Genetik för självskadebeteende

Teoretisk bakgrund Etiologin av Nonsuicidal Self-Injury (NSSI) har fortfarande inte förklarats. Studier som hittills genomförts tyder på både genetiska och miljömässiga faktorer. Det har föreslagits att NSSI är en polygen sjukdom. Två neurotransmittorsystem, det serotonerga systemet och det endogena opioidsystemet, är de viktigaste kandidatsystemen i etiologin för NSSI.

Serotoninsystemet är viktigt vid komorbida störningar av NSSI (depression, ångest...). Det finns också en växande betydelse av dess direkta engagemang i NSSI. Brist på tryptofan, en prekursor för serotonin, har kopplats till ökande frekvens av NSSI. Variabelt antal tandemupprepningspolymorfism av serotonintransportörgenen - SLC6A4 (VNTR STin2) har associerats med borderline personlighetsstörning, en störning med frekvent NSSI, i en studie. Det är några viktiga polymorfismer av genen för tryptofanhydroxylasenzymet, huvudenzymet i syntesen av serotonin. Polymorfismen rs1799913 har associerats med depression och parasuicidalt beteende. Denna polymorfism är, tillsammans med några andra polymorfismer (t.ex. rs4537731, rs7933505), en del av en haplotyp. Denna haplotyp har redan visat vissa samband med borderline personlighetsstörning.

Det finns också växande bevis för att förändringar i koncentrationen av endogena opioider (EO) kan vara associerade med NSSI. Signifikant lägre β-endorfin- och met-enkefalinvärden i vätskan hos individer med NSSI hade påvisats. En nyligen genomförd studie har visat signifikant lägre basala β-endorfinnivåer hos ungdomar med NSSI, jämfört med friska kontroller. Naomi I. Eisenberger är ledande inom studier av polymorfismer av endogena opioider i samband med "emotionell" smärta. Personer med en lägre tröskel för fysisk smärta beskrev också en större känslighet för känslomässig smärta. Det finns många bevis på den signifikanta effekten av polymorfismen av genen för mu-opioidreceptorn OPRM1 (A118G; rs1799971) på förändrad känslighet för fysisk smärta, smärtuppfattning och svar på opiat-analgetika. En signifikant ökad känslighet hos G-allelbärare för social avstötning (dvs på en modell för "emotionell" smärta) har visats. Ett antal studier har utförts på effekten av rs1799971 polymorfism på begär och beroende. Med tanke på den teoretiska beroendeframkallande bakgrunden för NSSI och kopplingen mellan fysisk och emotionell smärta och rollen av rs1799971 polymorfism, är denna polymorfism en viktig kandidatpolymorfism i NSSI. För individuella missbruk uppstår olika, delvis motstridiga resultat. Olika studier har bekräftat G-allelen som en riskfaktor för olika beroenden, medan andra inte har visat någon påverkan eller har funnit en minskad risk för beroende hos G-allelbärare. Sålunda, 2016, genomfördes den första samarbetsanalysen där 9064 försökspersoner av den kaukasiska befolkningen inkluderades. I detta stora europeiska prov visade sig G-allelen vara en signifikant (OR = 0,90; konfidensintervall 95 % (0,83 - 0,97); p = 0,0095) skyddande faktor för beroende i allmänhet. Direkta studier av craving och effekten av rs1799971 på craving är sällsynta och motsägelsefulla. Det har gjorts lite forskning om potentiella genetiska influenser på utvecklingen av NSSI och rs1799971 verkar inte ha studerats inom detta område.

Huvudmålet för antipsykotika, dopaminreceptorn D2, är också viktigt i forskningen om beroende. Den mest kända polymorfismen av dopaminreceptor 2-genen är Taq1A (TaqIA) (rs1800497) polymorfism. Två alleler av rs1800497 är kända - A1 och A2. Allel A1 har associerats med patologiskt spelande, ett typiskt beteendeberoende, i en studie. Det har också associerats med impulsivitet och beroendeframkallande beteende i vissa andra studier. A1-allelen har också associerats med borderline personlighetsdrag. G-proteiner har kopplats till den korrekta aktiviteten hos många receptorer. Polymorfismen C825T (rs5443) av G-protein beta 3-genen (GNbeta3) har i viss forskning kopplats samman med depression. I en studie hade T-allelbärarna en statistiskt högre risk för NSSI som andra depressiva patienter.

Minskad smärtuppfattning och en högre smärttröskel hos personer med NSSI har visats.

Godkännande av etikkommittén och projektregistrering Studien har godkänts av den medicinska etiska kommittén i Republiken Slovenien (nummer 69/06/13). Det har valts ut och registrerats som ett internt vetenskapligt forsknings- och utvecklingsprojekt vid University Medical Center Maribor, Slovenien, den 1.8.2013 (projektnummer IRP-2013/01-07).

Frågeformulär Alla ungdomar från det kliniska urvalet och den ursprungliga kontrollgruppen fyllde i den slovenska versionen av enkäten för självutvärdering av State-Trait Anxiety Inventory for Adults (STAI) och följande frågeformulär, översatta till slovenska: Barratt Impulsiveness Scale (BIS- 11), MacLean Screening Instrument for BPD (MSI-BPD), Early Trauma Inventory Self Report-Short Form (ETISR-SF). STAI mäter två former av ångest. "Statsångest" mäter det aktuella tillståndet, det vill säga graden av ångest som individen känner vid en given händelse. "Teckenångest" syftar på individens långsiktiga tillstånd. BIS-11 är förmodligen det mest använda instrumentet för mätning av impulsivitet. MSI-BPD är ett screeningformulär som används för att söka efter borderline personlighetsstörning i tonåren. ETISR-SF mäter barndomstrauman, inklusive fysiska, emotionella och sexuella övergrepp, såväl som allmänna traumatiska händelser.

För att identifiera NSSI använde utredarna den slovenska översättningen av Inventory of Statements about Self-Injury (ISAS) och den slovenska översättningen av Self-Injury Craving Questionnaire (SICQ) för det kliniska provet. ISAS är ett frågeformulär som består av två delar. Den första delen består av 12 frågor om självskadebeteende och den andra delen av frågor om 13 funktioner hos NSSI. SICQ innehåller 7 frågor om suget efter NSSI.

DNA-extraktion och genotypning Det finns lite forskning om genetik för NSSI. Några kandidater för genetiska polymorfismer hade valts ut med hjälp av denna information. Till övervägande del har de kandidatgenetiska polymorfismerna i studien därför valts med hjälp av information om genetik för beroende och komorbida störningar (depression, borderline personlighetsstörning, …).

DNA för genotypning extraherades från perifera mononukleära blodceller med användning av TRI-reagens (Sigma, Steinheim, Tyskland) enligt tillverkarens instruktioner. Kvalitet och koncentration av extraherat DNA kontrollerades med hjälp av agarosgelelektrofores och SynergyTM 2 (Biotek, Winooski, VT, USA) spektrofotometer.

För genotypning av polymorfismerna utförde utredarna först realtidspolymeraskedjereaktionen (qPCR) och sedan högupplösningssmältningen (HRM) eller restriktionsfragmentlängdspolymorfismen (RFLP). qPCR utfördes enligt följande: denaturering vid 95 °C i 10 minuter, multiplikation, 45 cykler med 95 °C 10 s, 60 °C 15 s, 72 °C 10 s. HRM har gjorts enligt följande protokoll: 95 °C 1 min, 40 °C 1 min, 60 - 90 °C vid 0,02 °C/s och kylning vid 40 °C i 10 s. HRM-reaktionen har gjorts med LightCycler® 480 (Roche) och LC480 HRM Master Mix (Roche) har använts. Utredarna har analyserat genotyperna från smältkurvorna (TABELL 1). I RFLP-protokollet har produkten från qPCR inkuberats med rätt restriktionsenzym från New England Biolabs (TABELL 1). Analys har gjorts med agarosgelelektrofores (2 % agarosgel, trisborat EDTA-buffert). DNA-proverna blandades med 0,25 % xylencyanol och 40 % sackaros. Elektrofores har körts vid 150 V i 20 minuter. I slutet har agarosgelen analyserats under UV-ljus.

Gen; genetisk polymorfism; sekvens av primern; temperatur; genotypningsmetod; restriktionsenzym:

1. OPRM1; rs1799971; CGGTTCCTGGGTCAACTTGT, GATCGTGATGGCCGTGAT; 60°C; HRM; /.
2. TPH1; rs4537731; GTTTCATGCAGGTATTAGTG, TGGCATTGAAGTAAGAGCAC; 60°C; RFLP; Sau3AI.
3. TPH1; rs1799913; GTTAGCACTGCAGCGTGAC, AAGCGGGACATGACCTAAGA; 60°C; HRM; /.
4. TPH1; rs7933505; AAACTGAGAGGAAAATGCTTGC, CATTGCCGTTGAACTTTTGA; 65°C; RFLP; NlaIII.
5. DRD2; rs1800497; CTTGCCCTCTAGGAAGGACAT, ACCTTCCTGAGTGTCATCAACC; 65°C; RFLP; TaqI.
6. GNB3; rs5443; CATCATCTGCGGCATCACG, ACGCTCAGACTTCATGGAGT; 60°C; HRM; /.
7. SLC6A4; VNTR; GGGCAATGTCTGGCGCTTCCCCTACATA, TTCTGGCCTCTCAAGAGGACCTACAGC; 65,5°C; PCR; /.

Statistisk analys Data analyserades med IBM SPSS Statistics programpaket (IMB Inc., Armonk, New York). P ≤ 0,05 ansågs vara statistiskt signifikant.

Jämförelsen av andelen traumatiserade och misshandlade ungdomar i det kliniska urvalet och i den ursprungliga kontrollgruppen har gjorts med Fishers exakta test. Alla kontinuerliga variabler utvärderades först för normaliteten med Kolmogorov-Smirnovs normalitetstest. Korrelation mellan åldern vid början av NSSI och det totala antalet NSSI i livet bestämdes med Spearmans korrelation. Sambandet mellan det totala antalet självskador (NSSI) i livet och värdet på SICQ-enkäten har också bedömts med hjälp av Spearmans korrelationsanalys. Sambandet mellan värdet av SICQ-enkäten och tiden som går från tanken på NSSI till NSSI och även genotyp och det totala antalet NSSI i livet båda har bedömts med Kruskal-Wallis H-test. Mann-Whitneys U-test hade använts för att fastställa sambandet mellan genotyp och åldern vid början av NSSI. Olika logistiska regressionsmodeller med parametrar för ETISR-SF frågeformuläret / BIS-11 / MSI - BPD / STAI STETE / STAI TRAIT och kandidatgenotyperna som oberoende variabler och NSSI som beroende variabel har gjorts. Ojusterade analyser av själva genotypen rs1799971 / rs1800497 och sugvariabeln utfördes med Mann-Whitney U-test. Bidraget från genotypen rs1799971 / rs1800497 till nivån av sug efter NSSI (SICQ) studerades med hjälp av generaliserade linjära modeller och justerades till STAI STATE och STAI TRAIT / ETISR - SF. Logistiska regressionsmodeller med kandidatgenotyper som oberoende variabler och smärtperception under NSSI som beroende variabel har gjorts. Bidraget från genotypen rs1799971 / rs1800497 till smärtuppfattning har studerats med hjälp av logistiska regressionsmodeller som justerades till STAI STATE / STAI TRAIT / MSI - BPD/ETISR - SF. Sambandet mellan smärtuppfattning under NSSI och craving (SICQ) bedömdes med Mann-Whitney U-test.

Syftet med studien och hypoteserna Syftet med forskningen var att utföra den första G x E-studien om etiologin för NSSI, diagnostiserad med de föreslagna forskningskriterierna från DSM-5, på slovenska ungdomar. Utredarna ville göra den första associationsstudien av rs1799971 hos ungdomar med NSSI och studera kopplingen av OPRM1-genen med beroendeframkallande egenskaper hos NSSI och sug efter NSSI. Målet var också att replikera resultaten från Joyce och hans högskolor (association av rs5443 och NSSI hos depressiva patienter) i ett urval av ungdomar med NSSI.

Utredarna har antagit att NSSI skulle kunna associeras med en av kandidatpolymorfismerna eller en kombination av kandidatpolymorfismer. Vidare har utredarna antagit att de genetiska polymorfismerna associerade med NSSI är de mest kopplade till NSSI hos traumatiserade individer och att NSSI är associerad med högre impulsivitet.