自伤行为的遗传学

理论背景 非自杀性自伤 (NSSI) 的病因仍未得到解释。 迄今为止进行的研究表明遗传和环境因素。 有人提出，NSSI 是一种多基因疾病。 两种神经递质系统，血清素能系统和内源性阿片样物质系统，是 NSSI 病因学中的主要候选系统。

血清素系统在 NSSI 的合并症（抑郁、焦虑……）中很重要。 它直接参与 NSSI 的重要性也越来越大。 血清素前体色氨酸的缺乏与 NSSI 频率的增加有关。 在一项研究中，5-羟色胺转运蛋白基因 SLC6A4 (VNTR STin2) 的可变数目串联重复多态性与边缘型人格障碍相关，这是一种频繁出现 NSSI 的障碍。 这些是色氨酸羟化酶基因的一些重要多态性，色氨酸羟化酶是血清素合成中的主要酶。 多态性 rs1799913 与抑郁症和准自杀行为有关。 这种多态性与其他一些多态性（例如 rs4537731, rs7933505), 单倍型的一部分。 这种单倍型已经显示出与边缘性人格障碍的某些联系。

越来越多的证据表明，内源性阿片类药物 (EO) 浓度的变化可能与 NSSI 有关。 已证明患有 NSSI 的个体酒中的 β-内啡肽和甲氧脑啡肽值显着降低。 最近的一项研究表明，与健康对照组相比，NSSI 青少年的基础 β-内啡肽水平显着降低。 Naomi I. Eisenberger 是研究内源性阿片类药物多态性与“情绪”疼痛的领导者。 身体疼痛阈值较低的人也描述了对情绪疼痛的敏感性更高。 有大量证据表明 mu-阿片受体 OPRM1（A118G；rs1799971）基因多态性对改变对身体疼痛的敏感性、痛觉和对阿片类镇痛药的反应具有显着影响。 已经证明 G 等位基因携带者对社会排斥（即在“情绪”痛苦的模型上）的敏感性显着增加。 已经对 rs1799971 多态性对渴望和成瘾的影响进行了大量研究。 鉴于 NSSI 的理论成瘾背景以及身体和情感痛苦的相互联系以及 rs1799971 多态性的作用，该多态性是 NSSI 中重要的候选多态性。 对于个人成瘾，会出现不同的、部分相互矛盾的结果。 各种研究已经证实 G 等位基因是各种成瘾的危险因素，而其他研究则没有证明任何影响或发现 G 等位基因携带者成瘾的风险降低。 因此，在 2016 年，进行了第一次协作分析，其中包括 9064 名白种人受试者。 在这个大型欧洲样本中，G 等位基因被证明是一般成瘾的重要（OR = 0.90；置信区间 95% (0.83 - 0.97)；p = 0.0095）保护因素。 对渴望和 rs1799971 对渴望的影响的直接研究很少见且相互矛盾。 关于 NSSI 发展的潜在遗传影响的研究很少，并且 rs1799971 似乎没有在该领域进行过研究。

抗精神病药的主要靶点多巴胺受体 D2 在成瘾研究中也很重要。 多巴胺受体 2 基因最著名的多态性是 Taq1A (TaqIA) (rs1800497) 多态性。 已知 rs1800497 的两个等位基因 - A1 和 A2。 在一项研究中，等位基因 A1 与病态赌博有关，这是一种典型的行为成瘾。 在其他一些研究中，它也与冲动和成瘾行为有关。 A1 等位基因也与边缘人格特征有关。 G-蛋白与许多受体的正常活性有关。 G 蛋白 beta 3 基因 (GNbeta3) 的多态性 C825T (rs5443) 在一些研究中与抑郁症有关。 在一项研究中，与其他抑郁症患者相比，T 等位基因携带者患 NSSI 的风险在统计学上更高。

已显示 NSSI 患者的痛觉减弱和痛阈升高。

伦理委员会批准和项目注册 该研究已获得斯洛文尼亚共和国医学伦理委员会批准（编号 69/06/13）。 它已于 2013 年 8 月 1 日被选为斯洛文尼亚马里博尔大学医学中心的内部科学研究和开发项目（项目编号 IRP-2013/01-07）。

问卷 所有来自临床样本和原始对照组的青少年都填写了斯洛文尼亚版的成人状态-特质焦虑量表 (STAI) 自我评估问卷和以下问卷，翻译成斯洛文尼亚语：Barratt 冲动量表 (BIS- 11), MacLean BPD 筛查仪 (MSI-BPD), 早期创伤清单自我报告简表 (ETISR-SF)。 STAI 测量两种形式的焦虑。 “状态焦虑”衡量当前状态，即个人在特定事件中感受到的焦虑程度。 “特质焦虑”指的是个体的长期状态。 BIS-11 可能是最常用的脉冲测量仪器。 MSI-BPD 是一种用于寻找青春期边缘型人格障碍的筛查问卷。 ETISR-SF 衡量童年创伤，包括身体、情感和性虐待，以及一般创伤事件。

为了识别 NSSI，研究人员对临床样本使用了自伤陈述清单 (ISAS) 的斯洛文尼亚语翻译和自伤渴望问卷 (SICQ) 的斯洛文尼亚语翻译。 ISAS 是一份问卷，由两部分组成。 第一部分包括关于自伤行为的 12 个问题，第二部分包括关于 NSSI 的 13 个功能的问题。 SICQ 包含 7 个关于对 NSSI 的渴望的问题。

DNA提取与基因分型 NSSI的遗传学研究较少。 一些候选遗传多态性已在这些信息的帮助下被选择出来。 因此，主要是在有关成瘾和合并症（抑郁症、边缘性人格障碍等）遗传学信息的帮助下，选择了研究中的候选遗传多态性。

根据制造商的说明，使用 TRI 试剂（Sigma，Steinheim，Germany）从外周血单核细胞中提取用于基因分型的 DNA。 使用琼脂糖凝胶电泳和 SynergyTM 2（Biotek，Winooski，VT，美国）分光光度计检查提取的 DNA 的质量和浓度。

对于多态性的基因分型，研究人员首先进行了实时聚合酶链反应（qPCR），然后进行了高分辨率熔解（HRM）或限制性片段长度多态性（RFLP）方法。 qPCR进行如下：95℃变性10分钟，倍增，45个循环95℃10秒，60℃15秒，72℃10秒。 HRM 已按照以下协议进行：95°C 1 分钟、40°C 1 分钟、60 - 90°C 以 0.02 °C/s 和在 40°C 冷却 10 s。 HRM 反应已使用 LightCycler® 480 (Roche) 进行，并使用了 LC480 HRM Master Mix (Roche)。 研究人员分析了来自熔解曲线的基因型（表 1）。 在 RFLP 协议中，qPCR 的产物已与 New England Biolabs 的正确限制酶一起孵育（表 1）。 已用琼脂糖凝胶电泳（2% 琼脂糖凝胶，三硼酸盐 EDTA 缓冲液）进行分析。 将 DNA 样品与 0.25% 二甲苯氰和 40% 蔗糖混合。 电泳已在 150 V 下运行 20 分钟。 最后，琼脂糖凝胶在紫外光下进行了分析。

基因;遗传多态性；引物序列；温度;基因分型方法；限制酶：

1. OPRM1； rs1799971； CGGTTCCTGGGTCAACTTGT、GATCGTGATGGCCGTGAT； 60℃；人力资源管理； /.
2. 总石油烃1； rs4537731； GTTTCATGCAGGTATTAGTG，TGGCATTGAAGTAAGGCAC； 60℃； RFLP；秀3AI。
3. 总石油烃1； rs1799913； GTTAAGCACTGCAGCGTGAC，AAGCGGGACATGACCTAAGA； 60℃；人力资源管理； /.
4. 总石油烃1； rs7933505； AAACTGAGAGGAAAATGCTTGC，CATTGCCGTTGAACTTTTGA； 65℃； RFLP； NlaIII。
5. DRD2； rs1800497； CTTGCCCTCTAGGAAGGACAT，ACCTTCCTGAGTGTCATCAACC； 65℃； RFLP； TaqI。
6. GNB3; rs5443； CATCATCTGCGGCATCACG，ACGCTCAGACTTCATGGAGT； 60℃；人力资源管理； /.
7. SLC6A4；录像机； GGGCAATGTCTGGCGCTTCCCTACATA，TTCTGGCCTCTCAAGAGGACCTACAGC； 65.5 摄氏度；聚合酶链反应； /.

统计分析 使用 IBM SPSS Statistics 程序包（IMB Inc., Armonk, New York）分析数据。 P≤0.05被认为具有统计学意义。

临床样本和原始对照组中遭受创伤和虐待的青少年比例的比较是通过 Fisher 精确检验完成的。 首先使用 Kolmogorov-Smirnov 正态性检验评估所有连续变量的正态性。 使用 Spearman 相关性确定 NSSI 发病年龄与生命中 NSSI 总数之间的相关性。 生活中自伤总数 (NSSI) 与 SICQ 问卷值之间的关系也已使用 Spearman 相关分析进行了评估。 SICQ 问卷的价值与从想到 NSSI 到 NSSI 所经过的时间以及基因型和生活中 NSSI 的总数之间的关系已经使用 Kruskal-Wallis H 检验进行了评估。 Mann-Whitney U 检验已用于确定基因型与 NSSI 发病年龄之间的关系。 以ETISR-SF问卷/BIS-11/MSI-BPD/STAI STETE/STAI TRAIT参数和候选基因型为自变量，NSSI为因变量建立了不同的逻辑回归模型。 使用 Mann-Whitney U 检验对 rs1799971 / rs1800497 基因型本身和渴望变量进行未经调整的分析。 使用广义线性模型研究了 rs1799971 / rs1800497 基因型对 NSSI (SICQ) 渴望水平的贡献，并针对 STAI STATE 和 STAI TRAIT / ETISR - SF 进行了调整。建立了以候选基因型为自变量、NSSI期间痛觉为因变量的Logistic回归模型。 rs1799971 / rs1800497 基因型对疼痛感知的贡献已使用逻辑回归模型进行了研究，该模型已调整为 STAI STATE / STAI TRAIT / MSI - BPD / ETISR - SF。 使用 Mann-Whitney U 检验评估 NSSI 期间疼痛感知与渴望 (SICQ) 之间的关系。

研究目的和假设 该研究的目的是在斯洛文尼亚青少年中开展第一个关于 NSSI 病因的 G x E 研究，诊断为 DSM-5 提出的研究标准。 研究人员希望对患有 NSSI 的青少年中的 rs1799971 进行首次关联研究，并研究 OPRM1 基因与 NSSI 成瘾特性和对 NSSI 的渴望之间的联系。 目标还在于在患有 NSSI 的青少年样本中复制 Joyce 及其学院的结果（抑郁症患者中 rs5443 和 NSSI 的关联）。

研究人员假设 NSSI 可能与候选多态性之一或候选多态性的组合有关。 此外，研究人员假设与 NSSI 相关的遗传多态性与受创伤个体的 NSSI 联系最紧密，并且 NSSI 与更高的冲动性相关。