Effekten av utvalgte probiotiske bakterier på tarmmikrobiota, stressindikatorer og ernæringsstatus for unge voksne (PROBASTRESS)

Innledning Antall personer som mottar psykiatriske tjenester har økt de siste årene. I Polen har antallet personer med psykiske lidelser i poliklinisk omsorg økt med 150 000 de siste årene, og nådd totalt mer enn 1,2 millioner pasienter. Antall personer som krever psykologisk og psykiatrisk pleie forventes å vokse i løpet av de kommende tiårene. Psykofarmakoterapi som brukes gir ikke alltid de forventede behandlingsresultatene. Som et resultat blir mer og mer oppmerksomhet rettet mot ikke-farmakologiske interaksjoner. De siste årene har det vært en voksende forskningssted for forholdet mellom ernæring og dens innvirkning på den mentale tilstanden til mennesker med psykiske lidelser. Mat- og ernæringsvitenskap, psykodietetikk og nutripsykiatri, blomstrende vitenskapelige felt, får fremtredende rolle. Forskningsresultater indikerer at ernæring og stress-kokeressurser påvirker den enkeltes helse. Rollen til de probiotiske bakteriene Lactobacillus Helveticus og Bifidobacterium longum som en del av det menneskelige mikrobiomet har også blitt studert i denne sfæren, og resultater fra et økende antall papirer bekrefter deres brede spekter av anvendelser og positive effekter på forskjellige helsedomener. Tidligere studier har vist at tilskudd med Bifidobacterium longum eller en sammensatt av dem med andre bakteriestammer som er positivt påvirket, blant annet beinhelsen til postmenopausale kvinner, lindret ubehag i mage -tarmkanalen, redusert opplevd stress og forbedret depresjon, angst og humørsindikatorer i voksne i forskjellige aldre. På den annen side påvirket tilskudd med en sammensatt av flere bakteriestammer, inkludert Lactobacillus Helveticus og Bifidobacterium longum, og reduserte fettmassen hos overvektige og overvektige individer. Probiotisk tilskudd ser ut til å ha et stort potensial for å forbedre helse og livskvalitet, inkludert forebygging og behandling av depressive og angstlidelser og evnen til å takle stress. Likevel er det fortsatt mangel på forskning på dette området, spesielt angående Lactobacillus Helveticus alene og kombinasjonen av Lactobacillus Helveticus og Bifidobacterium Longum -stammer.

Med dette i bakhodet var det planlagt et forskningsprosjekt for å undersøke effekten av både probiotikatilskudd og kostholdskvalitet på et bredt spekter av psykologiske, mikrobiologiske, biokjemiske og kliniske utfall. Studien hadde som mål å evaluere effekten av målrettet tilskudd med en ny sammensetning av probiotiske stammer Lactobacillus Helveticus og Bifidobacterium longum på tarmmikrobiota-sammensetning og kvalitet, stressrelatert neuroendokrine markører, mental helse, opplevd stress, psykosomisk respons som kopierer. Vi antok at tilskudd med probiotiske bakterier i en daglig dose på 3 x 109 CFU, uavhengig av kostholdskvalitet, ville resultere i endringer i tarmmikrobiota mot høyere proporsjoner av gunstige bakterier, redusere stressrelaterte neuroendoksiske markører og intensiteten av opplevd stress og dens psykosomatiske symptomer, og forbedre stresset og forbedre stresset og forbedre stresset og forbedre stresset og forbedre stresset og forbedre stresset og forbedre stresset og forbedre stresset og forbedre stresset og forbedre stresset og forbedre stresset og forbedre stresset og forbedre stresset og forbedre stresset og styrke Tetthet hos friske unge kvinner, sammenlignet med placebo.

Studiedesign og befolkning Denne randomiserte, placebokontrollerte, 2-arm, parallelle, dobbeltblinde intervensjonsforsøket ble utført i noen få bølger fra september 2023 til mars 2024 2023 ved Institutt for menneskelig ernæring og kosthold (Poznań Univrsity of Life Sciences). Hver bølge startet i løpet av høstmånedene og ble fullført i vinterhalvåret. Prøvestørrelsen ble beregnet ved bruk av GPower -programvare (versjon 3.1.9.7, Universität Düsseldorf, Tyskland). Kort fortalt, for å oppdage en betydelig endring i opplevd stressnivå med en tosidig t-test, ble et signifikansnivå på 5%og en statistisk effekt på 80%, en prøvestørrelse på 110 bestemt, med tanke på en frafall på 30%. Opprinnelig ble 120 kvinner påmeldt i denne studien. Dette var bare kvinner i tidlig voksen alder. Kvalitetskriterier for studien inkluderte kvinnelig kjønn, 20-30 år, BMI <30 kg/m2. Eksklusjonskriterier var: diagnostisert kroniske og/eller alvorlige helseforstyrrelser (f.eks. Diabetes, astma, hypertensjon, nyresykdommer), graviditet, tar noen probiotika i 8 uker før påmelding til studieprotokollen, nylig og nåværende antibiotikabehandling, malmbruk av farmasøytisk antidepressiv behandling. Alle deltakerne var friske frivillige som ble fullt ut informert om studiens mål og ga informert samtykke for deltakelse før de gikk inn i studien. Studieprotokollen ble gjennomgått og godkjent av Bioethics Committee of Karol Marcinkowski University of Medical Sciences i Poznan, Polen (tillatelsesnr. 244/23, utstedt 9. mars 2023). Studien er i samsvar med Consort -uttalelsen om randomiserte studier. Alle prosedyrer fulgte retningslinjene for 2013 -erklæringen om Helsingfors og god klinisk praksis.

De påmeldte frivillige ble jevnt, tilfeldig og blindt tildelt enten Intervention (LH+BL) -gruppen, og fikk probiotiske bakterier eller placebo (PLA) -gruppen i 12 ukers tilskudd. Randomisering ble utført av supplementprodusenten med datamaskingenererte koder ved bruk av Research Randomizer (www.randomizer.org). Hele studieprotokollen inkluderte kjennskap og to laboratoriebesøk i Institutt for menneskelig ernæring og kosthold ved baseline og ved slutten av studien (T1, T2; før/etter LH+BL -tilskudd [LH+BL PRE og LH+BL POST] og PLA -tilskudd [PLAPRE og PLAPOST]). Studiens hovedprotokoll inkluderte en vurdering av kostholdsvaner ved T1 -studiebesøket. Målinger av vekt, høyde, kroppssammensetning, bentetthet, stressrespons og stress-kokestrategier, mental helsevurdering samt spytt og avføringsprøvetaking ble utført ved hver av T1- og T2-studiebesøkene. De primære utfallsmålene er mikrobiotasammensetning, opplevd stressintensitet og stressrelaterte nevroendokrine markører (spytt kortisol, spytt DHEA og spytt kortisol: DHEA-forhold, fekal kortisol); De sekundære utfallsmålene er stresstatningsstrategier, psykosomatiske symptomer, følelse av sammenheng, kroppssammensetning og bentetthet). All testing ble utført om morgenen samtidig for deltakeren. Deltakerne erklærte at de ikke hadde introdusert noen endringer i sin livsstil, ernæring eller tilskudd under studieprotokollen og ble utarbeidet for hvert besøk på samme måte. I tillegg ble telefonkontakt opprettholdt i tilfelle manglende overholdelse av protokollen eller gastrointestinale symptomer eller bivirkninger.

Det var 20 frafall fra studieprotokollen. De viktigste årsakene til å droppe ut var antibiotikabehandling under protokollen (n = 10) og seponering av studien uten grunn før det andre besøket (n = 10). Det var 11 frafall i LH+BL og 9 i PLA -gruppene. Til slutt fullførte 100 kvinner (23,5 ± 2,7 år; 61,6 ± 9,4 kg kroppsmasse; 1,67 ± 0,06 m høyde) hele studieprotokollen og ble inkludert i analysene.

Tilskudd I den eksperimentelle prosedyren ble hver deltaker supplert med en kronisk dose på 1 kapsel per dag LH+BL eller PLA i en randomisert, parallell sekvens. Deltakerne ble utstyrt med blisterpakker med LH+BL-kapsler som inneholder 3 x 109 CFU kombinerte frysetørkede probiotiske stammer av de probiotiske bakteriene Bifidobacterium Longum Rosell®-175 og Lactobacillus Helveticus Rosell®-52 (Trade Name: Sanprobi®Sress) Or Pla Paps®-52 (Trade Name: Sanprobi®Sress) Or Pla Capsul®-52 (Trade Name: SanProbi®Sress) Or Pla-kapsler. PLA -kapslene inneholdt bare potetstivelse og magnesiumstearat som fyllstoffer. Kapselskallet besto av hydroksypropylmetylcellulose, og vekten til en enkelt kapsel var 420 mg. Probiotika var i identiske kapsler som PLA og kunne ikke skilles ut ved utseende og smak. LH+BL- og PLA -kapsler ble oppnådd fra SanProbi sp. Z O.O. sp. k., (Szczecin, Polen). Kombinasjonen og konsentrasjonen av probiotika som ble brukt i denne studien var basert på produsentens anbefalinger. Forberedelsene ble administrert til hver deltaker i konvolutter merket med en unik kode. I henhold til den anbefalte blendende prosedyren ble formuleringene utarbeidet på forhånd av produsentens laboratorium, som ikke var direkte involvert i studien. Når det gjelder dobbeltblinding, visste verken forskerne eller deltakerne om LH+BL eller PLA ble administrert. Detaljer om randomisering ble anonymisert og avslørt etter protokollens opphør.

Kosthold og livsstil

Kostholdsdata ble samlet inn ved hjelp av det validerte Kompan® Food Frequency-spørreskjemaet lagt ut på Google Drive-fildelingsplattformen. Spørreskjemaet inkluderte matvarer som ofte ble konsumert av den polske befolkningen, gruppert i 25 matkategorier. Deltakerne ble bedt om å velge hvor ofte de konsumerte hver type mat de siste 12 månedene. Tilgjengelige frekvensresponser ble konvertert i daglige frekvenser og besto av aldri (0 ganger/dag), 1-3 ganger i måneden (0,06 ganger/dag), en gang i uken (0,14 ganger/dag), noen ganger i uken (0,5 ganger/dag), en gang om dagen (1,0 ganger/dag), eller noen ganger en dag (2,0 ganger/dag). Kostholdskvaliteten ble beskrevet av to kostholdskvalitetspoeng: den pro-sunne kostholdsindeksen (PHDI) og den usunne kostholdsindeksen (NHDI). Begge score for kostholdskvalitet ble beregnet som summen av daglige frekvenser (i tider/dag) av forbruk av matvaren. PHDI inkluderte 10 gjenstander som representerer potensielt pro-sunne matvarer (fullkornsbrød, fullkorns frokostblandinger, melk, gjæret melkedrikk, cottage cheese, hvitt kjøtt, fisk, belgfrukter, frukt og grønnsaker) med en total score fra 0-20 ganger/dag. NHDI inkluderte 14 matvarer som representerte potensielt usunn mat (hvitt brød, raffinert korn, hurtigmat, stekt mat, smør, smult, ost, kalde kutt, rødt kjøtt, søtsaker, hermetisk kjøtt, søtede drikker, energidrikker, alkohol) med et total scoreområde 0-28 ganger/dag. Begge poengkvalitetspoengene ble beregnet på nytt for å standardisere det totale poengsummen til 0-100 poeng for hver. Følgende formler ble brukt:

PHDI (i punkter) = (100/20) × sum av frekvensen av forbruk av 10 matvarer (tider/dag) NHDI (i poeng) = (100/28) × sum av frekvensen av forbruk av 14 matvarer (tider/dag) estimert livsstilsatferd inkluderte frekvens.

Kroppsmasse og kroppssammensetningsvurdering Antropometriske målinger ble tatt i begynnelsen av hvert studiebesøk for å sikre like forhold for testprosedyrene. Før kroppssammensetningsanalyse ble vekt og høyde målt til nærmeste 0,1 cm og 0,1 kg, for henholdsvis høyde og vekt ved bruk av en kalibrert skala med et stadiometer (WB3007311, Tanita Corporation, Japan) og kroppsmasseindeks (BMI) ble beregnet. Kroppssammensetningsanalyse (FM og FFM) ble utført ved både røntgenabsabsorptiometri med dobbel energi (GE Lunar Prodigy Device-General Electrics Healthcare Medical Systems, Europe, Belgia) og Displacement Plethysmography ved bruk av BOD POD (Life Måling Inc., Concord, CA, USA). Alle målinger ble utført om morgenen (7: 30-10: 00 am) og mens faste (vanninntak ble anbefalt), med omgivelsestemperaturen holdt ved 20-22 ° C. Alle deltakerne unngikk anstrengende trening i minst 24 timer før hvert besøk.

Benmineraltetthetsmålinger Alle deltakere gjennomgikk dobbeltenergi røntgenabsorptiometri (DXA) av den samme teknikeren ved bruk av et GE Lunar Prodigy Densitometer (General Electrics Healthcare Medical Systems, Europa, Belgia). Den effektive dosen (μSV) for dette densitometeret er 0,05. Parametere oppnådd fra målingen inkluderte benmineralinnhold (BMC, G) og benmineraltetthet (BMD, G/cm2). BMD Z-score ble generert ved bruk av kjønns-, ras- og aldersspesifikk normativ DXA-databaseprogramvare ENCO. International Society for Clinical Densitometry (ISCD) -standarder anbefaler bruk av Z-score for å vurdere BMD hos premenopausale kvinner. Benmineraltetthet (BMD) ble sammenlignet med friske unge kvinner ved hver måling (lumbal ryggrad, total hofte, lårhals, radius) og en T-poengsum ble beregnet. I henhold til definisjonen av Verdens helseorganisasjon er osteoporose indikert med en T -poengsum mindre enn -2,5 SD, og ​​osteopeni av en T -poengsum mellom -1 og -2,5 SD. Benparametere ble målt i henhold til den vedtatte densitometri -metodikken og International Society for Clinical Densitometry -anbefalinger. Et standard kvalitetskontrollprogram ble brukt, som inkluderte å sjekke DXA -utstyret for å verifisere systemstabilitet og en visuell gjennomgang av alle bilder av en erfaren sensor. Skanneren ble kalibrert daglig som DXA GE Lunar Prodigy -produsenten anbefalte. En standard kalibreringsblokk ble brukt. Studien ble utført av et team med de nødvendige sertifiseringene for å utføre perifer og aksial densitometri og erfaring innen densitometri.

Spyttsamling og prøveanalyse Stressrelaterte nevroendokrine markører, nemlig spytt kortisol og DHEA, vil bli målt, så vel som kortisol: DHEA-forholdet. Før spyttsamling i laboratoriet ble deltakerne instruert om å avstå fra å konsumere koffein og/eller nikotin i minst 4 timer og alkohol i minst 24 timer. Ustimulerte spyttprøver ble samlet fra fastende deltakere i engangsplastikkrør ved bruk av spytte -metoden i 10 minutter mens forsøkspersonene hvilte. Deltakerne ble først bedt om å skylle munnen med vann i omtrent 30 sekunder og 10 minutter før de ga en spyttprøve. Spytt ble samlet inn mellom 9:00 og 11:00 for å minimere døgnforskjeller. Prøver av materialet (2 rør per person), umiddelbart etter innsamling, ble plassert i en fryser ved -80 ° C og lagret inntil forsendelse til laboratoriet (Sanprobi Research and Development Center i Szczecin). Før analyse vil prøvene bli varmet og sentrifugert ved 1000 x g i 20 minutter for å fjerne partikkelformig materiale. Kortisol og DHEA i humant spytt vil bli målt med kommersielt tilgjengelige sett ved bruk av en immunoenzymatisk metode i henhold til produsentens instruksjoner. Alle prøver vil bli behandlet i duplikat under den samme analysen. Statistiske analyser vil bli utført ved bruk av gjennomsnittet av de to replikatmålingene. Rå verdier vil bli loggtransformert, og observasjoner større enn tre SD-er fra gjennomsnittet for hver prøvetakingstid vil bli ekskludert.

Fekal prøveinnsamling og mikrobiota og kortisolanalyse Fekal prøvetaking ble utført som følger: avføring ble samlet hjemme på ankomstdagen til laboratoriet eller dagen før, avkjølt umiddelbart etter avføring i testemnets kjøleskap og overført til laboratoriet. Prøver ble lagret ved -80 ◦C inntil analyse. Analyse av tarmen mikrobiota vil bli utført i SanProbi Research and Development Center Laboratory i Szczecin ved bruk av Illumina neste generasjons sekvenseringsteknologi. DNA -ekstraksjon fra fekalprøven vil bli utført ved bruk av kommersielt tilgjengelige isolasjonssett, etterfulgt av en vurdering av kvaliteten (integriteten) til isolatet. Neste trinn er DNA -amplifisering ved PCR ved bruk av spesifikke primere komplementære til konserverte gensekvenser på hver side av målregionen. V2- og V3-hypervariable fragmentene i regionen, som består av omtrent 400-500 basepar av det prokaryote 16S RRN-genet, er duplisert. Amplikonene fra hver prøve er strekkodet med en kort "strekkode" -sekvens som er unik for hver prøve. Til slutt utføres "multiplekset" sekvensering av alle prøver med høy gjennomstrømning i en enkelt sekvenseringskjøring.

Fekalprøver for kortisolanalyse vil bli varmet og fortynnet med vann, og den påfølgende prosedyren er den samme som for spyttprøver utarbeidet for kortisolanalyse, som beskrevet ovenfor.

Personlighetsdimensjoner TIPI-skalaen for ti elementer personlighetsbeholdning (TIPI) er et validert 10-element selvadministrert spørreskjema designet for å evaluere de psykososiale faktorene. TIPI ble designet av Gosling et al. som et kort instrument for å måle de store fem personlighetsdimensjonene med to elementer for hver egenskap (et standard element og et omvendt scoret element i hver egenskap). Disse personlighetsdimensjonene omfatter ekstraversjon (å være sosial, entusiastisk), behagelighet (pålitelighet, å være empatisk), samvittighetsfullhet (selvdisiplin, pålitelighet, egeneffektivitet), emosjonell stabilitet (den motsatte dimensjonen til nevrotisisme; å være balansert, rolig, evne til å forbli stabil) og åpenhet (kurisk kreativhet og skape muligheten til å forbli stabil) og åpenhet (kalii-kreativitet og skape og rolig, evnen til å forbli stabilitet) og åpenhet ( Svarene i personlighetsskalaen ble målt på en syv-punkts Likert-skala og scoret som 1 = sterkt uenig, 2 = uenig moderat, 3 = uenig litt, 4 = verken enig eller uenig, 5 = Enig litt, 6 = Enig moderat, 7 = enig sterkt. Svar på omvendt-scorede elementer ble kodet for å være i samsvar med standardartikler. Deretter ble gjennomsnittet av standardvaren og den omskodede omvendte-scorede varen beregnet for å utgjøre hver dimensjons skala-poengsum, som varierte fra 1 til 7. Høyere skala-score gjenspeiler et høyere nivå av hver egenskap.

Hver TIPI-skala-poengsum ble kategorisert etter den konseptuelle tilnærmingen, som delte skalaen i henhold til om score var lik å være "enig" eller høyere (i gjennomsnitt) for å lage to kategorier: lavere tipi (<5 som uenige) og høyere TIPI-kategorier (5-7 som enig). Enhver dimensjonsskala som produserte enige og høyere score indikerte et høyere nivå av den egenskapen og ble betraktet som en høyere TIPI -kategori. Dette spørreskjemaets interne pålitelighet med en Cronbachs alfa -verdi var 0,59. TIPI -spørreskjemaet ble administrert bare en gang under det første T1 -besøket.

Opplevd stress og mental helsevurdering Vi samlet 5 egenrapport (SUB) skalaer relatert til brede domener av opplevd stress og fysisk/mental helse: opplevd stressskala (PSS-10), korte mestringsorienteringer til problemer opplevd lager (kort cope), følelse av koherens 13-item skala (Soc-13), generell helse spørreskjema ghq-28, og ti elements personlighet (Soc-13), Alle tester (i en standardisert polsk versjon) var basert på spørreskjemaer om egenvurdering som ble lagt ut på Google Drive-fildelingsplattformen.

PSS-10-formen ble brukt for å vurdere intensiteten av stress relatert til ens egne livserfaringer den siste måneden og var en modifisert versjon av den opplevde stressskalaen utviklet av Cohen. Respondentene rapporterte på en 5-punkts Likert-skala (0 = aldri, 1 = nesten aldri, 2 = noen ganger, 3 = ganske ofte, 4 = veldig ofte) i hvilken grad situasjoner i livet i løpet av den siste måneden var uforutsigbare, ukontrollerbare og overveldende. Resultatene for de fire positivt identifiserte elementene (elementene 4, 5, 7, 8) blir omgjort. Maksimal poengsum er 40, med høyere score som indikerer høyere nivåer av opplevd stress. I henhold til instruksjonene indikerer score i området 0-13 et lavt stressnivå, score i området 14-26 indikerer et moderat nivå av stress, og score i området 27-40 indikerer et høyt nivå av opplevd stress. I denne studien hadde skalaen en Cronbachs alfa (α) på 0,85. Poengene på skalaen ble sammenlignet mellom de første og endelige vurderingene.

The Brief Cope er en forkortet 28-punkts versjon av Cope Inventory-spørreskjemaet av Carver et al. og ble brukt til å vurdere situasjonsmessige mestringsstrategier (måter folk takler en spesifikk stressende hendelse) og disposisjonelle mestringsstrategier (vanlige måter folk takler stress i hverdagen). I sin opprinnelige versjon avslørte denne varelageret tilstrekkelige nivåer av intern konsistens, i tillegg til å vise bevis på gyldigheten av dens faktorstruktur. Vi brukte mini-cope, den forkortede polske versjonen av COPE Inventory-spørreskjemaet. Skalaen måler 14 teoretisk eller empirisk grunnlagte mestringsstrategier (mestring av underskalaer, hver med to elementer): selvdistraksjon, aktiv mestring, fornektelse, stoffbruk, emosjonell støtte, instrumentell støtte, atferdsrelag, luftering. For hvert element indikerer respondentene om de bruker mestringsresponsen på en fire-punkts Likert-skala (0 = Jeg gjør vanligvis ikke dette nesten i det hele tatt; 1 = Jeg gjør dette sjelden; 2 = Jeg gjør vanligvis dette ofte; 3 = Jeg gjør vanligvis dette nesten alltid).

Disse underskalaene ble fremtidige kategorisert i andreordens faktormodell, som besto av "adaptive mestringsstrategier" (bruk av emosjonell støtte, positiv omforming, aksept, religion, humor, aktiv mestring, planlegging og bruk av instrumentell støtte) og "maladaptiv mestringsstrategier" (ventilasjon, benektelse, rusbruk. Cronbachs alfa for de opprinnelige underskalaene varierte fra 0,66 til 0,70. Den samlede poengsummen for hver mestringsstrategi er summen av poengsummen til to elementer.

Følelsen av koherensskala SOC-13 er en skala på 13 elementer tilpasset fra en lengre skala på 29 elementer utviklet av Antonovsky. Denne skalaen er et spørreskjema for egenrapport og består av tre underskalaer: meningsfullhet (fire elementer), forståelig (fem elementer) og håndterbarhet (fire elementer). Hvert element inneholder svar som endres mellom spørsmål og er rangert fra 1 til 7 på en Likert -skala. Fem variabler (elementene 1, 2, 3, 7 og 10) er negativt formulert og er derfor omvendt kodet når elementene blir summert for å oppnå en totalartikler. SOC ble beregnet som gjennomsnittet for hver enkelt som hadde svart på minst 10 av de 13 varene (rekkevidde, 1,0-7.0) En høyere poengsum representerer en større følelse av sammenheng. Studier av de psykometriske egenskapene til SOC-13-skalaen har vist høye nivåer av gyldighet og pålitelighet, og intern konsistens er veldig bra, med Cronbachs alfas fra 0,70 til 0,92 i de 127 studiene ved bruk av SOC-13. I den nåværende studien varierer pålitelighetsestimater for denne skalaen fra α = 0,77-0,79.

GHQ-28 General Health Questionnaire ble utviklet av Goldberg i 1978. Det er et mål på emosjonell nød de siste ukene som inneholder 28 elementer og kan brukes som et samfunns screeningverktøy og for påvisning av ikke-spesifikke psykiatriske lidelser blant individer i primæromsorg. Deltakerne ble spurt om symptomer og/eller ubehag de nylig hadde opplevd. Hvert element er vurdert på en 4-punkts Likert-skala for å indikere symptomens alvorlighetsgrad fra 0 til 3 (0 = ikke i det hele tatt, 1 = ikke mer enn vanlig, 2 = litt mer enn vanlig, 3 = mye mer enn vanlig). Poeng for de syv positivt identifiserte elementene (elementene 4, 5, 7, 8) er reversert (1 = mer enn vanlig, 2 = som vanlig, 3 = mindre enn vanlig, 4 = mye mindre enn vanlig). Elementer er summert over fire underskalaer: somatiske symptomer (elementer 1-7), angst/søvnløshet (elementer 8-14), sosial dysfunksjon (elementer 15-21) og major depresjon (elementene 22-28). En høy GHQ-28-poengsum indikerer en sannsynlig psykiatrisk sak. Normative data for den generelle befolkningen som er evaluert indikerer et avskjæringspunkt ≥ 5. Påliteligheten ble beregnet ved bruk av Cronbach alfa-koeffisient og var 0,89-0,90.

Sosioøkonomisk status og stressende hendelser Et ekstra spørreskjema ble formulert av forfatterne, inkludert sosioøkonomisk status (SES) (alder, bosted, familiestatus, utdanningsnivå) og spørsmål om eventuelle stressende hendelser (SES) som ble opplevd i løpet av forrige måned.

Statistisk analyse Kontinuerlige variabler presenteres som gjennomsnittlig og standardavvik og variabler fra skalering som medianer og interkvartile områder (25% til 75%). Kategoriske variabler presenteres som frekvenser. Forskjeller mellom kategoriske variabler blir analysert ved Fishers eksakte test. Alle kontinuerlige variabler testes for normalfordeling ved bruk av Shapiro-Wilk-testen, så vel som kurtose, skjevhet og en grafisk evaluering av fordelingen av hver variable data. Prosedyrer for datatransformasjon (f.eks. Boks-Cox-transformasjon) vurderes hvis de resulterer i en normal fordeling av alle transformerte variabler. Sammenligninger mellom tidspunkter for grunnlinje og etterforsyning (T1 og T2-besøk) i LH+BL- eller PLA-gruppene bestemmes ved bruk av t-testen for avhengige variabler og effektstørrelse uttrykt som Cohens d. Sammenligninger mellom grupper i pre-post-endringer innen variabler bestemmes ved bruk av t-testen for uavhengige variabler. Hvis normalitet krenkes, blir data analysert ved bruk av Wilcoxon signert-rank-test med effektstørrelse uttrykt som rangskorrelasjonskoeffisienten (RC). Mann-Whitney U-test brukes til å sammenligne variablene for å teste for forskjeller mellom placebo og prebiotiske grupper. En alfa på <0,05 anses som statistisk signifikant. Data blir analysert ved bruk av Statistica 13.3 -programvare (Statsoft Inc., USA).