O impacto de bactérias probióticas selecionadas na microbiota intestinal, indicadores de estresse e estado nutricional de adultos jovens (PROBASTRESS)

Introdução O número de pessoas que recebem serviços psiquiátricos tem aumentado nos últimos anos. Na Polônia, o número de pessoas com transtornos mentais em atendimento ambulatorial aumentou 150.000 nos últimos anos, atingindo um total de mais de 1,2 milhão de pacientes. O número de pessoas que exigem atendimento psicológico e psiquiátrico deve crescer nas próximas décadas. A psicopharmacoterapia usada nem sempre produz os resultados esperados do tratamento. Como resultado, mais e mais atenção está sendo dada às interações não farmacológicas. Nos últimos anos, houve um crescente corpo de pesquisa sobre a relação entre nutrição e seu impacto no estado mental das pessoas com transtornos mentais. A ciência alimentar e nutricional, a psicodiética e a nutripiquiatria, os prósperos campos científicos, estão ganhando destaque. Os resultados da pesquisa indicam que os recursos de nutrição e estresse afetam a saúde de um indivíduo. O papel das bactérias probióticas Lactobacillus helveticus e Bifidobacterium longus como parte do microbioma humano também foi estudado nesta esfera e resulta de um número crescente de trabalhos confirma sua ampla gama de aplicações e efeitos positivos em vários domínios de saúde. Estudos anteriores mostraram que a suplementação com Bifidobacterium longus ou um composto deles com outras cepas bacterianas afetadas positivamente, entre outras coisas, a saúde óssea das mulheres na pós -menopausa, aliviaram o desconforto gastrointestinal, reduziu o estresse percebido e a depressão, a ansiedade e a ansiedade e a ansiedade e os indicadores de humor em adultos de vários agentes. Por outro lado, a suplementação com um compósito de várias cepas bacterianas, incluindo Lactobacillus helveticus e Bifidobacterium longu, afetou a redução da massa de gordura em indivíduos obesos e com sobrepeso. A suplementação probiótica parece ter um grande potencial para melhorar a saúde e a qualidade de vida, incluindo a prevenção e tratamento de transtornos depressivos e de ansiedade e a capacidade de lidar com o estresse. No entanto, ainda há uma falta de pesquisa nessa área, especialmente em relação a Lactobacillus helveticus sozinha e a combinação de linhagens de Lactobacillus helveticus e bifidobacterium long.

Com isso em mente, um projeto de pesquisa foi planejado para investigar os efeitos de suplementos probióticos e qualidade alimentar em uma ampla gama de resultados psicológicos, microbiológicos, bioquímicos e clínicos. The study aimed to evaluate the effects of targeted supplementation with a new composition of probiotic strains Lactobacillus Helveticus and Bifidobacterium longum on gut microbiota composition and quality, stress-related neuroendocrine markers, mental health, perceived stress intensity, psychosomatic response and coping strategies as well as body composition and bone density in young women who differed in diet quality. We hypothesised that supplementation with probiotic bacteria at a daily dose of 3 x 109 CFU, irrespective of diet quality, would result in changes in the gut microbiota towards higher proportions of beneficial bacteria, reduce stress-related neuroendocrine markers and the intensity of perceived stress and its psychosomatic symptoms, and improve stress-coping strategies, mental health potential and have a beneficial effect on body composition components and Densidade óssea em mulheres jovens saudáveis, em comparação com o placebo.

Desenho e população do estudo Este estudo de intervenção randomizado, controlado por placebo, de 2 braços, paralelo e duplo-cego foi realizado em algumas ondas de setembro de 2023 a março de 2024 2023 no Departamento de Nutrição Humana e Dietética (Poznań Univrsity of Life Sciences). Cada onda começou durante os meses de outono e foi concluída durante os meses de inverno. O tamanho da amostra foi calculado usando o software GPood (versão 3.1.9.7, Universität Düsseldorf, Alemanha). Resumidamente, para detectar uma mudança significativa no nível de estresse percebido com um teste t de dois lados, um nível de significância de 5%e um poder estatístico de 80%, um tamanho de amostra de 110 foi determinado, considerando uma taxa de abandono de 30%. Inicialmente, 120 mulheres foram matriculadas neste estudo. Essas eram apenas mulheres no início da idade adulta. Os critérios de elegibilidade para o estudo incluíram sexo feminino, de 20 a 30 anos, IMC <30 kg/m2. Os critérios de exclusão foram: Distúrbios de saúde crônicos e/ou graves diagnosticados (por exemplo Diabetes, asma, hipertensão, doenças renais), gravidez, tomando probióticos por 8 semanas antes da inscrição no protocolo do estudo, tratamento antibiótico recente e atual, uso de minério de tratamento antidepressivo farmacêutico. Todos os participantes eram voluntários saudáveis ​​que foram totalmente informados sobre os objetivos do estudo e forneceram consentimento informado para a participação antes de entrar no estudo. O protocolo do estudo foi revisado e aprovado pelo Comitê de Bioética da Universidade de Ciências Médicas de Karol Marcinkowski em Poznan, Polônia (permissão no. 244/23, emitido em 9 de março de 2023). O estudo está em conformidade com a declaração de consorte sobre ensaios randomizados. Todos os procedimentos seguiram as diretrizes da Declaração de Helsinque de 2013 e boas práticas clínicas.

Os voluntários inscritos foram uniformemente, aleatoriamente e cegamente atribuídos ao grupo de intervenção (LH+BL), recebendo bactérias probióticas ou o grupo placebo (PLA) por 12 semanas de suplementação. A randomização foi conduzida pelo fabricante de suplementos com códigos gerados por computador usando randomizador de pesquisa (www.randomizer.org). Todo o protocolo do estudo incluiu familiarização e duas visitas de laboratório no Departamento de Nutrição Humana e Dietética na linha de base e no final do estudo (T1, T2; antes/depois da suplementação de LH+BL [LH+BL PRES e LH+BL POST] e suplementação de PLA [PLAPRE e PLAPOST]). O principal protocolo do estudo incluiu uma avaliação de hábitos alimentares na visita do estudo em T1. Medições de peso, altura, composição corporal, densidade óssea, resposta ao estresse e estratégias de estresse, avaliação de saúde mental e amostragem de saliva e fezes foram realizadas em cada uma das visitas de estudo T1 e T2. As medidas primárias de desfecho são a composição da microbiota, a intensidade do estresse percebido e os marcadores neuroendócrinos relacionados ao estresse (cortisol salivar, DHEA salivar e Cortisol salivar: DHEA, cortisol fecal); As medidas secundárias de desfecho são estratégias de estresse, sintomas psicossomáticos, senso de coerência, composição corporal e densidade óssea). Todos os testes foram realizados de manhã ao mesmo tempo para o participante. Os participantes declararam que não haviam introduzido nenhuma alteração em seus estilos de vida, nutrição ou suplementação durante o protocolo do estudo e foram preparados para cada visita da mesma maneira. Além disso, o contato telefônico foi mantido em caso de não conformidade com o protocolo ou sintomas gastrointestinais ou eventos adversos.

Houve 20 desistentes do protocolo do estudo. As principais razões para a queda foram antibioticoterapia durante o protocolo (n = 10) e a descontinuação do estudo sem um motivo antes da segunda visita (n = 10). Houve 11 desistentes no LH+BL e 9 nos grupos PLA. Finalmente, 100 mulheres (23,5 ± 2,7 anos; 61,6 ± 9,4 kg de massa corporal; 1,67 ± 0,06 m de altura) completaram todo o protocolo de estudo e foram incluídas nas análises.

Suplementação no procedimento experimental, cada participante foi suplementado com uma dose crônica de 1 cápsula por dia de LH+BL ou PLA em uma sequência randomizada e paralela. Os participantes receberam pacotes de bolhas de cápsulas de LH+BL contendo 3 x 109 UF de cepas probióticas liofilizadas combinadas das bactérias probióticas bifidobacterium longum rosell®-175 e lactobacillus helveticus rosell® 52 (Nome do comércio: SanProbetiats®stress) ou Plá Planing Capsules Rosell®-52 (Nome do comércio: SanProbetiAn®stress) ou Plá Planings Capsules Rosell®-52 (SanProbrien®stress) ou Plá Planings Capsules Rosell®-52 (SanProbrien®stress) ou Planing Capsules (Nome da SanProbriener®) ou PLANTES ou PLANTRESS ou PLANTES CAPSULES (Nome da Sanica. As cápsulas do PLA continham apenas amido de batata e estearato de magnésio como enchimentos. A concha da cápsula consistia em hidroxipropilmetilcelulose, e o peso de uma única cápsula era de 420 mg. Os probióticos estavam em cápsulas idênticas como PLA e não podiam ser distinguidas pela aparência e sabor. As cápsulas LH+BL e PLA foram obtidas de Sanprobi sp. Z O.O. sp. k., (Szczecin, Polônia). A combinação e a concentração de probióticos utilizados neste estudo foram baseados nas recomendações do fabricante. Os preparativos foram administrados a cada participante em envelopes marcados com um código exclusivo. De acordo com o procedimento de cegueira recomendado, as formulações foram preparadas com antecedência pelo laboratório do fabricante, que não estava diretamente envolvido no estudo. Quanto a duplas, nem os pesquisadores nem os participantes sabiam se o LH+BL ou o PLA foi administrado. Os detalhes da randomização foram anonimizados e divulgados após a cessação do protocolo.

Dieta e estilo de vida

Os dados da dieta foram coletados usando o questionário validado de frequência alimentar Kompan® postado na plataforma de compartilhamento de arquivos do Google Drive. O questionário incluía alimentos comumente consumidos pela população polonesa, agrupados em 25 categorias de alimentos. Os participantes foram convidados a selecionar com que frequência consumiram cada tipo de alimento nos últimos 12 meses. As respostas de frequência disponíveis foram convertidas em frequências diárias e consistiam em nunca (0 vezes/dia), 1-3 vezes por mês (0,06 vezes/dia), uma vez por semana (0,14 vezes/dia), algumas vezes por semana (0,5 vezes/dia), uma vez por dia (1,0 vezes/dia) ou algumas vezes ao dia (2,0 vezes/dia). A qualidade da dieta foi descrita por dois escores de qualidade da dieta: o índice de dieta pró-saudável (PHDI) e o Índice de Dietas Insalubres (NHDI). Ambos os escores de qualidade da dieta foram calculados como a soma das frequências diárias (em tempos/dia) de consumo de itens alimentares. O PHDI incluiu 10 itens representando alimentos potencialmente pró-saúde (pão integral, cereais integrais, leite, bebidas fermentadas, queijo cottage, carne branca, peixe, legumes, frutas e legumes) com uma pontuação total variando de 0 a 20 vezes/dia. O NHDI incluiu 14 itens alimentares representando alimentos potencialmente prejudiciais (pão branco, cereais refinados, fast food, alimentos fritos, manteiga, banha, queijo, cortes frios, carne vermelha, doces, carnes enlatadas, bebidas adoçadas, bebidas energéticas, álcool) com uma pontuação total de 0 a 28 vezes/dia. Ambos os escores de qualidade da dieta foram recalculados para padronizar o intervalo de pontuação total para 0-100 pontos para cada um. As seguintes fórmulas foram usadas:

PhDi (em pontos) = (100/20) × Soma da frequência de consumo de 10 itens alimentares (horários/dia) NHDI (em pontos) = (100/28) × soma da frequência de consumo de 14 itens alimentares (tempo/dia) Fumulação estimada, etc.

A avaliação da massa corporal e da composição corporal medidas antropométricas foram realizadas no início de cada visita de estudo para garantir condições iguais para os procedimentos de teste. Antes da análise da composição corporal, o peso e a altura foram medidos até 0,1 cm mais próximos e 0,1 kg, para altura e peso, respectivamente, usando uma escala calibrada com um estadiômetro (WB3007311, Tanita Corporation, Japão) e o índice de massa corporal (IMC) foi calculado. A análise de composição corporal (FM e FFM) foi realizada pela absorciometria de raios-X de dupla energia (dispositivo de prodígio lunar da GE-sistemas médicos de saúde elétrica geral, Europa, Bélgica) e plethismomografia de deslocamento usando o BOD POD (Life Measurement Inc., Concord, CA, USA). Todas as medidas foram realizadas de manhã (7: 30-10: 00) e enquanto o jejum (a ingestão de água foi recomendada), com a temperatura ambiente mantida a 20-22 ° C. Todos os participantes evitaram exercícios extenuantes por pelo menos 24 horas antes de cada visita.

Medidas de densidade mineral óssea Todos os participantes do estudo foram submetidos a absorciometria de raios-X de dupla energia (DXA) pelo mesmo técnico usando um densitômetro de prodígio lunar GE (General Electrics Healthcare Medical Systems, Europa, Bélgica). A dose efetiva (μSV) para este densitômetro é de 0,05. Os parâmetros obtidos a partir da medição incluíram o conteúdo mineral ósseo (BMC, G) e a densidade mineral óssea (DMO, g/cm2). Os escores Z da BMD foram gerados usando o software de banco de dados DXA normativo de sexo, raça e idade. Os padrões da Sociedade Internacional de Densitometria Clínica (ISCD) recomendam o uso de escores Z para avaliar a DMO em mulheres na pré-menopausa. A densidade mineral óssea (DMO) foi comparada a mulheres jovens saudáveis ​​em cada medição (coluna lombar, quadril total, femoral, raio) e escore T foi calculado. De acordo com a definição da Organização Mundial da Saúde, a osteoporose é indicada por um escore T menor que -2,5 DP e osteopenia por uma escore T entre -1 e -2,5 DP. Os parâmetros ósseos foram medidos de acordo com a metodologia densitometria adotada e as recomendações da Sociedade Internacional de Densitometria Clínica. Foi utilizado um programa de controle de qualidade padrão, que incluía verificação do equipamento DXA para verificar a estabilidade do sistema e uma revisão visual de todas as imagens por um examinador experiente. O scanner foi calibrado diariamente como recomendou o fabricante de prodígio lunar da DXA GE. Foi utilizado um bloco de calibração padrão. O estudo foi realizado por uma equipe com as certificações necessárias para realizar densitometria periférica e axial e experiência em densitometria.

Saliva Coleta e análise de amostra Os marcadores neuroendócrinos relacionados ao estresse, a saber, cortisol salivar e DHEA, serão medidos, bem como a razão cortisol: DHEA. Antes da coleta de saliva no laboratório, os participantes foram instruídos a se abster de consumir cafeína e/ou nicotina por pelo menos 4 horas e álcool por pelo menos 24 horas. As amostras de saliva não estimuladas foram coletadas dos participantes do jejum em tubos plásticos descartáveis ​​de Eppendorf usando o método de cuspir por 10 minutos enquanto os indivíduos repousavam. Os participantes foram convidados a enxaguar a boca com água por aproximadamente 30 segundos e 10 minutos antes de fornecer uma amostra de saliva. A saliva foi coletada entre 9:00 e 11:00 para minimizar as diferenças circadianas. Amostras do material (2 tubos por pessoa), imediatamente após a coleta, foram colocadas em um freezer a -80 ° C e armazenadas até o envio para o laboratório (Centro de Pesquisa e Desenvolvimento da Sanprobi em Szczecin). Antes da análise, as amostras serão aquecidas e centrifugadas a 1000 x g por 20 minutos para remover o material particulado. O cortisol e o DHEA na saliva humana serão medidos com kits disponíveis comercialmente usando um método imunoenzimático de acordo com as instruções do fabricante. Todas as amostras serão processadas em duplicado durante o mesmo ensaio. As análises estatísticas serão realizadas usando a média das duas medições replicadas. Os valores brutos serão transformados em log e as observações superiores a três SDs da média para cada tempo de amostragem serão excluídas.

A coleta de amostras fecal e a amostragem de microbiota e análise de cortisol foi realizada da seguinte forma: as fezes foram coletadas em casa no dia da chegada ao laboratório ou no dia anterior, esfriadas imediatamente após a defecação na geladeira do sujeito do teste e transferidas para o laboratório. As amostras foram armazenadas a -80 ◦C até a análise. A análise da microbiota intestinal será realizada no Laboratório do Centro de Pesquisa e Desenvolvimento da Sanprobi em Szczecin usando a tecnologia de sequenciamento de próxima geração Illumina. A extração de DNA da amostra fecal será realizada usando kits de isolamento disponíveis no mercado, seguidos por uma avaliação da qualidade (integridade) do isolado. A próxima etapa é a amplificação de DNA por PCR usando iniciadores específicos complementares às seqüências genéticas conservadas em ambos os lados da região alvo. Os fragmentos hipervariáveis ​​V2 e V3 da região, consistindo em aproximadamente 400-500 pares de bases do gene pricariótico 16S RRN, são duplicados. Os amplicons de cada amostra são codificados com uma sequência curta de "código de barras" exclusiva de cada amostra. Finalmente, o seqüenciamento "multiplexado" de alto rendimento de todas as amostras é realizado em uma única execução de sequenciamento.

As amostras fecais para análise de cortisol serão aquecidas e diluídas com água, e o procedimento subsequente é o mesmo que para amostras de saliva preparadas para análise de cortisol, conforme descrito acima.

Dimensões da personalidade A escala do Inventário de Personalidade de Dez Item (TIPI) é um questionário auto-administrado de 10 itens validado, projetado para avaliar os fatores psicossociais. O Tipi foi projetado por Gosling et al. Como um breve instrumento para medir as cinco grandes dimensões da personalidade com dois itens para cada característica (um item padrão e um item de pontuação reversa em cada característica). Essas dimensões de personalidade compreendem extroversão (sendo social, entusiasmada), concordância (confiabilidade, sendo empática), consciência (autodisciplina, confiabilidade, auto-eficácia), estabilidade emocional (a dimensão oposta ao neuroticismo; sendo equilibrado, calmo, capacidade de restante) e abertura. As respostas na escala de personalidade foram medidas em uma escala Likert de sete pontos e pontuadas como 1 = discordo totalmente, 2 = Discordo moderadamente, 3 = discordo um pouco, 4 = nem concordo nem discordo, 5 = concordo um pouco, 6 = concordo moderadamente, 7 = concordo fortemente. As respostas a itens com pontuação reversa foram recodificadas para serem consistentes com os itens padrão. Em seguida, a média do item padrão e o item de pontuação reversa recodificada foram calculados para compensar a pontuação da escala de cada dimensão, que variou de 1 a 7. Os escores de escala mais altos refletem um nível mais alto de cada característica.

Cada pontuação da escala TIPI foi categorizada pela abordagem conceitual, que estava dividindo a escala de acordo com se as pontuações eram iguais a serem "concordar" ou superior (em média) para criar duas categorias: TIPI mais baixo (<5 como discordo) e categorias mais altas do TIPI (5-7 como concordo). Qualquer pontuação da escala de dimensão que produziu concordância e pontuações mais altas indicaram um nível mais alto dessa característica e foram consideradas uma categoria TIPI mais alta. Este questionário da confiabilidade interna do questionário com o valor alfa de Cronbach foi de 0,59. O questionário Tipi foi administrado apenas uma vez durante a visita inicial do T1.

O estresse percebido e a avaliação de saúde mental coletamos 5 escalas de autorrelato (sub) relacionadas a domínios amplos de estresse percebido e saúde física/mental: escala de estresse percebida (PSS-10), breves orientações de enfrentamento para problemas experimentados (breve copo de coer de coerência da coerência de 13 itens (SoB-13), questionário de saúde geral GHQ-28 e dez itens de coerência e dez itens da coerência (SoB-13), questionário de saúde geral. Todos os testes (em uma versão polonesa padronizada) foram baseados em questionários de auto-avaliação publicados na plataforma de compartilhamento de arquivos do Google Drive.

A forma PSS-10 foi usada para avaliar a intensidade do estresse relacionado às próprias experiências de vida no mês passado e foi uma versão modificada da escala de estresse percebida desenvolvida por Cohen. Os entrevistados relataram uma escala Likert de 5 pontos (0 = nunca, 1 = quase nunca, 2 = às vezes, 3 = com bastante frequência, 4 = com muita frequência) até que ponto as situações em suas vidas durante o mês passado eram imprevisíveis, incontroláveis ​​e esmagadoras. As pontuações para os quatro itens identificados positivamente (itens 4, 5, 7, 8) são revertidos. A pontuação máxima é de 40, com pontuações mais altas indicando níveis mais altos de estresse percebido. De acordo com as instruções, as pontuações na faixa de 0-13 indicam um baixo nível de tensão, as pontuações na faixa de 14-26 indicam um nível moderado de tensão e os escores na faixa de 27-40 indicam um alto nível de tensão percebida. Neste estudo, a escala teve um alfa de Cronbach (α) de 0,85. As pontuações na escala foram comparadas entre as avaliações iniciais e finais.

O breve Cope é uma versão reduzida de 28 itens do questionário de inventário de Cope de Carver et al. e foi usado para avaliar estratégias situacionais de enfrentamento (maneiras pelas quais as pessoas lidam com um evento estressante específico) e estratégias de enfrentamento disposicionais (maneiras usuais de as pessoas lidam com o estresse na vida cotidiana). Em sua versão original, este inventário revelou níveis adequados de consistência interna, além de mostrar a prova da validade de sua estrutura fatorial. Utilizamos o mini-copo, a versão polonesa abreviada do Questionário de Inventário de Cope. Para cada item, os entrevistados indicam se usam a resposta de enfrentamento em uma escala Likert de quatro pontos (0 = geralmente não faço isso quase; 1 = geralmente faço isso raramente; 2 = geralmente faço isso com frequência; 3 = geralmente faço isso quase sempre).

Essas subescalas foram categorizadas no modelo de fator de segunda ordem, que consistia em "estratégias de enfrentamento adaptativas" (uso de apoio emocional, reformulação positiva, aceitação, religião, humor, enfrentamento ativo, planejamento e uso de apoio instrumental) e "estratégias de coping mal adaptativas" (auto-negligência, uso de substâncias, uso de substâncias. O alfa de Cronbach para as subescalas originais variou de 0,66 a 0,70. A pontuação geral de cada estratégia de enfrentamento é a soma das pontuações de dois itens.

A escala do senso de coerência SOC-13 é uma escala de 13 itens adaptada de uma escala mais longa de 29 itens desenvolvida por Antonovsky. Essa escala é um questionário de autorrelato e consiste em três subescalas: significância (quatro itens), compreensibilidade (cinco itens) e gerenciamento (quatro itens). Cada item contém respostas que mudam entre as perguntas e são classificadas de 1 a 7 em uma escala Likert. Cinco variáveis ​​(itens 1, 2, 3, 7 e 10) são redigidas negativamente e, portanto, são codificadas em reverso quando os itens são somados para obter um total de um item. O SOC foi calculado como a média para cada indivíduo que havia respondido pelo menos 10 dos 13 itens (intervalo, 1,0-7,0) Uma pontuação mais alta representa um maior senso de coerência. Estudos das propriedades psicométricas da escala SOC-13 mostraram altos níveis de validade e confiabilidade, e a consistência interna é muito boa, com os alfas de Cronbach variando de 0,70 a 0,92 nos 127 estudos usando o SOC-13. No presente estudo, as estimativas de confiabilidade para essa escala variam de α = 0,77-0,79.

O Questionário de Saúde Geral do GHQ-28 foi desenvolvido por Goldberg em 1978. É uma medida de sofrimento emocional nas últimas semanas que contém 28 itens e pode ser usada como uma ferramenta de triagem comunitária e para a detecção de distúrbios psiquiátricos não específicos entre indivíduos no ambiente de atenção primária. Os participantes foram questionados sobre os sintomas e/ou desconforto que haviam sofrido recentemente. Cada item é classificado em uma escala Likert de 4 pontos para indicar a gravidade dos sintomas de 0 a 3 (0 = nada, 1 = não mais do que o habitual, 2 = um pouco mais do que o habitual, 3 = muito mais do que o habitual). As pontuações para os sete itens identificadas positivamente (itens 4, 5, 7, 8) são revertidas (1 = mais do que o habitual, 2 = como de costume, 3 = menos do que o habitual, 4 = muito menos que o habitual). Os itens são somados em quatro subescalas: sintomas somáticos (itens 1-7), ansiedade/insônia (itens 8-14), disfunção social (itens 15-21) e depressão maior (itens 22-28). Uma alta pontuação de GHQ-28 indica um provável caso psiquiátrico. Os dados normativos para a população geral avaliados indicam um ponto de corte ≥ 5. A confiabilidade foi calculada usando o coeficiente alfa de Cronbach e foi de 0,89-0,90.

Status socioeconômico e eventos estressantes Um questionário adicional foi formulado pelos autores, incluindo status socioeconômico (SES) (idade, local de residência, status familiar, nível de educação) e perguntas sobre quaisquer eventos estressantes (SES) experimentados durante o mês anterior.

Análise estatística As variáveis ​​contínuas são apresentadas como desvio médio e padrão e variáveis ​​da escala como medianas e intervalos interquarteis (25% a 75%). As variáveis ​​categóricas são apresentadas como frequências. As diferenças entre as variáveis ​​categóricas são analisadas pelo teste exato de Fisher. Todas as variáveis ​​contínuas são testadas para distribuição normal usando o teste de Shapiro-Wilk, bem como curtose, assimetria e uma avaliação gráfica da distribuição de cada dados variáveis. Os procedimentos de transformação de dados (por exemplo, transformação de cox de caixa) são considerados se resultarem em uma distribuição normal de todas as variáveis ​​transformadas. As comparações entre os pontos de tempo de linha de base e pós-suplementação (visitas T1 e T2) nos grupos LH+BL ou PLA são determinados usando o teste t para variáveis ​​dependentes e tamanho de efeito expressa como D de Cohen. As comparações entre os grupos em alterações pré-pós nas variáveis ​​são determinadas usando o teste t para variáveis ​​independentes. Se a normalidade for violada, os dados serão analisados ​​usando o teste de rank assinado Wilcoxon com tamanho de efeito expresso como o coeficiente de correlação de classificação (RC). O teste U de Mann-Whitney é usado para comparar as variáveis ​​para testar as diferenças entre os grupos placebo e prebióticos. Um alfa <0,05 é considerado estatisticamente significativo. Os dados são analisados ​​usando o software Statistica 13.3 (Statsoft Inc., EUA).