Генетика самоповреждающего поведения

Теоретическая основа Этиология несуицидального самоповреждения (NSSI) до сих пор не объяснена. Исследования, которые были проведены до сих пор, указывают как на генетические факторы, так и на факторы окружающей среды. Было высказано предположение, что NSSI является полигенным заболеванием. Две системы нейротрансмиттеров, серотонинергическая система и система эндогенных опиоидов, являются основными системами-кандидатами в этиологии NSSI.

Серотониновая система важна при коморбидных расстройствах NSSI (депрессия, тревога…). Также растет значение его прямого участия в NSSI. Дефицит триптофана, предшественника серотонина, был связан с увеличением частоты NSSI. Полиморфизм тандемных повторов с переменным числом повторов гена переносчика серотонина - SLC6A4 (VNTR STin2) был связан с пограничным расстройством личности, расстройством с частым NSSI, в одном исследовании. Приведены некоторые важные полиморфизмы гена фермента триптофангидроксилазы, основного фермента синтеза серотонина. Полиморфизм rs1799913 был связан с депрессией и парасуицидальным поведением. Этот полиморфизм вместе с некоторыми другими полиморфизмами (например, rs4537731, rs7933505), часть гаплотипа. Этот гаплотип уже показал некоторую связь с пограничным расстройством личности.

Также появляется все больше доказательств того, что изменения концентрации эндогенных опиоидов (ЭО) могут быть связаны с NSSI. Было продемонстрировано значительно более низкие значения β-эндорфина и мет-энкефалина в ликворе лиц с NSSI. Недавнее исследование показало значительно более низкие базальные уровни β-эндорфина у подростков с NSSI по сравнению со здоровыми людьми из контрольной группы. Наоми И. Айзенбергер является лидером в изучении полиморфизмов эндогенных опиоидов в сочетании с «эмоциональной» болью. Люди с более низким порогом физической боли также описывали большую чувствительность к эмоциональной боли. Имеются многочисленные свидетельства значительного влияния полиморфизма гена мю-опиоидного рецептора OPRM1 (A118G; rs1799971) на измененную чувствительность к физической боли, восприятие боли и реакцию на опиатные анальгетики. Продемонстрирована значительно повышенная чувствительность носителей аллеля G к социальному отторжению (т.е. на модели «эмоциональной» боли). Был проведен ряд исследований влияния полиморфизма rs1799971 на тягу и зависимость. Учитывая теоретический аддиктивный фон NSSI и взаимосвязь физической и эмоциональной боли, а также роль полиморфизма rs1799971, этот полиморфизм является важным полиморфизмом-кандидатом в NSSI. Для отдельных зависимостей появляются разные, отчасти противоречивые результаты. Различные исследования подтвердили, что аллель G является фактором риска различных зависимостей, в то время как другие не продемонстрировали никакого влияния или не обнаружили снижения риска зависимости у носителей аллеля G. Так, в 2016 г. был проведен первый совместный анализ, в который были включены 9064 субъекта европеоидной популяции. В этой большой европейской выборке аллель G оказался значимым (OR = 0,90; доверительный интервал 95 % (0,83–0,97); p = 0,0095) защитным фактором зависимости в целом. Прямые исследования тяги и влияния rs1799971 на тягу редки и противоречивы. Было проведено мало исследований потенциального генетического влияния на развитие NSSI, и rs1799971, по-видимому, не изучался в этой области.

Основная мишень нейролептиков, дофаминовый рецептор D2, также важен в исследованиях зависимости. Наиболее известным полиморфизмом гена дофаминового рецептора 2 является полиморфизм Taq1A (TaqIA) (rs1800497). Известны два аллеля rs1800497 - А1 и А2. В одном исследовании аллель A1 был связан с патологической склонностью к азартным играм, типичной поведенческой зависимостью. В некоторых других исследованиях это также было связано с импульсивностью и аддиктивным поведением. Аллель A1 также был связан с пограничными чертами личности. G-белки были связаны с собственной активностью многочисленных рецепторов. Полиморфизм C825T (rs5443) гена бета-3 белка G (GNbeta3) в некоторых исследованиях был связан с депрессией. В одном исследовании носители аллеля Т имели статистически более высокий риск NSSI, чем другие пациенты с депрессией.

Было показано снижение восприятия боли и более высокий болевой порог у людей с NSSI.

Утверждение комитетом по этике и регистрация проекта Исследование было одобрено комитетом по медицинской этике Республики Словения (номер 69/06/13). Он был выбран и зарегистрирован в качестве внутреннего научно-исследовательского и опытно-конструкторского проекта Университетского медицинского центра Марибора, Словения, 1 августа 2013 г. (номер проекта IRP-2013/01-07).

Анкеты Все подростки из клинической выборки и исходной контрольной группы заполнили словенскую версию анкеты самооценки Опросника состояния и тревожности для взрослых (STAI) и следующие анкеты, переведенные на словенский язык: Шкала импульсивности Барратта (BIS- 11), Инструмент скрининга MacLean для ПРЛ (MSI-BPD), Краткая форма самоотчета о ранней инвентаризации травм (ETISR-SF). STAI измеряет две формы тревоги. «Состояние тревожности» измеряет текущее состояние, т. е. уровень тревожности, которую человек испытывает при данном событии. «Черта тревоги» относится к долгосрочному состоянию человека. BIS-11, вероятно, является наиболее часто используемым инструментом для измерения импульсивности. MSI-BPD — это скрининговый опросник, используемый для поиска пограничного расстройства личности в подростковом возрасте. ETISR-SF измеряет детские травмы, включая физическое, эмоциональное и сексуальное насилие, а также общие травмирующие события.

Чтобы идентифицировать NSSI, исследователи использовали словенский перевод Перечня заявлений о самоповреждении (ISAS) и словенский перевод Опросника тяги к самоповреждению (SICQ) для клинического образца. ISAS представляет собой анкету, состоящую из двух частей. Первая часть состоит из 12 вопросов о самоповреждающем поведении, а вторая часть вопросов о 13 функциях НССИ. SICQ содержит 7 вопросов о тяге к NSSI.

Экстракция ДНК и генотипирование Генетика NSSI мало изучена. С помощью этой информации были выбраны некоторые генетические полиморфизмы-кандидаты. Преимущественно кандидаты на генетические полиморфизмы в исследовании были выбраны с помощью информации о генетике зависимости и сопутствующих расстройств (депрессия, пограничное расстройство личности, …).

ДНК для генотипирования выделяли из мононуклеарных клеток периферической крови с использованием TRI-реагента (Sigma, Steinheim, Germany) в соответствии с инструкциями производителя. Качество и концентрацию выделенной ДНК проверяли с помощью электрофореза в агарозном геле и спектрофотометра SynergyTM 2 (Biotek, Winooski, VT, USA).

Для генотипирования полиморфизмов исследователи сначала провели полимеразную цепную реакцию в реальном времени (qPCR), а затем метод плавления с высоким разрешением (HRM) или метод полиморфизма длин рестрикционных фрагментов (RFLP). КПЦР проводили следующим образом: денатурация при 95°С 10 мин, размножение, 45 циклов 95°С 10 с, 60°С 15 с, 72°С 10 с. HRM проводили по следующему протоколу: 95°С 1 мин, 40°С 1 мин, 60-90°С при 0,02°С/с и охлаждение при 40°С 10 с. Реакцию HRM проводили с помощью LightCycler® 480 (Roche) и использовали мастер-микс LC480 HRM (Roche). Исследователи проанализировали генотипы по кривым плавления (табл. 1). В протоколе RFLP продукт количественной ПЦР инкубировали с нужным ферментом рестрикции от New England Biolabs (ТАБЛИЦА 1). Анализ проводили с помощью электрофореза в агарозном геле (2% агарозный гель, трисборатный буфер с ЭДТА). Образцы ДНК смешивали с 0,25% ксиленцианола и 40% сахарозы. Электрофорез проводили при 150 В в течение 20 минут. В конце гель агарозы анализировали в УФ-свете.

Ген; генетический полиморфизм; последовательность праймера; температура; метод генотипирования; рестриктазы:

1. ОПРМ1; рс1799971; CGGTTCCTGGGTCAACTTGT, GATCGTGATGGCCGTGAT; 60°С; УЧР; /.
2. ТПХ1; рс4537731; GTTTCATGCAGGTATTAGTG, TGGCATTGAAGTAAGAGCAC; 60°С; ПДРФ; Сау3АИ.
3. ТПХ1; рс1799913; GTTAAGCACTGCAGCGTGAC, AAGCGGGACATGACCTAAGA; 60°С; УЧР; /.
4. ТПХ1; рс7933505; AAACTGAGGAAAATGCTTGC, CATTGCCGTTGAACTTTTGA; 65°С; ПДРФ; NlaIII.
5. ДДР2; рс1800497; CTTGCCCTCTAGGAAGGACAT, ACCTTCCTGAGTGTCATCAACC; 65°С; ПДРФ; ТакИ.
6. ГНБ3; рс5443; CATCACTGCGGCATCACG, ACGCTCAGACTTCATGGAGT; 60°С; УЧР; /.
7. СЛК6А4; ВНТР; GGGCAATGTCTGGCGCTTCCCCTACATA, TTCTGGCCTCTCAAGAGGACCTACAGC; 65,5 °С; ПЦР; /.

Статистический анализ Данные анализировали с использованием программного пакета IBM SPSS Statistics (IMB Inc., Армонк, Нью-Йорк). P ≤ 0,05 считали статистически значимым.

Сравнение доли травмированных и подвергшихся жестокому обращению подростков в клинической выборке и в исходной контрольной группе было проведено с помощью точного критерия Фишера. Все непрерывные переменные сначала оценивались на нормальность с помощью критерия нормальности Колмогорова-Смирнова. Корреляцию между возрастом начала NSSI и общим количеством NSSI в жизни определяли с помощью корреляции Спирмена. Взаимосвязь между общим числом самоповреждений (NSSI) в жизни и значением опросника SICQ также была оценена с использованием корреляционного анализа Спирмена. Взаимосвязь значения опросника SICQ и времени, которое проходит от мысли о NSSI до NSSI, а также генотипа и общего количества NSSI в жизни оценивали с помощью H-критерия Крускала-Уоллиса. U-критерий Манна-Уитни использовался для определения взаимосвязи между генотипом и возрастом в начале NSSI. Были созданы различные модели логистической регрессии с параметрами опросника ETISR-SF / BIS-11 / MSI - BPD / STAI STETE / STAI TRAIT и генотипами-кандидатами в качестве независимых переменных и NSSI в качестве зависимой переменной. Нескорректированные анализы самого генотипа rs1799971/rs1800497 и переменной тяги проводились с использованием U-критерия Манна-Уитни. Вклад генотипа rs1799971/rs1800497 в уровень влечения к NSSI (SICQ) изучали с помощью обобщенных линейных моделей и корректировали на STAI STATE и STAI TRAIT/ETISR - SF. Были созданы модели логистической регрессии с генотипами-кандидатами в качестве независимых переменных и восприятием боли во время NSSI в качестве зависимой переменной. Вклад генотипа rs1799971 / rs1800497 в восприятие боли был изучен с использованием моделей логистической регрессии, которые были скорректированы на STAI STATE / STAI TRAIT / MSI - BPD / ETISR - SF. Взаимосвязь между восприятием боли при NSSI и тягой (SICQ) оценивали с помощью U-критерия Манна-Уитни.

Цель исследования и гипотезы Цель исследования состояла в том, чтобы провести первое исследование G x E по этиологии NSSI, диагностированного с помощью предложенных критериев исследования из DSM-5, у словенских подростков. Исследователи хотели провести первое исследование ассоциации rs1799971 у подростков с NSSI и изучить связь гена OPRM1 с аддиктивными свойствами NSSI и тягой к NSSI. Также целью было воспроизвести результаты Джойса и его коллег (ассоциация rs5443 и NSSI у пациентов с депрессией) на выборке подростков с NSSI.

Исследователи выдвинули гипотезу, что NSSI может быть связан с одним из полиморфизмов-кандидатов или комбинацией полиморфизмов-кандидатов. Кроме того, исследователи выдвинули гипотезу о том, что генетические полиморфизмы, связанные с NSSI, наиболее связаны с NSSI у травмированных людей и что NSSI связан с более высокой импульсивностью.