Genética do Comportamento Autolesivo

Fundamento teórico A etiologia da autolesão não suicida (NSSI) ainda não foi explicada. Os estudos realizados até agora indicam fatores genéticos e ambientais. Foi sugerido que a NSSI é um distúrbio poligênico. Dois sistemas de neurotransmissores, o sistema serotonérgico e o sistema opióide endógeno, são os principais sistemas candidatos na etiologia da NSSI.

O sistema da serotonina é importante em distúrbios comórbidos de NSSI (depressão, ansiedade…). Há também uma importância crescente de seu envolvimento direto no INSS. A deficiência de triptofano, um precursor da serotonina, tem sido associada ao aumento da frequência de NSSI. O polimorfismo de repetição em tandem de número variável do gene transportador de serotonina - SLC6A4 (VNTR STin2) foi associado ao transtorno de personalidade limítrofe, um distúrbio com NSSI frequente, em um estudo. Existem alguns polimorfismos importantes do gene da enzima triptofano hidroxilase, principal enzima na síntese da serotonina. O polimorfismo rs1799913 tem sido associado à depressão e ao comportamento parassuicida. Este polimorfismo é, juntamente com alguns outros polimorfismos (por exemplo, rs4537731, rs7933505), uma parte de um haplótipo. Este haplótipo já mostrou algumas conexões com o transtorno de personalidade limítrofe.

Também há evidências crescentes de que as alterações na concentração de opioides endógenos (EO) podem estar associadas à NSSI. Valores significativamente mais baixos de β-endorfina e met-encefalina no licor de indivíduos com NSSI foram demonstrados. Um estudo recente mostrou níveis basais de β-endorfina significativamente mais baixos em adolescentes com NSSI, quando comparados a controles saudáveis. Naomi I. Eisenberger é líder no estudo de polimorfismos de opioides endógenos em conjunto com a dor "emocional". Pessoas com um limiar mais baixo para a dor física também descreveram uma maior sensibilidade à dor emocional. Existem inúmeras evidências do efeito significativo do polimorfismo do gene para o receptor mu-opióide OPRM1 (A118G; rs1799971) na sensibilidade alterada à dor física, percepção da dor e resposta a analgésicos opiáceos. Foi demonstrada uma sensibilidade significativamente aumentada dos portadores do alelo G à rejeição social (ou seja, em um modelo para dor "emocional"). Vários estudos foram realizados sobre o impacto do polimorfismo rs1799971 no desejo e no vício. Dado o histórico viciante teórico da NSSI e a interconexão da dor física e emocional e o papel do polimorfismo rs1799971, esse polimorfismo é um polimorfismo candidato importante na NSSI. Para vícios individuais, aparecem resultados diferentes e parcialmente conflitantes. Vários estudos confirmaram o alelo G como um fator de risco para vários vícios, enquanto outros não demonstraram nenhum impacto ou encontraram um risco reduzido de dependência em portadores do alelo G. Assim, em 2016, foi realizada a primeira análise colaborativa na qual foram incluídos 9.064 sujeitos da população caucasiana. Nesta grande amostra europeia, o alelo G provou ser um fator de proteção significativo (OR = 0,90; intervalo de confiança de 95% (0,83 - 0,97); p = 0,0095) para o vício em geral. Estudos diretos sobre o desejo e o impacto do rs1799971 no desejo são raros e contraditórios. Tem havido pouca pesquisa sobre potenciais influências genéticas no desenvolvimento de NSSI e rs1799971 não parece ter sido estudado neste campo.

O principal alvo dos antipsicóticos, o receptor de dopamina D2, também é importante na pesquisa do vício. O polimorfismo mais famoso do gene do receptor de dopamina 2 é o polimorfismo Taq1A (TaqIA) (rs1800497). Dois alelos de rs1800497 são conhecidos - A1 e A2. O alelo A1 foi associado ao jogo patológico, um vício comportamental típico, em um estudo. Também tem sido associado à impulsividade e comportamento viciante em alguns outros estudos. O alelo A1 também tem sido associado a traços de personalidade borderline. As proteínas G têm sido relacionadas com a atividade adequada de numerosos receptores. O polimorfismo C825T (rs5443) do gene da proteína G beta 3 (GNbeta3) tem sido associado à depressão em algumas pesquisas. Em um estudo, os portadores do alelo T tiveram um risco estatisticamente maior de NSSI do que outros pacientes depressivos.

Foi demonstrada uma percepção diminuída da dor e um limiar de dor mais elevado em pessoas com NSSI.

Aprovação do comitê de ética e registro do projeto O estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética Médica da República da Eslovênia (número 69/06/13). Foi escolhido e registrado como um projeto interno de pesquisa e desenvolvimento científico do University Medical Center Maribor, Eslovênia, em 1.8.2013 (número do projeto IRP-2013/01-07).

Questionários Todos os adolescentes da amostra clínica e do grupo controle original preencheram a versão eslovena do questionário de autoavaliação do State-Trait Anxiety Inventory for Adults (STAI) e os seguintes questionários, traduzidos para o esloveno: Barratt Impulsionness Scale (BIS- 11), Instrumento de Triagem MacLean para BPD (MSI-BPD), Formulário Resumido de Auto-Relatório de Inventário de Trauma Precoce (ETISR-SF). O IDATE mede duas formas de ansiedade. A "ansiedade estado" mede o estado atual, ou seja, o nível de ansiedade que o indivíduo sente diante de um determinado evento. "Ansiedade de traço" refere-se ao estado de longo prazo do indivíduo. O BIS-11 é provavelmente o instrumento mais utilizado para medir a impulsividade. O MSI-BPD é um questionário de triagem usado para pesquisar transtorno de personalidade borderline na adolescência. O ETISR-SF mede o trauma da infância, incluindo abuso físico, emocional e sexual, bem como eventos traumáticos gerais.

Para identificar NSSI, os investigadores usaram a tradução eslovena do Inventory of Statements about Self-Injury (ISAS) e a tradução eslovena do Self-Injury Craving Questionnaire (SICQ) para a amostra clínica. O ISAS é um questionário composto por duas partes. A primeira parte é composta por 12 questões sobre comportamento autolesivo e a segunda parte por questões sobre 13 funções do NSSI. O SICQ contém 7 questões sobre o craving para NSSI.

Extração de DNA e genotipagem Há pouca pesquisa sobre a genética da NSSI. Alguns polimorfismos genéticos candidatos foram escolhidos com a ajuda dessas informações. Predominantemente, os polimorfismos genéticos candidatos no estudo foram escolhidos com a ajuda de informações sobre a genética do vício e transtornos comórbidos (depressão, transtorno de personalidade limítrofe, …).

O DNA para genotipagem foi extraído de células mononucleares do sangue periférico usando o reagente TRI (Sigma, Steinheim, Alemanha) de acordo com as instruções do fabricante. A qualidade e a concentração do DNA extraído foram verificadas usando eletroforese em gel de agarose e espectrofotômetro SynergyTM 2 (Biotek, Winooski, VT, EUA).

Para a genotipagem dos polimorfismos, os pesquisadores primeiro realizaram a reação em cadeia da polimerase em tempo real (qPCR) e depois a fusão de alta resolução (HRM) ou o método de polimorfismo de comprimento de fragmento de restrição (RFLP). A qPCR foi realizada da seguinte forma: desnaturação a 95°C por 10 min, multiplicação, 45 ciclos de 95°C 10 s, 60°C 15 s, 72°C 10 s. O HRM foi feito no seguinte protocolo: 95°C 1 min, 40°C 1 min, 60 - 90°C a 0,02°C/s e resfriamento a 40°C por 10 s. A reação HRM foi feita com o LightCycler® 480 (Roche) e o LC480 HRM Master Mix (Roche) foi usado. Os investigadores analisaram os genótipos das curvas de fusão (TABELA 1). No protocolo RFLP, o produto do qPCR foi incubado com a enzima de restrição correta da New England Biolabs (TABELA 1). A análise foi feita com eletroforese em gel de agarose (gel de agarose a 2%, tampão tris borato EDTA). As amostras de DNA foram misturadas com 0,25% de xileno cianol e 40% de sacarose. A eletroforese foi executada a 150 V por 20 minutos. Ao final, o gel de agarose foi analisado sob luz ultravioleta.

Gene; polimorfismo genético; sequência do iniciador; temperatura; método de genotipagem; enzima de restrição:

1. OPRM1; rs1799971; CGGTTCCTGGGTCAACTTGT, GATCGTGATGGCCGTGAT; 60°C; gestão de recursos humanos; /.
2. TPH1; rs4537731; GTTTCATGCAGGTATTAGTG, TGGCATTGAAGTAAGAGGCAC; 60°C; RFLP; Sau3AI.
3. TPH1; rs1799913; GTTAAGCACTGCAGCGTGAC, AAGCGGGACATGACCTAAGA; 60°C; gestão de recursos humanos; /.
4. TPH1; rs7933505; AAACTGAGAGGAAAATGCTTGC, CATTGCCGTTGAACTTTTGA; 65°C; RFLP; NlaIII.
5. DRD2; rs1800497; CTTGCCCTCTAGGAAGGACAT, ACCTTCCTGAGTGTCATCAACC; 65°C; RFLP; TaqI.
6. GNB3; rs5443; CATCATCTGCGGCATCACG, ACGCTCAGACTTCATGGAGT; 60°C; gestão de recursos humanos; /.
7. SLC6A4; VNTR; GGGCAATGTCTGGCCGCTTCCCCTACATA, TTCTGGCCTCTCAAGAGGACCTACAGC; 65,5 °C; PCR; /.

Análise estatística Os dados foram analisados ​​usando o pacote do programa IBM SPSS Statistics (IMB Inc., Armonk, Nova York). P ≤ 0,05 foi considerado estatisticamente significativo.

A comparação da parcela de adolescentes traumatizados e maltratados na amostra clínica e no grupo controle original foi feita com o teste exato de Fisher. Todas as variáveis ​​contínuas foram primeiro avaliadas quanto à normalidade usando o teste de normalidade de Kolmogorov-Smirnov. A correlação entre a idade de início da NSSI e o número total de NSSI na vida foi determinada pela correlação de Spearman. A relação entre o número total de autolesões (NSSI) na vida e o valor no questionário SICQ também foi avaliada por meio da análise de correlação de Spearman. A relação entre o valor do questionário SICQ e o tempo que decorre desde o pensamento de NSSI para NSSI e também o genótipo e o número total de NSSI na vida foram avaliados usando o teste H de Kruskal-Wallis. O teste U de Mann-Whitney foi usado para determinar a relação entre o genótipo e a idade de início da NSSI. Foram elaborados diferentes modelos de regressão logística com parâmetros do questionário ETISR-SF / BIS-11 / MSI - BPD / STAI STETE / STAI TRAIT e os genótipos candidatos como variáveis ​​independentes e NSSI como variável dependente. Análises não ajustadas do próprio genótipo rs1799971 / rs1800497 e da variável de desejo foram realizadas usando o teste U de Mann-Whitney. A contribuição do genótipo rs1799971 / rs1800497 para o nível de fissura por NSSI (SICQ) foi estudada por meio de modelos lineares generalizados e foi ajustada para STAI STATE e STAI TRAIT / ETISR - SF. Modelos de regressão logística com genótipos candidatos como variáveis ​​independentes e percepção de dor durante NSSI como variável dependente foram feitos. A contribuição do genótipo rs1799971 / rs1800497 para a percepção da dor foi estudada por meio de modelos de regressão logística ajustados para STAI STATE / STAI TRAIT / MSI - BPD / ETISR - SF. A relação entre a percepção da dor durante o NSSI e o desejo (SICQ) foi avaliada por meio do teste U de Mann-Whitney.

Objetivo do estudo e as hipóteses O objetivo da pesquisa foi realizar o primeiro estudo G x E sobre a etiologia da NSSI, diagnosticado com os critérios de pesquisa propostos pelo DSM-5, em adolescentes eslovenos. Os investigadores queriam fazer o primeiro estudo de associação do rs1799971 em adolescentes com NSSI e estudar a conexão do gene OPRM1 com propriedades viciantes de NSSI e desejo por NSSI. O objetivo também foi replicar os resultados de Joyce e seus colegas (associação de rs5443 e NSSI em pacientes depressivos) em uma amostra de adolescentes com NSSI.

Os investigadores levantaram a hipótese de que o NSSI poderia estar associado a um dos polimorfismos candidatos ou a uma combinação de polimorfismos candidatos. Além disso, os investigadores levantaram a hipótese de que os polimorfismos genéticos associados ao NSSI são os mais ligados ao NSSI em indivíduos traumatizados e que o NSSI está associado a maior impulsividade.