ekstrakcja DNA i genotypowanie Istnieje niewiele badań dotyczących genetyki NSSI. Za pomocą tych informacji wybrano kilka kandydujących polimorfizmów genetycznych. Przede wszystkim kandydujące polimorfizmy genetyczne w badaniu zostały wybrane za pomocą informacji na temat genetyki uzależnienia i zaburzeń współistniejących (depresja, zaburzenie osobowości typu borderline,…).

DNA do genotypowania ekstrahowano z jednojądrzastych komórek krwi obwodowej przy użyciu odczynnika TRI (Sigma, Steinheim, Niemcy) zgodnie z instrukcjami producenta. Jakość i stężenie wyekstrahowanego DNA sprawdzono za pomocą elektroforezy w żelu agarozowym i spektrofotometru SynergyTM 2 (Biotek, Winooski, VT, USA).

W celu genotypowania polimorfizmów badacze najpierw przeprowadzili reakcję łańcuchową polimerazy w czasie rzeczywistym (qPCR), a następnie metodę topienia w wysokiej rozdzielczości (HRM) lub metodę polimorfizmu długości fragmentów restrykcyjnych (RFLP). qPCR przeprowadzono w następujący sposób: denaturacja w 95°C przez 10 min, namnażanie, 45 cykli 95°C 10 s, 60°C 15 s, 72°C 10 s. HRM wykonano w następującym protokole: 95°C 1 min, 40°C 1 min, 60 - 90°C z szybkością 0,02°C/si chłodzenie w 40°C przez 10 s. Reakcję HRM przeprowadzono za pomocą LightCycler® 480 (Roche) i użyto LC480 HRM Master Mix (Roche). Badacze przeanalizowali genotypy z krzywych topnienia (TABELA 1). W protokole RFLP produkt qPCR inkubowano z odpowiednim enzymem restrykcyjnym z New England Biolabs (TABELA 1). Analizę przeprowadzono za pomocą elektroforezy w żelu agarozowym (2% żel agarozowy, trisboranowy bufor EDTA). Próbki DNA zmieszano z 0,25% cyjanolem ksylenowym i 40% sacharozą. Elektroforezę prowadzono przy 150 V przez 20 minut. Na koniec żel agarozowy poddano analizie w świetle UV.

Gen; polimorfizm genetyczny; sekwencja startera; temperatura; metoda genotypowania; enzym restrykcyjny:

1. OPRM1; rs1799971; CGGTTCCTGGGTCAACTTGT, GATCGTGATGGCCGTGAT; 60°C; HRM; /.
2. TPH1; rs4537731; GTTTCATGCAGGTATTAGTG, TGGCATTGAAGTAAGAGCAC; 60°C; RFLP; Sau3AI.
3. TPH1; rs1799913; GTTAAGCACTGCAGCGTGAC, AAGCGGGACATGACCTAAGA; 60°C; HRM; /.
4. TPH1; rs7933505; AAACTGAGAGGAAAATGCTTGC, CATTGCCGTTGAACTTTTGA; 65°C; RFLP; NlaIII.
5. DRD2; rs1800497; CTTGCCCTCTAGGAAGGACAT, ACCTTCCTGAGTGTCATCAACC; 65°C; RFLP; TaqI.
6. GNB3; rs5443; CATCATCTGCGGCATCACG, ACGCTCAGACTTCATGGAGT; 60°C; HRM; /.
7. SLC6A4; VNTR; GGGCAATGTCTGGCGCTTCCCCTACATA, TTCTGGCCTCTCAAGAGGACCTACAGC; 65,5°C; PCR; /.

Analiza statystyczna Dane analizowano przy użyciu pakietu programu IBM SPSS Statistics (IMB Inc., Armonk, Nowy Jork). P ≤ 0,05 uznano za statystycznie istotne.

Porównanie udziału adolescentów traumatyzowanych i maltretowanych w próbie klinicznej i pierwotnej grupie kontrolnej przeprowadzono za pomocą dokładnego testu Fishera. Wszystkie zmienne ciągłe zostały najpierw ocenione pod kątem normalności za pomocą testu normalności Kołmogorowa-Smirnowa. Korelację między wiekiem wystąpienia NSSI a całkowitą liczbą NSSI w życiu określono za pomocą korelacji Spearmana. Za pomocą analizy korelacji Spearmana oceniono również zależność między całkowitą liczbą samouszkodzeń w życiu (NSSI) a wartością w kwestionariuszu SICQ. Zależność wartości kwestionariusza SICQ od czasu, jaki upływa od myśli o NSSI do NSSI, a także genotypu i całkowitej liczby NSSI w życiu oceniono za pomocą testu H Kruskala-Wallisa. Test U Manna-Whitneya wykorzystano do określenia związku między genotypem a wiekiem wystąpienia NSSI. Wykonano różne modele regresji logistycznej z parametrami kwestionariusza ETISR-SF / BIS-11 / MSI - BPD / STAI STETE / STAI TRAIT oraz genotypami kandydującymi jako zmiennymi niezależnymi i NSSI jako zmienną zależną. Nieskorygowane analizy samego genotypu rs1799971 / rs1800497 i zmiennej głodu przeprowadzono za pomocą testu U Manna-Whitneya. Udział genotypu rs1799971 / rs1800497 w poziomie głodu na NSSI (SICQ) badano za pomocą uogólnionych modeli liniowych i dostosowano do STAI STATE i STAI TRAIT / ETISR - SF. Stworzono modele regresji logistycznej z genotypami kandydującymi jako zmiennymi niezależnymi i percepcją bólu podczas NSSI jako zmienną zależną. Wpływ genotypu rs1799971 / rs1800497 na odczuwanie bólu badano za pomocą modeli regresji logistycznej, które zostały dostosowane do STAI STAN / STAI TRAIT / MSI - BPD / ETISR - SF. Zależność między odczuwaniem bólu podczas NSSI a głodem (SICQ) oceniono za pomocą testu U Manna-Whitneya.

Cel pracy i postawione hipotezy Celem pracy było przeprowadzenie pierwszego badania G x E dotyczącego etiologii NSSI, diagnozowanego za pomocą proponowanych kryteriów badawczych z DSM-5, u słoweńskiej młodzieży. Badacze chcieli przeprowadzić pierwsze badanie asocjacyjne rs1799971 u nastolatków z NSSI i zbadać związek genu OPRM1 z uzależniającymi właściwościami NSSI i apetytem na NSSI. Celem było również powtórzenie wyników Joyce'a i jego kolegiów (powiązanie rs5443 i NSSI u pacjentów z depresją) na próbie nastolatków z NSSI.

Badacze postawili hipotezę, że NSSI może być powiązany z jednym z kandydujących polimorfizmów lub kombinacją kandydujących polimorfizmów. Ponadto badacze postawili hipotezę, że polimorfizmy genetyczne związane z NSSI są najbardziej związane z NSSI u osób po traumie i że NSSI wiąże się z wyższą impulsywnością.