L'impatto dei batteri probiotici selezionati sul microbiota intestinale, gli indicatori di stress e lo stato nutrizionale dei giovani adulti (PROBASTRESS)

Introduzione Il numero di persone che ricevono servizi psichiatrici è aumentato negli ultimi anni. In Polonia, il numero di persone con disturbi mentali nelle cure ambulatoriali è aumentato di 150.000 negli ultimi anni, raggiungendo un totale di oltre 1,2 milioni di pazienti. Il numero di persone che richiedono cure psicologiche e psichiatriche dovrebbe crescere nei prossimi decenni. La psicofarmacoterapia utilizzata non produce sempre i risultati del trattamento previsti. Di conseguenza, sempre più attenzione viene prestata alle interazioni non farmacologiche. Negli ultimi anni, c'è stata una crescente corpus di ricerche sulla relazione tra nutrizione e il suo impatto sullo stato mentale delle persone con disturbi mentali. La scienza alimentare e nutrizionale, la psicodietetica e la nutriente, i fiorenti campi scientifici, stanno guadagnando importanza. I risultati della ricerca indicano che le risorse nutrizionali e di rattura dello stress influenzano la salute di un individuo. Il ruolo dei batteri probiotici Lactobacillus helveticus e Bifidobacterium longum come parte del microbioma umano è stato studiato anche in questa sfera e i risultati di un numero crescente di articoli confermano la loro vasta gamma di applicazioni e effetti positivi su vari settori della salute. Precedenti studi hanno dimostrato che l'integrazione con Bifidobacterium longum o un composto di essi con altri ceppi batterici ha influenzato positivamente, tra le altre cose, la salute ossea delle donne in postmenopausa, ha alleviato il disagio gastrointestinale, ridotto lo stress percepito e una migliore depressione, ansia e indicatori dell'umore negli adulti di vari età. D'altra parte, l'integrazione con un composito di diversi ceppi batterici, tra cui Lactobacillus helveticus e Bifidobacterium longum, ha influenzato la riduzione della massa grassa in individui obesi e sovrappeso. L'integrazione probiotica sembra avere un grande potenziale per migliorare la salute e la qualità della vita, tra cui la prevenzione e il trattamento dei disturbi depressivi e d'ansia e la capacità di far fronte allo stress. Tuttavia, c'è ancora una mancanza di ricerche in questo settore, in particolare per quanto riguarda il solo Lactobacillus helveticus e la combinazione di Lactobacillus helveticus e Bifidobacterium Longum.

Con questo in mente, è stato pianificato un progetto di ricerca per studiare gli effetti sia degli integratori probiotici che della qualità dietetica su una vasta gamma di esiti psicologici, microbiologici, biochimici e clinici. Lo studio mirava a valutare gli effetti della supplementazione mirata con una nuova composizione di ceppi probiotici Lactobacillus helveticus e Bifidobacterium longum su composizione e qualità del microbiota intestinale e qualità, le donne neuroendocrine che differiscono nelle donne che si sono differenziate in giovani che hanno percepito la salute della dieta. Abbiamo ipotizzato che la supplementazione con batteri probiotici alla dose giornaliera di 3 x 109 CFU, indipendentemente dalla qualità della dieta, comporterebbe cambiamenti nel microbiota intestinale verso proporzioni più elevate di batteri benefici, riducono il potenziale di salute del corpo e il benefico per il componente. Densità ossea nelle giovani donne sane, rispetto al placebo.

Progettazione dello studio e popolazione Questo studio di intervento randomizzato, controllato con placebo, a 2 bracci, paralleli e in doppio cieco è stato condotto in alcune onde da settembre 2023 a marzo 2024 2023 presso il Dipartimento di nutrizione e dietetica umana (Univrsità di vita di Poznań). Ogni ondata è iniziata durante i mesi autunnali ed è stata completata durante i mesi invernali. La dimensione del campione è stata calcolata utilizzando il software GPower (versione 3.1.9.7, Universität Düsseldorf, Germania). In breve, per rilevare una variazione significativa del livello di stress percepito con un test t a due lati, un livello di significatività del 5%e una potenza statistica dell'80%, è stata determinata una dimensione del campione di 110, considerando un tasso di abbandono del 30%. Inizialmente, 120 donne sono state iscritte in questo studio. Queste erano solo donne alla prima età adulta. I criteri di ammissibilità per lo studio includevano sesso femminile, età 20-30 anni, BMI <30 kg/m2. I criteri di esclusione sono stati: diagnosticati disturbi da salute cronici e/o gravi (ad es. Diabete, asma, ipertensione, malattie renali), gravidanza, assunzione di probiotici per 8 settimane prima dell'iscrizione al protocollo di studio, trattamento antibiotico recente e attuale, uso minerale del trattamento antidepressivo farmaceutico. Tutti i partecipanti erano volontari sani che erano pienamente informati sugli obiettivi dello studio e fornivano il consenso informato per la partecipazione prima di entrare nello studio. Il protocollo di studio è stato rivisto e approvato dal Comitato bioetico dell'Università di scienze mediche di Karol Marcinkowski a Poznan, in Polonia (autorizzazione n. 244/23, emesso il 9 marzo 2023). Lo studio è conforme alla dichiarazione di consorte su studi randomizzati. Tutte le procedure hanno seguito le linee guida della Dichiarazione di Helsinki del 2013 e delle buone pratiche cliniche.

I volontari iscritti sono stati uniformemente, in modo casuale e assegnati alla cieca al gruppo di intervento (LH+BL), ricevendo batteri probiotici o gruppo placebo (PLA) per 12 settimane di integrazione. La randomizzazione è stata condotta dal produttore di supplementi con codici generati dal computer utilizzando la ricerca randomizer (www.randomizer.org). L'intero protocollo di studio includeva la familiarizzazione e due visite di laboratorio presso il Dipartimento di nutrizione umana e dietetica al basale e alla fine dello studio (T1, T2; prima/dopo la supplementazione LH+BL [LH+BL PRE e LH+BL Post] e PLA Supplementazione [Plapre e Plapost]). Il protocollo principale dello studio includeva una valutazione delle abitudini dietetiche durante la visita di studio del T1. Misurazioni di peso, altezza, composizione corporea, densità ossea, risposta allo stress e strategie di rattura dello stress, valutazione della salute mentale, nonché campionamento di saliva e feci in ciascuna delle visite di studio T1 e T2. Le misure di esito primarie sono la composizione del microbiota, l'intensità dello stress percepita e i marcatori neuroendocrini correlati allo stress (cortisolo salivare, DHEA salivare e cortisolo salivare: rapporto DHEA, cortisolo fecale); Le misure di esito secondario sono strategie a razza di stress, sintomi psicosomatici, senso di coerenza, composizione corporea e densità ossea). Tutti i test sono stati eseguiti al mattino contemporaneamente per il partecipante. I partecipanti hanno dichiarato di non aver introdotto alcun cambiamento nel loro stile di vita, nutrizione o integrazione durante il protocollo di studio e sono stati preparati per ogni visita allo stesso modo. Inoltre, il contatto telefonico è stato mantenuto in caso di non conformità con il protocollo o i sintomi gastrointestinali o gli eventi avversi.

Ci sono stati 20 abbandoni dal protocollo di studio. I motivi principali per la caduta erano la terapia antibiotica durante il protocollo (n = 10) e l'interruzione dello studio senza motivo prima della seconda visita (n = 10). Ci sono stati 11 abbandoni nell'LH+BL e 9 nei gruppi PLA. Infine, 100 donne (23,5 ± 2,7 anni; 61,6 ± 9,4 kg di massa corporea; 1,67 ± 0,06 m di altezza) hanno completato l'intero protocollo di studio e sono state incluse nelle analisi.

Supplementazione nella procedura sperimentale, ciascun partecipante è stato integrato con una dose cronica di 1 capsula al giorno di LH+BL o PLA in una sequenza randomizzata e parallela. Participants were provided with blister packs of Lh+Bl capsules containing 3 x 109 CFU of combined freeze-dried probiotic strains of the probiotic bacteria Bifidobacterium longum Rosell®-175 and Lactobacillus Helveticus Rosell®-52 (trade name: Sanprobi®Stress) or PLA capsules containing an isoenergetic product prepared for the trial. Le capsule PLA contenevano solo amido di patate e magnesio stearato come riempitivi. Il guscio della capsula consisteva in idrossipropilmetilcellulosa e il peso di una singola capsula era di 420 mg. I probiotici erano in capsule identiche come PLA e non potevano essere distinti per aspetto e gusto. Le capsule LH+BL e PLA sono state ottenute da Sanprobi sp. z o.o. sp. K., (Szczecin, Polonia). La combinazione e la concentrazione di probiotici utilizzati in questo studio si basavano sulle raccomandazioni del produttore. I preparativi sono stati amministrati a ciascun partecipante a buste contrassegnate con un codice univoco. Secondo la procedura di accecamento raccomandata, le formulazioni sono state preparate in anticipo dal laboratorio del produttore, che non è stato direttamente coinvolto nello studio. Per quanto riguarda il doppio cieco, né i ricercatori né i partecipanti sapevano se fosse somministrato LH+BL o PLA. I dettagli della randomizzazione sono stati anonimi e divulgati dopo la cessazione del protocollo.

Dieta e stile di vita

I dati dietetici sono stati raccolti utilizzando il questionario sulla frequenza alimentare Kompan® convalidata pubblicato sulla piattaforma di condivisione di file di Google Drive. Il questionario includeva gli alimenti comunemente consumati dalla popolazione polacca, raggruppati in 25 categorie di alimenti. Ai partecipanti è stato chiesto di selezionare la frequenza con cui hanno consumato ogni tipo di cibo negli ultimi 12 mesi. Le risposte di frequenza disponibili sono state convertite nelle frequenze giornaliere e consistevano in maiuscolo (0 volte al giorno), 1-3 volte al mese (0,06 volte al giorno), una volta alla settimana (0,14 volte/giorno), alcune volte alla settimana (0,5 volte/giorno), una volta al giorno (1,0 volte/giorno) o poche volte al giorno (2,0 volte/giorno). La qualità della dieta è stata descritta da due punteggi di qualità della dieta: l'indice dietetico pro-sano (PHDI) e l'indice di dieta malsano (NHDI). Entrambi i punteggi della qualità della dieta sono stati calcolati come somma delle frequenze giornaliere (in tempi/giorno) del consumo di alimenti. Il PHDI comprendeva 10 articoli che rappresentavano cibi potenzialmente sani (pane integrale, cereali di cereali integrali, latte, bevande al latte fermentate, cottage, carne bianca, pesce, legumi, frutta e verdura) con un punteggio totale che va da 0 a 20 volte al giorno. L'NHDI comprendeva 14 alimenti che rappresentavano cibi potenzialmente malsani (pane bianco, cereali raffinati, fast food, cibi fritti, burro, strutto, formaggio, tagli freddi, carne rossa, dolci, carni in scatola, bevande zuccherate, bevande energetiche, alcol) con una gamma di punteggi totale 0-28 volte/giorno. Entrambi i punteggi della qualità della dieta sono stati ricalcolati per standardizzare l'intervallo di punteggio totale a 0-100 punti per ciascuno. Sono state utilizzate le seguenti formule:

PHDI (in punti) = (100/20) × Somma della frequenza del consumo di 10 prodotti alimentari (tempi/giorno) NHDI (in punti) = (100/28) × Somma della frequenza del consumo di 14 prodotti alimentari (tempi/giorno) che hanno stimato i comportamenti stimati dello stile di vita includevano i comportamenti stimati nello stile di vita inclusi

Valutazione della massa corporea e della composizione corporea sono state prese misurazioni antropometriche all'inizio di ogni visita di studio per garantire le uguale condizioni per le procedure di prova. Prima dell'analisi della composizione corporea, il peso e l'altezza sono stati misurati al più vicino 0,1 cm e 0,1 kg, rispettivamente per altezza e peso, utilizzando una scala calibrata con uno stadiometro (WB3007311, Tanita Corporation, Giappone) e l'indice di massa corporea (BMI). L'analisi della composizione corporea (FM e FFM) è stata eseguita sia da assorbtiometria a raggi X a doppia energia (dispositivo prodigio GE lunari-Sistemi medici sanitari elettrici generali, Europa, Belgio) sia plesmografia di spostamento usando BOD (Life Measurement Inc., Concord, CA, USA). Tutte le misurazioni sono state eseguite al mattino (7: 30-10: 00) e durante il digiuno (l'assunzione di acqua è stata raccomandata), con la temperatura ambiente mantenuta a 20-22 ° C. Tutti i partecipanti hanno evitato l'esercizio fisico per almeno 24 ore prima di ogni visita.

Misurazioni della densità minerale ossea Tutti i partecipanti allo studio sono stati sottoposti a assorbtiometria a raggi X a doppia energia (DXA) da parte dello stesso tecnico che utilizza un densitometro prodigio Lunar GE (General Electrics Healthcare Medical Systems, Europa, Belgio). La dose effettiva (μSV) per questo densitometro è 0,05. I parametri ottenuti dalla misurazione includevano il contenuto di minerali ossei (BMC, G) e la densità minerale ossea (BMD, G/CM2). I punteggi Z BMD sono stati generati utilizzando il software di database DXA normativo specifico per sesso, razza e di età. Gli standard di densitometria clinica (ISCD) di International Society for Clinical Consigliano l'uso dei punteggi Z per valutare la BMD nelle donne in premenopausa. La densità minerale ossea (BMD) è stata confrontata con le giovani donne sane ad ogni misurazione (colonna lombare, anca totale, collo femorale, raggio) e un punteggio a T. Secondo la definizione dell'Organizzazione mondiale della sanità, l'osteoporosi è indicata da un punteggio T inferiore a -2,5 DS e osteopenia da un punteggio T tra -1 e -2,5 SD. I parametri ossei sono stati misurati in base alla metodologia di densitometria adottata e all'International Society for Clinical Densitometry Raccomandations. È stato utilizzato un programma di controllo di qualità standard, che includeva il controllo dell'apparecchiatura DXA per verificare la stabilità del sistema e una revisione visiva di tutte le immagini da parte di un esaminatore esperto. Lo scanner è stato calibrato quotidianamente come raccomandato dal produttore di prodigio lunare DXA GE. È stato utilizzato un blocco di calibrazione standard. Lo studio è stato condotto da una squadra con le certificazioni necessarie per eseguire densitometria periferica e assiale ed esperienza nella densitometria.

Saranno misurati i marcatori neuroendocrini legati allo stress di raccolta e analisi del campione, vale a dire cortisolo salivare e DHEA, nonché il rapporto cortisolo: DHEA. Prima della raccolta di saliva in laboratorio, ai partecipanti è stato chiesto di astenersi dal consumare caffeina e/o nicotina per almeno 4 ore e alcol per almeno 24 ore. Campioni di saliva non stimolati sono stati raccolti dai partecipanti a digiuno in tubi di plastica Eppendorf usa e getta usando il metodo di sputo per 10 minuti mentre i soggetti riposavano. Ai partecipanti è stato chiesto per la prima volta di sciacquare la bocca con acqua per circa 30 secondi e 10 minuti prima di fornire un campione di saliva. La saliva è stata raccolta tra le 9:00 e le 11:00 per ridurre al minimo le differenze circadiane. I campioni del materiale (2 tubi a persona), immediatamente dopo la raccolta, sono stati collocati in un congelatore a -80 ° C e conservati fino alla spedizione in laboratorio (Centro di ricerca e sviluppo di Sanprobi a Szczecina). Prima dell'analisi, i campioni verranno riscaldati e centrifugati a 1000 x g per 20 minuti per rimuovere il materiale particolato. Il cortisolo e il DHEA nella saliva umana saranno misurati con kit disponibili in commercio utilizzando un metodo immunoenzimatico secondo le istruzioni del produttore. Tutti i campioni verranno elaborati in duplicato durante lo stesso test. Le analisi statistiche verranno eseguite utilizzando la media delle due misurazioni replicate. I valori grezzi saranno trasformati in log e saranno escluse osservazioni superiori a tre SD dalla media per ciascun tempo di campionamento.

La raccolta del campione fecale e l'analisi del microbiota e del cortisolo sono state eseguite come segue: le feci sono state raccolte a casa il giorno dell'arrivo in laboratorio o il giorno prima, raffreddato immediatamente dopo la defecazione nel frigorifero del soggetto di prova e trasferite al laboratorio. I campioni sono stati conservati a -80 ° C fino all'analisi. L'analisi del microbiota intestinale verrà eseguita nel laboratorio del Centro di ricerca e sviluppo di Sanprobi a Szczecin utilizzando la tecnologia di sequenziamento di nuova generazione Illumina. L'estrazione del DNA dal campione fecale verrà eseguita utilizzando kit di isolamento disponibili in commercio, seguiti da una valutazione della qualità (integrità) dell'isolato. Il prossimo passo è l'amplificazione del DNA da parte della PCR usando primer specifici complementari alle sequenze geniche conservate su entrambi i lati della regione target. I frammenti ipervariabili V2 e V3 della regione, costituiti da circa 400-500 coppie di basi del gene rrn 16S procariotico, sono duplicati. Gli ampliconi di ciascun campione sono a barre con una breve sequenza di "codice a barre" unico per ciascun campione. Infine, il sequenziamento "multiplexed" ad alto rendimento di tutti i campioni viene eseguito in una singola corsa di sequenziamento.

I campioni fecali per l'analisi del cortisolo saranno riscaldati e diluiti con acqua e la procedura successiva è la stessa dei campioni di saliva preparati per l'analisi del cortisolo, come descritto sopra.

Dimensioni della personalità La scala dell'inventario della personalità di dieci articoli (TIPI) è un questionario auto-somministrato convalidato a 10 elementi progettato per valutare i fattori psicosociali. Il Tipi è stato progettato da Gosling et al. Come breve strumento per misurare le dimensioni della personalità Big Five con due elementi per ciascun tratto (un elemento standard e un elemento con il punteggio inverso in ciascun tratto). Queste dimensioni della personalità comprendono l'estroversione (essere sociale, entusiasta), gradevolezza (affidabilità, essere empatica), coscienza (autodisciplina, affidabilità, autoefficacia), stabilità emotiva (la dimensione opposta al neuroticismo; essere bilanciata, calma, capacità di rimanere stabile) e apertura (curiosità e creatività, essere aperta). Le risposte nella scala della personalità sono state misurate su una scala di Likert a sette punti e hanno ottenuto un punteggio 1 = fortemente in disaccordo, 2 = non sono d'accordo moderatamente, 3 = non sono d'accordo un po ', 4 = né concordare né in disaccordo, 5 = concordare un po', 6 = concordare moderatamente, 7 = concordare fortemente. Le risposte agli articoli con punteggio inverso sono state ricodificate per essere coerenti con gli elementi standard. Quindi, la media dell'articolo standard e l'articolo con punteggio inverso ricodificato sono stati calcolati per costituire il punteggio di scala di ciascuna dimensione, che variava da 1 a 7. I punteggi in scala più alti riflettono un livello più elevato di ciascun tratto.

Ogni punteggio di scala Tipi è stato classificato dall'approccio concettuale, che stava dividendo la scala in base al fatto che i punteggi fossero uguali all'essere "d'accordo" o più alto (in media) per creare due categorie: tipi più basse (<5 come in disaccordo) e categorie tipi più elevate (5-7 come concordate). Qualsiasi punteggio di scala di dimensioni che ha prodotto concorda e punteggi più alti indicava un livello più elevato di quel tratto e veniva considerato una categoria Tipi più alta. L'affidabilità interna del questionario con un valore alfa di Cronbach era 0,59. Il questionario TIPI è stato somministrato una sola volta durante la visita iniziale del T1.

Stress percepito e valutazione della salute mentale Abbiamo raccolto 5 scale di auto-segnalazione (sub) relative a ampi domini di stress percepito e salute fisica/mentale: scala di stress percepita (PSS-10), brevi orientamenti di coping a problemi di inventario esperto (brief), senso della scala di coerenza 13-elem (SOC-13), Generale Ghq-28 e dieci articoli per la personalità (tipingio. Tutti i test (in una versione polacca standardizzati) erano basati su questionari di autovalutazione pubblicati sulla piattaforma di condivisione di file di Google Drive.

La forma PSS-10 è stata utilizzata per valutare l'intensità dello stress correlato alle proprie esperienze di vita nell'ultimo mese ed è stata una versione modificata della scala di stress percepita sviluppata da Cohen. Gli intervistati segnalati su una scala Likert a 5 punti (0 = mai, 1 = quasi mai, 2 = a volte, 3 = abbastanza spesso, 4 = molto spesso) la misura in cui le situazioni della loro vita nell'ultimo mese erano imprevedibili, incontrollabili e schiaccianti. I punteggi per i quattro elementi identificati positivamente (gli elementi 4, 5, 7, 8) sono invertiti. Il punteggio massimo è 40, con punteggi più alti che indicano livelli più elevati di stress percepito. Secondo le istruzioni, i punteggi nell'intervallo 0-13 indicano un basso livello di stress, i punteggi nell'intervallo 14-26 indicano un livello moderato di stress e i punteggi nell'intervallo 27-40 indicano un alto livello di stress percepito. In questo studio, la scala aveva un alfa (α) di Cronbach di 0,85. I punteggi sulla scala sono stati confrontati tra le valutazioni iniziali e finali.

La breve Cope è una versione abbreviata di 28 elementi del questionario sull'inventario COPE di Carver et al. ed è stato utilizzato per valutare le strategie di coping situazionali (modi in cui le persone affrontano un evento stressante specifico) e le strategie di coping disposizionali (soliti modi in cui le persone affrontano lo stress nella vita di tutti i giorni). Nella sua versione originale, questo inventario ha rivelato livelli adeguati di coerenza interna, oltre a mostrare la prova della validità della sua struttura dei fattori. Abbiamo usato Mini-Cope, la versione polacca abbreviata del questionario sull'inventario COPE. La scala misura 14 strategie di coping teoricamente o empiricamente (sottoscale di coping, ognuna con due elementi): auto-distruzione, coping attivo, negazione, auto-gradmazione, supporto emotivo, supporto emotivo, supporto gravoso, supporto comportamentale, disimpegno comportamentale, sfogaggio, riparatore positivo, pianificazione, religioso, religizione, auto-gradamento. Per ogni elemento, gli intervistati indicano se usano la risposta di coping su una scala Likert a quattro punti (0 = di solito non lo faccio quasi affatto; 1 = di solito lo faccio raramente; 2 = di solito lo faccio spesso; 3 = di solito lo faccio quasi sempre).

Queste sottoscale sono state classificate in modo più ferito nel modello di fattori di secondo ordine, che consisteva in "strategie di coping adattive" (uso del supporto emotivo, refigurazione positiva, accettazione, religione, umorismo, coping attivo, pianificazione e uso del supporto strumentale) e "strategie di coping disadattate" (venting, negazione, utilizzo di sostanza, dispersione comportamentale, auto-distrazione e auto-blima). L'alfa di Cronbach per le sottoscale originali variava da 0,66 a 0,70. Il punteggio complessivo di ciascuna strategia di coping è la somma dei punteggi di due elementi.

Il senso di scala di coerenza SOC-13 è una scala di 13 elementi adattata da una scala di 29 elementi più lunga sviluppata da Antonovsky. Questa scala è un questionario di auto-relazione ed è composta da tre sottoscale: significatività (quattro elementi), comprensibilità (cinque elementi) e gestibilità (quattro elementi). Ogni elemento contiene risposte che cambiano tra le domande e sono classificate da 1 a 7 su scala Likert. Cinque variabili (elementi 1, 2, 3, 7 e 10) sono formulate negativamente e sono quindi codificate inversa quando gli articoli sono sommati per ottenere un totale di un articolo. SOC è stato calcolato come media per ogni individuo che aveva risposto almeno 10 dei 13 articoli (intervallo, 1.0-7,0) Un punteggio più alto rappresenta un maggiore senso di coerenza. Gli studi sulle proprietà psicometriche della scala SOC-13 hanno mostrato alti livelli di validità e affidabilità e la coerenza interna è molto buono, con gli alfa di Cronbach che vanno da 0,70 a 0,92 nei 127 studi usando il SOC-13. Nel presente studio, le stime dell'affidabilità per questa scala vanno da α = 0,77-0,79.

Il questionario sulla salute generale GHQ-28 è stato sviluppato da Goldberg nel 1978. È una misura di angoscia emotiva nelle ultime settimane che contiene 28 elementi e potrebbe essere utilizzato come strumento di screening della comunità e per il rilevamento di disturbi psichiatrici non specifici tra le persone in ambito cure primarie. Ai partecipanti è stato chiesto dei sintomi e/o del disagio che avevano recentemente sperimentato. Ogni elemento è valutato su una scala Likert a 4 punti per indicare la gravità dei sintomi da 0 a 3 (0 = per niente, 1 = non più del solito, 2 = un po 'più del solito, 3 = molto più del solito). I punteggi per i sette elementi identificati positivamente (gli elementi 4, 5, 7, 8) sono invertiti (1 = più del solito, 2 = come al solito, 3 = meno del solito, 4 = molto meno del solito). Gli articoli sono sommati su quattro sottoscale: sintomi somatici (elementi 1-7), ansia/insonnia (elementi 8-14), disfunzione sociale (elementi 15-21) e depressione maggiore (elementi 22-28). Un punteggio GHQ-28 elevato indica un probabile caso psichiatrico. I dati normativi per la popolazione generale valutati indicano un punto di interruzione ≥ 5. L'affidabilità è stata calcolata utilizzando il coefficiente di Cronbach Alpha ed era 0,89-0,90.

Stato socioeconomico ed eventi stressanti Un ulteriore questionario è stato formulato dagli autori, incluso lo stato socioeconomico (SES) (età, luogo di residenza, stato della famiglia, livello di istruzione) e domande su eventuali eventi stressanti (SES) vissuti nel mese precedente.

Analisi statistica Le variabili continue sono presentate come deviazione media e standard e variabili dal ridimensionamento come mediane e gamme interquartili (dal 25% al ​​75%). Le variabili categoriche sono presentate come frequenze. Le differenze tra le variabili categoriali sono analizzate dal test esatto di Fisher. Tutte le variabili continue sono testate per la distribuzione normale usando il test Shapiro-Wilk, nonché la curtosi, l'asimmetria e una valutazione grafica della distribuzione di ciascun dati variabili. Le procedure di trasformazione dei dati (ad es. Trasformazione Box-Cox) sono considerate se si traducono in una distribuzione normale di tutte le variabili trasformate. I confronti tra i punti temporali di base e post-supplementazione (visite T1 e T2) nei gruppi LH+BL o PLA sono determinati usando il test t per le variabili dipendenti e le dimensioni dell'effetto espresse come d di Cohen. I confronti tra i gruppi nelle variazioni pre-post all'interno delle variabili sono determinati usando il test t per variabili indipendenti. Se la normalità viene violata, i dati vengono analizzati utilizzando il test di livello firmato Wilcoxon con dimensioni dell'effetto espressa come coefficiente di correlazione di rango (RC). Il test U di Mann-Whitney viene utilizzato per confrontare le variabili per testare le differenze tra i gruppi placebo e prebiotici. Un alfa di <0,05 è considerato statisticamente significativo. I dati vengono analizzati utilizzando il software Statistica 13.3 (StatSoft Inc., USA).