El impacto de las bacterias probióticas seleccionadas en la microbiota intestinal, los indicadores de estrés y el estado nutricional de los adultos jóvenes (PROBASTRESS)

Introducción El número de personas que reciben servicios psiquiátricos han aumentado en los últimos años. En Polonia, el número de personas con trastornos mentales en la atención ambulatoria ha aumentado en 150,000 en los últimos años, alcanzando un total de más de 1.2 millones de pacientes. Se espera que el número de personas que requieran atención psicológica y psiquiátrica crezcan en las próximas décadas. La psicofarmacoterapia utilizada no siempre produce los resultados del tratamiento esperados. Como resultado, se presta cada vez más atención a las interacciones no farmacológicas. En los últimos años, ha habido un creciente cuerpo de investigación sobre la relación entre la nutrición y su impacto en el estado mental de las personas con trastornos mentales. La ciencia de los alimentos y la nutrición, la psicodietética y la psiquiatría nutripripal, los prósperos campos científicos, están ganando prominencia. Los resultados de la investigación indican que la nutrición y los recursos de combate de estrés afectan la salud de un individuo. El papel de la bacteria probiótica lactobacillus helveticus y Bifidobacterium longum como parte del microbioma humano también se ha estudiado en esta esfera, y los resultados de un número creciente de documentos confirman su amplia gama de aplicaciones y efectos positivos en diversos dominios de la salud. Estudios anteriores han demostrado que la suplementación con Bifidobacterium longum o un compuesto de ellas con otras cepas bacterianas afectó positivamente, entre otras cosas, la salud ósea de las mujeres posmenopáusicas, aliviadas de incomodidad gastrointestinal, reduce el estrés percibido y la mejora de la depresión, la ansiedad e indicadores del estado de ánimo en adultos de diversos edades. Por otro lado, la suplementación con un compuesto de varias cepas bacterianas, incluidas Lactobacillus helveticus y Bifidobacterium longum, afectó la reducción de la masa de grasa en individuos obesos y con sobrepeso. La suplementación con probiótica parece tener un gran potencial para mejorar la salud y la calidad de vida, incluida la prevención y el tratamiento de los trastornos depresivos y de ansiedad y la capacidad de hacer frente al estrés. Sin embargo, todavía hay una falta de investigación en esta área, especialmente con respecto a Lactobacillus helveticus solo y la combinación de cepas de Lactobacillus helveticus y Bifidobacterium longum.

Con esto en mente, se planeó un proyecto de investigación para investigar los efectos de los suplementos probióticos y la calidad de la dieta en una amplia gama de resultados psicológicos, microbiológicos, bioquímicos y clínicos. El estudio tuvo como objetivo evaluar los efectos de la suplementación dirigida con una nueva composición de las cepas probióticas Lactobacillus helveticus y Bifidobacterium longum en la composición de la microbiota intestinal y la calidad, los marcadores neuroendocrinos relacionados con el estrés, la salud mental, la intensidad del estrés percibido, la respuesta psicosomática y las estrategias de afición, así como la composición corporal y la composición del cuerpo y el densidad de los huesos en las personas que difieren en la diferencia de la dieta. We hypothesised that supplementation with probiotic bacteria at a daily dose of 3 x 109 CFU, irrespective of diet quality, would result in changes in the gut microbiota towards higher proportions of beneficial bacteria, reduce stress-related neuroendocrine markers and the intensity of perceived stress and its psychosomatic symptoms, and improve stress-coping strategies, mental health potential and have a beneficial effect on body composition components and bone densidad en mujeres jóvenes sanas, en comparación con el placebo.

Diseño y población del estudio Este ensayo aleatorio, controlado con placebo, 2 brazos, paralelo y doble ciego, se realizó un ensayo de intervención doble ciego en algunas olas desde septiembre de 2023 hasta marzo de 2024 2023 en el Departamento de Nutrición Humana y Dietética (Poznań Univrsity of Life Sciences). Cada ola comenzó durante los meses de otoño y se completó durante los meses de invierno. El tamaño de la muestra se calculó utilizando el software GPower (versión 3.1.9.7, Universität Düsseldorf, Alemania). Brevemente, para detectar un cambio significativo en el nivel de estrés percibido con una prueba t de dos lados, un nivel de significancia del 5%y un poder estadístico del 80%, se determinó un tamaño de muestra de 110, considerando una tasa de abandono del 30%. Inicialmente, 120 mujeres se inscribieron en este estudio. Estas eran solo mujeres en la edad adulta temprana. Los criterios de elegibilidad para el estudio incluyeron sexo femenino, de 20 a 30 años, IMC <30 kg/m2. Los criterios de exclusión fueron: trastornos de salud crónicos y/o graves diagnosticados (p. Ej. Diabetes, asma, hipertensión, enfermedades renales), embarazo, tomando cualquier probiótico durante 8 semanas antes de la inscripción en el protocolo de estudio, el tratamiento antibiótico reciente y actual, el uso del mineral del tratamiento antidepresivo farmacéutico. Todos los participantes eran voluntarios sanos que estaban completamente informados sobre los objetivos del estudio y proporcionaron consentimiento informado para participar antes de ingresar al estudio. El protocolo de estudio fue revisado y aprobado por el Comité de Bioética de la Universidad de Ciencias Médicas Karol Marcinkowski en Poznan, Polonia (permiso no. 244/23, emitido el 9 de marzo de 2023). El estudio cumple con la declaración de consorte en ensayos aleatorios. Todos los procedimientos siguieron las pautas de la Declaración de Helsinki de 2013 y buena práctica clínica.

Los voluntarios inscritos fueron asignados de manera uniforme, aleatoria y ciegamente al grupo de intervención (LH+BL), recibiendo bacterias probióticas o el grupo placebo (PLA) durante 12 semanas de suplementación. El fabricante de suplementos realizó la aleatorización con códigos generados por computadora utilizando Research Randomizer (www.randomizer.org). Todo el protocolo de estudio incluyó familiarización y dos visitas de laboratorio en el Departamento de Nutrición Humana y Dietética al inicio y al final del estudio (T1, T2; antes/después de LH+BL Suplementación [LH+BL pre y LH+BL Post] y suplementación por PLA [Plapre and Plapost]). El protocolo principal del estudio incluyó una evaluación de los hábitos dietéticos en la visita al estudio T1. Se realizaron mediciones de peso, altura, composición corporal, densidad ósea, respuesta al estrés y estrategias de combate de estrés, evaluación de salud mental, así como de muestreo de saliva y heces en cada una de las visitas al estudio T1 y T2. Las medidas de resultado primarias son la composición de la microbiota, la intensidad del estrés percibido y los marcadores neuroendocrinos relacionados con el estrés (cortisol salival, DHEA salival y cortisol salival: relación DHEA, cortisol fecal); Las medidas de resultado secundarias son estrategias de combinación de estrés, síntomas psicosomáticos, sentido de coherencia, composición corporal y densidad ósea). Todas las pruebas se realizaron por la mañana al mismo tiempo para el participante. Los participantes declararon que no habían introducido ningún cambio en sus estilos de vida, nutrición o suplementación durante el protocolo de estudio y estaban preparados para cada visita de la misma manera. Además, el contacto telefónico se mantuvo en caso de incumplimiento del protocolo o síntomas gastrointestinales o eventos adversos.

Hubo 20 abandonos del protocolo de estudio. Las principales razones para abandonar fueron la terapia con antibióticos durante el protocolo (n = 10) y la interrupción del estudio sin una razón antes de la segunda visita (n = 10). Hubo 11 abandonos en el LH+BL y 9 en los grupos de PLA. Finalmente, 100 mujeres (23.5 ± 2.7 años; 61.6 ± 9.4 kg de masa corporal; 1.67 ± 0.06 m de altura) completaron el protocolo de estudio completo y se incluyeron en los análisis.

Suplementación En el procedimiento experimental, cada participante se complementó con una dosis crónica de 1 cápsula por día de LH+BL o PLA en una secuencia paralela aleatoria. Los participantes recibieron paquetes de ampolla de cápsulas LH+BL que contenían 3 x 109 CFU de cepas probióticas combinadas de liofilización de la bacteria probiótica Bifidobacterium Longum Rosell®-175 y Lactobacillus Helveticus Rosell®-52 (nombre comercial: Sanprobi®strora) o Capsules de las Plaergénicas. Las cápsulas de PLA contenían solo almidón de papa y estearato de magnesio como rellenos. La carcasa de la cápsula consistía en hidroxipropilmetilcelulosa, y el peso de una sola cápsula era de 420 mg. Los probióticos estaban en cápsulas idénticas como PLA y no podían distinguirse por la apariencia y el sabor. Las cápsulas LH+BL y PLA se obtuvieron de Sanprobi sp. Z O.O. sp. K., (Szczecin, Polonia). La combinación y la concentración de probióticos utilizados en este estudio se basaron en las recomendaciones del fabricante. Los preparativos se administraron a cada participante en sobres marcados con un código único. Según el procedimiento de cegamiento recomendado, las formulaciones fueron preparadas de antemano por el laboratorio del fabricante, que no participó directamente en el estudio. En cuanto a la doble ciego, ni los investigadores ni los participantes sabían si se administraron LH+BL o PLA. Los detalles de la aleatorización fueron anonimizados y revelados después del cese del protocolo.

Dieta y estilo de vida

Los datos dietéticos se recopilaron utilizando el cuestionario validado de frecuencia de alimentos Kompan® publicado en la plataforma de intercambio de archivos de Google Drive. El cuestionario incluía alimentos comúnmente consumidos por la población polaca, agrupada en 25 categorías de alimentos. Se pidió a los participantes que seleccionaran con qué frecuencia consumían cada tipo de alimentos en los últimos 12 meses. Las respuestas de frecuencia disponibles se convirtieron en frecuencias diarias y consistieron en nunca (0 veces/día), 1-3 veces al mes (0.06 veces/día), una vez a la semana (0.14 veces/día), algunas veces a la semana (0.5 veces/día), una vez al día (1.0 veces/día), o unas pocas veces al día (2.0 veces/día). La calidad de la dieta fue descrita por dos puntajes de calidad de la dieta: el índice de dieta pro-saludable (PHDI) y el índice de dieta poco saludable (NHDI). Ambos puntajes de calidad de la dieta se calcularon como la suma de frecuencias diarias (en tiempos/día) del consumo de alimentos. El PHDI incluyó 10 artículos que representan alimentos potencialmente pro-saludables (pan integral, cereales integrales, leche, bebidas de leche fermentadas, requesón, carne blanca, pescado, legumbres, frutas y verduras) con un puntaje total que varía de 0 a 20 veces/día. El NHDI incluyó 14 alimentos que representan alimentos potencialmente poco saludables (pan blanco, cereales refinados, comida rápida, alimentos fritos, mantequilla, manteca, queso, cortes fríos, carne roja, dulces, carnes enlatadas, bebidas endulzadas, bebidas energéticas, alcohol) con un rango total de puntaje 0-28 veces/día. Ambos puntajes de calidad de la dieta se recalcularon para estandarizar el rango de puntaje total a 0-100 puntos para cada uno. Se utilizaron las siguientes fórmulas:

phdi (en puntos) = (100/20) × suma de la frecuencia de consumo de 10 alimentos (tiempos/día) NHDI (en puntos) = (100/28) × suma de la frecuencia de consumo de 14 alimentos (tiempos/día) Los comportamientos estimados de estilo de vida incluían la frecuencia de las comidas diarias, los bocadillos, la sal y el uso de azúcar, la actividad física, el fumar, el fumar, el fumar, el fumar, el fumar, el fumar, los comportamientos

La masa corporal y la evaluación de la composición corporal se tomaron mediciones antropométricas al comienzo de cada visita de estudio para garantizar condiciones iguales para los procedimientos de prueba. Antes del análisis de la composición del cuerpo, el peso y la altura se midieron al 0.1 cm más cercano y 0.1 kg, para la altura y el peso, respectivamente, utilizando una escala calibrada con un estadiómetro (WB3007311, Tanita Corporation, Japón) y el índice de masa corporal (IMC). El análisis de la composición corporal (FM y FFM) se realizó por la absorptiometría de rayos X de doble energía (dispositivo de prodigio lunar GE-Sistemas médicos de atención médica de electricidad general, Europa, Bélgica) y pletismografía de desplazamiento utilizando BOD POD (Life Medeatement Inc., Concord, CA, EE. UU.). Todas las mediciones se realizaron en la mañana (7: 30-10: 00 AM) y, mientras que el ayuno se recomendó (se recomendó la ingesta de agua), con la temperatura ambiente mantenida a 20-22 ° C. Todos los participantes evitaron el ejercicio extenuante durante al menos 24 horas antes de cada visita.

Mediciones de densidad mineral ósea Todos los participantes del estudio se sometieron a absorptiometría de rayos X de doble energía (DXA) por el mismo técnico utilizando un densitómetro de prodigio lunar GE (General Electrics Healthcare Medical Systems, Europa, Bélgica). La dosis efectiva (μSV) para este densitómetro es 0.05. Los parámetros obtenidos de la medición incluyeron contenido mineral óseo (BMC, G) y densidad mineral ósea (DMO, G/CM2). Las puntuaciones Z BMD se generaron utilizando el software de base de datos DXA de sexo, raza y edad específica de la edad. Los estándares de la Sociedad Internacional de Densitometría Clínica (ISCD) recomiendan el uso de puntajes Z para evaluar la DMO en mujeres premenopáusicas. La densidad mineral ósea (DMO) se comparó con mujeres jóvenes sanas en cada medición (columna lumbar, cadera total, cuello femoral, radio) y una puntuación T T. Según la definición de la Organización Mundial de la Salud, la osteoporosis se indica por un puntaje T inferior a -2.5 SD, y la osteopenia por un puntaje T entre -1 y -2.5 SD. Los parámetros óseos se midieron de acuerdo con la metodología de densitometría adoptada y la Sociedad Internacional de Recomendaciones de Densitometría Clínica. Se utilizó un programa de control de calidad estándar, que incluía verificar el equipo DXA para verificar la estabilidad del sistema y una revisión visual de todas las imágenes por parte de un examinador experimentado. El escáner se calibró diariamente como recomendó el fabricante de prodigio Lunar DXA GE. Se utilizó un bloque de calibración estándar. El estudio fue realizado por un equipo con las certificaciones necesarias para realizar densitometría periférica y axial y experiencia en densitometría.

Se medirán la recolección de saliva y el análisis de la muestra relacionados con los marcadores neuroendocrinos relacionados con el estrés, a saber, el cortisol y el DHEA salival, así como la relación cortisol: DHEA. Antes de la recolección de saliva en el laboratorio, los participantes recibieron instrucciones de abstenerse de consumir cafeína y/o nicotina durante al menos 4 horas y alcohol durante al menos 24 horas. Se recogieron muestras de saliva no estimuladas de los participantes en ayunas en tubos de plástico Eppendorf desechables utilizando el método de escupir durante 10 minutos mientras los sujetos descansaban. Primero se pidió a los participantes que enjuague la boca con agua durante aproximadamente 30 segundos y 10 minutos antes de proporcionar una muestra de saliva. La saliva se recogió entre las 9:00 y las 11:00 a.m. para minimizar las diferencias circadianas. Las muestras del material (2 tubos por persona), inmediatamente después de la recolección, se colocaron en un congelador a -80 ° C y se almacenaron hasta el envío al laboratorio (Centro de Investigación y Desarrollo de Sanprobi en Szczecin). Antes del análisis, las muestras se calentarán y centrifugarán a 1000 x g durante 20 minutos para eliminar el material de partículas. El cortisol y el DHEA en la saliva humana se medirán con kits disponibles comercialmente utilizando un método inmunoenzimático de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Todas las muestras se procesarán por duplicado durante el mismo ensayo. Los análisis estadísticos se realizarán utilizando la media de las dos mediciones replicadas. Los valores sin procesar se transformarán log, y se excluirán las observaciones superiores a tres SD a partir de la media para cada tiempo de muestreo.

La recolección de muestras fecales y el muestreo fecal de análisis de microbiota y cortisol se llevaron a cabo de la siguiente manera: las heces se recolectaron en casa el día de llegada al laboratorio o el día anterior, se enfriaron inmediatamente después de la defecación en el refrigerador del sujeto de prueba y se transfirieron al laboratorio. Las muestras se almacenaron a -80 ° C hasta el análisis. El análisis de la microbiota intestinal se realizará en el laboratorio del Centro de Investigación y Desarrollo de Sanprobi en Szczecin utilizando la tecnología de secuenciación de próxima generación de Illumina. La extracción de ADN de la muestra fecal se realizará utilizando kits de aislamiento disponibles comercialmente, seguido de una evaluación de la calidad (integridad) del aislado. El siguiente paso es la amplificación de ADN por PCR utilizando cebadores específicos complementarios a secuencias de genes conservadas a cada lado de la región objetivo. Los fragmentos hipervariables V2 y V3 de la región, que consisten en aproximadamente 400-500 pares de bases del gen 16S RRN procariotas, se duplican. Los amplicones de cada muestra están codificados con una secuencia corta de "código de barras" exclusiva de cada muestra. Finalmente, la secuenciación "multiplexada" de alto rendimiento de todas las muestras se realiza en una sola ejecución de secuenciación.

Las muestras fecales para el análisis de cortisol se calentarán y se diluirán con agua, y el procedimiento posterior es el mismo que para las muestras de saliva preparadas para el análisis de cortisol, como se describió anteriormente.

Dimensiones de personalidad La escala de Inventario de Personalidad de Diez ítems (TIPI) es un cuestionario autoadministrado de 10 ítems validado diseñado para evaluar los factores psicosociales. El tipi fue diseñado por Gosling et al. Como un breve instrumento para medir las dimensiones de la personalidad Big Five con dos elementos para cada rasgo (un elemento estándar y un elemento de puntaje inverso en cada rasgo). Estas dimensiones de la personalidad comprenden extraversión (ser social, entusiasta), amabilidad (confiabilidad, ser empático), conciencia (autodisciplina, confiabilidad, autoeficacia), estabilidad emocional (la dimensión opuesta al neurotismo; ser equilibrado, tranquilo, capacidad de restricción) y la apertura (curiosidad y creatividad, ser de mente abierta). Las respuestas en la escala de personalidad se midieron en una escala Likert de siete puntos y se puntuaron como 1 = Totalmente en desacuerdo, 2 = en desacuerdo moderadamente, 3 = en desacuerdo un poco, 4 = ni de acuerdo ni en desacuerdo, 5 = de acuerdo un poco, 6 = de acuerdo moderadamente, 7 = de acuerdo con fuerza. Las respuestas a los elementos de puntaje inverso se recodificaron para ser consistentes con los elementos estándar. Luego, el promedio del ítem estándar y el elemento de puntaje inverso recodado se calcularon para compensar la puntuación de escala de cada dimensión, que varió de 1 a 7. Las puntuaciones de escala más alta reflejan un nivel más alto de cada rasgo.

Cada puntaje de la escala TIPI se clasificó por el enfoque conceptual, que dividía la escala de acuerdo con si los puntajes eran iguales a estar "de acuerdo" o más altos (en promedio) crear dos categorías: TIPI inferior (<5 como en desacuerdo) y categorías TIPI más altas (5-7 como de acuerdo). Cualquier puntaje de escala de dimensión que produjo puntajes de acuerdo y más altos indicó un nivel más alto de ese rasgo y se consideró como una categoría TIPI más alta. La confiabilidad interna de este cuestionario con el valor alfa de un Cronbach fue de 0.59. El cuestionario TIPI se administró solo una vez durante la visita inicial de T1.

El estrés percibido y la evaluación de la salud mental recolectamos 5 escalas de autoinforme (sub) relacionadas con amplios dominios de estrés percibido y salud física/mental: escala de estrés percibido (PSS-10), orientaciones breves de afrontamiento a problemas experimentados por inventario experimentado (breve-cope), sentido de la coherencia 13-item (SOC-13), cuestionario general de salud GHQ-28 e inventario de la personalidad del elemento diez del elemento (TIPI). Todas las pruebas (en una versión polaca estandarizada) se basaron en cuestionarios de autoevaluación publicados en la plataforma de intercambio de archivos de Google Drive.

El formulario PSS-10 se utilizó para evaluar la intensidad del estrés relacionado con las propias experiencias de vida en el último mes y fue una versión modificada de la escala de estrés percibida desarrollada por Cohen. Los encuestados informaron en una escala Likert de 5 puntos (0 = nunca, 1 = casi nunca, 2 = a veces, 3 = bastante a menudo, 4 = muy a menudo) en la que las situaciones en sus vidas durante el mes pasado eran impredecibles, incontrolables y abrumadoras. Los puntajes para los cuatro elementos identificados positivamente (ítems 4, 5, 7, 8) se invierten. La puntuación máxima es 40, con puntajes más altos que indican niveles más altos de estrés percibido. De acuerdo con las instrucciones, los puntajes en el rango de 0-13 indican un bajo nivel de estrés, las puntuaciones en el rango de 14-26 indican un nivel moderado de estrés, y las puntuaciones en el rango de 27-40 indican un alto nivel de estrés percibido. En este estudio, la escala tenía un alfa de Cronbach (α) de 0.85. Los puntajes en la escala se compararon entre las evaluaciones iniciales y finales.

El breve Cope es una versión abreviada de 28 ítems del cuestionario de inventario COPE por Carver et al. y se utilizó para evaluar las estrategias de afrontamiento situacionales (formas en que las personas hacen frente a un evento estresante específico) y estrategias de afrontamiento disposicional (formas habituales en que las personas hacen frente al estrés en la vida cotidiana). En su versión original, este inventario reveló niveles adecuados de consistencia interna, además de mostrar pruebas de la validez de su estructura de factores. Utilizamos Mini-Cope, la versión polaca acortada del cuestionario de inventario de COPE. La escala mide 14 estrategias de afrontamiento con base teórica o empíricamente fundamentada (subescalas de afrontamiento, cada una con dos elementos): autodistracción, afrontamiento activo, negación, uso de sustancias, apoyo emocional, apoyo de comportamiento, retirada de comportamiento, ventilación, reflexión positiva, humor, humor, aceptación, religión y manzana. Para cada elemento, los encuestados indican si usan la respuesta de afrontamiento en una escala Likert de cuatro puntos (0 = generalmente no hago esto casi en absoluto; 1 = generalmente hago esto raramente; 2 = generalmente hago esto a menudo; 3 = generalmente hago esto casi siempre).

Estas subescalas se clasificaron más en el modelo de factor de segundo orden, que consistió en "estrategias de afrontamiento adaptativas" (uso de apoyo emocional, replanteamiento positivo, aceptación, religión, humor, afrontamiento activo, planificación y uso de apoyo instrumental) y "estrategias de afrontamiento desadaptativas" (ventilación, uso de sustancias, discapacidad de comportamiento, autodistracción y auto-discusión). El alfa de Cronbach para las subescalas originales varió de 0.66 a 0.70. La puntuación general de cada estrategia de afrontamiento es la suma de las puntuaciones de dos elementos.

La escala de sentido de coherencia SOC-13 es una escala de 13 ítems adaptada de una escala más larga de 29 ítems desarrollada por Antonovsky. Esta escala es un cuestionario de autoinforme y consta de tres subescalas: significado (cuatro ítems), comprensibilidad (cinco ítems) y gestión (cuatro ítems). Cada elemento contiene respuestas que cambian entre preguntas y se clasifican de 1 a 7 en una escala Likert. Cinco variables (ítems 1, 2, 3, 7 y 10) están redactadas negativamente y, por lo tanto, se codifican hacia atrás cuando los elementos se suman para obtener un total de elementos. SOC se calculó como la media para cada individuo que había respondido al menos 10 de los 13 elementos (rango, 1.0-7.0) Una puntuación más alta representa un mayor sentido de coherencia. Los estudios de las propiedades psicométricas de la escala SOC-13 han demostrado altos niveles de validez y confiabilidad, y la consistencia interna es muy buena, con los alfas de Cronbach que varían de 0.70 a 0.92 en los 127 estudios que utilizan el SOC-13. En el estudio actual, las estimaciones de confiabilidad para esta escala varían de α = 0.77-0.79.

El cuestionario de salud general de GHQ-28 fue desarrollado por Goldberg en 1978. Es una medida de angustia emocional en las últimas semanas que contiene 28 ítems y podría usarse como una herramienta de detección comunitaria y para la detección de trastornos psiquiátricos no específicos entre las personas en el entorno de atención primaria. Se les preguntó a los participantes sobre los síntomas y/o la incomodidad que habían experimentado recientemente. Cada elemento se clasifica en una escala Likert de 4 puntos para indicar la gravedad de los síntomas de 0 a 3 (0 = nada, 1 = no más de lo habitual, 2 = un poco más de lo habitual, 3 = mucho más de lo habitual). Los puntajes para los siete elementos identificados positivamente (ítems 4, 5, 7, 8) se invierten (1 = más de lo habitual, 2 = como de costumbre, 3 = menos de lo habitual, 4 = mucho menos de lo habitual). Los artículos se suman en cuatro subescalas: síntomas somáticos (ítems 1-7), ansiedad/insomnio (ítems 8-14), disfunción social (ítems 15-21) y depresión mayor (ítems 22-28). Una puntuación alta GHQ-28 indica un caso psiquiátrico probable. Los datos normativos para la población general evaluada indican un punto de corte ≥ 5. La confiabilidad se calculó utilizando el coeficiente alfa de Cronbach y fue de 0.89-0.90.

Estado socioeconómico y eventos estresantes Un cuestionario adicional fue formulado por los autores, incluido el estado socioeconómico (SES) (edad, lugar de residencia, estado familiar, nivel de educación) y preguntas sobre cualquier evento estresante (SES) experimentado durante el mes anterior.

Análisis estadístico Las variables continuas se presentan como desviación media y estándar y variables de la escala como medianas y rangos intercuartiles (25% a 75%). Las variables categóricas se presentan como frecuencias. Las diferencias entre las variables categóricas se analizan mediante la prueba exacta de Fisher. Todas las variables continuas se prueban para la distribución normal utilizando la prueba Shapiro-Wilk, así como la curtosis, la asimetría y una evaluación gráfica de la distribución de cada datos variables. Los procedimientos de transformación de datos (por ejemplo, transformación de box-Cox) se consideran si dan como resultado una distribución normal de todas las variables transformadas. Las comparaciones entre los puntos de tiempo de base y posterior a la suplementación (visitas T1 y T2) en los grupos LH+BL o PLA se determinan utilizando la prueba t para variables dependientes y el tamaño del efecto expresado como el D de Cohen. Las comparaciones entre los grupos en los cambios previos al post dentro de las variables se determinan utilizando la prueba t para variables independientes. Si se viola la normalidad, los datos se analizan utilizando la prueba de rango firmado de Wilcoxon con un tamaño de efecto expresado como el coeficiente de correlación de rango (RC). La prueba U de Mann-Whitney se utiliza para comparar las variables para probar las diferencias entre los grupos placebo y prebióticos. Un alfa de <0.05 se considera estadísticamente significativo. Los datos se analizan utilizando el software Statistica 13.3 (Statsoft Inc., EE. UU.).