Effekterna av utvalda probiotiska bakterier på tarmmikrobiota, stressindikatorer och näringsstatus hos unga vuxna (PROBASTRESS)

Introduktion Antalet personer som får psykiatriska tjänster har ökat under de senaste åren. I Polen har antalet personer med psykiska störningar i poliklinisk vård ökat med 150 000 under de senaste åren och nådde totalt mer än 1,2 miljoner patienter. Antalet personer som kräver psykologisk och psykiatrisk vård förväntas växa under de kommande decennierna. Den använda psykofarmakoterapin ger inte alltid de förväntade behandlingsresultaten. Som ett resultat ägnas mer och mer uppmärksamhet åt icke-farmakologiska interaktioner. Under de senaste åren har det skett en växande mängd forskning om förhållandet mellan näring och dess inverkan på det mentala tillståndet för människor med psykiska störningar. Mat- och näringsvetenskap, psykodietetik och nutripsychiatry, blomstrande vetenskapliga områden, får framträdande. Forskningsresultat indikerar att närings- och stress-coping-resurser påverkar en individs hälsa. Rollen för de probiotiska bakterierna lactobacillus Helveticus och Bifidobacterium longum som en del av det mänskliga mikrobiomet har också studerats inom denna sfär, och resultatet av ett växande antal papper bekräftar deras breda utbud av tillämpningar och positiva effekter på olika hälsoområden. Tidigare studier har visat att komplettering med Bifidobacterium longum eller en sammansättning av dem med andra bakteriestammar påverkade bland annat benhälsan hos postmenopausala kvinnor, lindrade gastrointestinal obehag, minskad uppfattad stress och förbättrad depression, ångest och humörindikatorer i vuxna i vuxna. Å andra sidan påverkade tillskott med en sammansättning av flera bakteriestammar, inklusive Lactobacillus Helveticus och Bifidobacterium longum, vilket minskade fettmassan hos överviktiga och överviktiga individer. Probiotisk tillskott verkar ha stor potential för att förbättra hälsan och livskvaliteten, inklusive förebyggande och behandling av depressiva och ångeststörningar och förmågan att hantera stress. Ändå finns det fortfarande en brist på forskning inom detta område, särskilt när det gäller Lactobacillus Helveticus ensam och kombinationen av Lactobacillus Helveticus och Bifidobacterium longum -stammar.

Med detta i åtanke planerades ett forskningsprojekt för att undersöka effekterna av både probiotiska tillskott och kostkvalitet på ett brett spektrum av psykologiska, mikrobiologiska, biokemiska och kliniska resultat. Studien syftade till att utvärdera effekterna av riktad tillskott med en ny sammansättning av probiotiska stammar Lactobacillus Helveticus och Bifidobacterium longum på tarmmikrobiota-sammansättning och kvalitet, stressrelaterade neuroendokrina markörer, mental hälsa, uppfattade stressintensitet, psykosomatiska svar och coping-strategier samt kroppssamband och bendensitet i unga kvinnor, mental hälsa, uppfattade stressintensitet, psykosomatiska svar och samarbetsundersökningar som kroppssammanträden och bendensitet i unga kvinnor, mental hälsa, uppfattade stressintensitet, psykosomatiska svar och coping-strategier samt kroppsämne och benmättnader i unga kvinnor, mental hälsa, uppfattad stressintensitet, psykosomatiska svar och samarbetssteg för kroppssammanhang och bendensitet i unga kvinnor, mental hälsa, uppfattade stressintensitet, psykosomatiska svar och samarbetssteg för kroppssammanträde. We hypothesised that supplementation with probiotic bacteria at a daily dose of 3 x 109 CFU, irrespective of diet quality, would result in changes in the gut microbiota towards higher proportions of beneficial bacteria, reduce stress-related neuroendocrine markers and the intensity of perceived stress and its psychosomatic symptoms, and improve stress-coping strategies, mental health potential and have a beneficial effect on body composition components and bone Densitet hos friska unga kvinnor, jämfört med placebo.

Studiedesign och befolkning Denna randomiserade, placebokontrollerade, 2-arm, parallella, dubbelblinda interventionsförsök genomfördes i några vågor från september 2023 till mars 2024 2023 vid avdelningen för mänsklig näring och dietetik (Poznań univrsity of Life Sciences). Varje våg började under höstmånaderna och slutfördes under vintermånaderna. Provstorleken beräknades med Gpower -programvara (version 3.1.9.7, Universität Düsseldorf, Tyskland). Kortfattat, för att upptäcka en signifikant förändring i upplevd stressnivå med ett tvåsidigt t-test, en signifikansnivå på 5%och en statistisk effekt på 80%bestämdes en provstorlek på 110 med tanke på en 30%bortfall. Ursprungligen deltog 120 kvinnor i denna studie. Dessa var bara kvinnor i tidig vuxen ålder. Behörighetskriterier för studien inkluderade kvinnligt kön, ålder 20-30 år, BMI <30 kg/m2. Uteslutningskriterier var: diagnostiserade kroniska och/eller allvarliga hälsoproblem (t.ex. Diabetes, astma, hypertoni, njursjukdomar), graviditet, tar eventuell probiotika i 8 veckor före registrering till studieprotokollet, nyligen och nuvarande antibiotikabehandling, användning av farmaceutisk antidepressiva behandling. Alla deltagare var friska frivilliga som var helt informerade om studiens mål och gav informerat samtycke för deltagande innan de gick in i studien. Studieprotokollet granskades och godkändes av bioetikkommittén vid Karol Marcinkowski University of Medical Sciences i Poznan, Polen (tillstånd nr. 244/23, utfärdad den 9 mars 2023). Studien överensstämmer med Consort -uttalandet om randomiserade studier. Alla förfaranden följde riktlinjerna för 2013 -deklarationen om Helsingfors och god klinisk praxis.

De inskrivna frivilliga tilldelades jämnt, slumpmässigt och tilldelades blindt till antingen intervention (LH+BL), fick probiotiska bakterier eller placebo (PLA) -gruppen för 12 veckors tillskott. Randomisering genomfördes av tilläggstillverkaren med datorgenererade koder med användning av forskning Randomizer (www.randomizer.org). Hela studieprotokollet inkluderade bekanta och två laboratoriebesök vid avdelningen för mänsklig näring och dietetik vid baslinjen och i slutet av studien (T1, T2; före/efter LH+BL -tillskott [LH+BL PRE och LH+BL Post] och PLA -tillskott [Plapre och Plapost]). Studiens huvudprotokoll inkluderade en bedömning av dietvanor vid T1 -studiebesöket. Mätningar av vikt, höjd, kroppssammansättning, bentäthet, stressrespons och stress-coping-strategier, bedömning av mental hälsa samt saliv- och avföringsprovtagning genomfördes vid vart och ett av T1- och T2-studiebesöken. De primära resultatmåtten är mikrobiota-sammansättning, upplevd stressintensitet och stressrelaterade neuroendokrina markörer (salivkortisol, salivdhea och salivkortisol: DHEA-förhållande, fekal kortisol); De sekundära resultatmåtten är stress-coping-strategier, psykosomatiska symtom, känsla av koherens, kroppssammansättning och bentäthet). All testning utfördes på morgonen samtidigt för deltagaren. Deltagarna förklarade att de inte hade infört några förändringar i sin livsstil, näring eller tillskott under studieprotokollet och var beredda för varje besök på samma sätt. Dessutom bibehölls telefonkontakt vid bristande efterlevnad av protokollet eller gastrointestinala symtom eller biverkningar.

Det fanns 20 bortfall från studieprotokollet. De huvudsakliga orsakerna till att släppa av var antibiotikabehandling under protokollet (n = 10) och avbrott av studien utan anledning före det andra besöket (n = 10). Det fanns 11 bortfall i LH+BL och 9 i PLA -grupperna. Slutligen slutförde 100 kvinnor (23,5 ± 2,7 år; 61,6 ± 9,4 kg kroppsmassa; 1,67 ± 0,06 m höjd) hela studieprotokollet och inkluderades i analyserna.

Tillägg i den experimentella proceduren kompletterades varje deltagare med en kronisk dos av 1 kapsel per dag LH+BL eller PLA i en randomiserad, parallell sekvens. Deltagarna var försedda med blisterförpackningar av LH+BL-kapslar innehållande 3 x 109 CFU av kombinerade frystorkade probiotiska stammar av probiotiska bakterier Bifidobacterium longum Rosell®-175 och Lactobacillus Helveticus Rosell®-52 (Trade Name: SanProbi®Stress) eller Pla Capsules Kontsuler Contination AnnoAny Annoenyerget. PLA -kapslarna innehöll endast potatisstärkelse och magnesiumstearat som fyllmedel. Kapselskalet bestod av hydroxipropylmetylcellulosa, och vikten av en enda kapsel var 420 mg. Probiotika var i identiska kapslar som PLA och kunde inte särskiljas av utseende och smak. LH+BL- och PLA -kapslar erhölls från Sanprobi sp. z o.o. sp. K., (Szczecin, Polen). Kombinationen och koncentrationen av probiotika som användes i denna studie baserades på tillverkarens rekommendationer. Förberedelserna administrerades till varje deltagare i kuvert markerade med en unik kod. Enligt den rekommenderade förblindningsförfarandet framställdes formuleringarna i förväg av tillverkarens laboratorium, som inte var direkt involverad i studien. När det gäller dubbelblindning visste varken forskarna eller deltagarna om LH+BL eller PLA administrerades. Detaljer om randomisering anonymiserades och avslöjades efter protokollets upphörande.

Diet och livsstil

Kostdata samlades in med hjälp av Validated Kompan® Food Frequency Questionnaire som publicerades på Google Drive-fildelningsplattformen. Frågeformuläret inkluderade livsmedel som vanligtvis konsumeras av den polska befolkningen, grupperad i 25 livsmedelskategorier. Deltagarna ombads att välja hur ofta de konsumerade varje typ av mat under de senaste 12 månaderna. Tillgängliga frekvenssvar konverterades i dagliga frekvenser och bestod av aldrig (0 gånger/dag), 1-3 gånger i månaden (0,06 gånger/dag), en gång i veckan (0,14 gånger/dag), några gånger i veckan (0,5 gånger/dag), en gång om dagen (1,0 gånger/dag), eller några gånger om dagen (2,0 gånger/dag). Dietkvaliteten beskrevs av två poäng för dietkvalitet: det pro-hälsosamma dietindexet (PHDI) och det ohälsosamma dietindexet (NHDI). Båda poängen för dietkvalitet beräknades som summan av dagliga frekvenser (i tider/dag) för matvarakonsumtion. PHDI inkluderade 10 föremål som representerar potentiellt pro-hälsosamma livsmedel (fullkornsbröd, fullkornspannmål, mjölk, jäsade mjölkdrycker, keso, vitt kött, fisk, baljväxter, frukt och grönsaker) med en total poäng som sträcker sig från 0-20 gånger/dag. NHDI inkluderade 14 matvaror som representerade potentiellt ohälsosamma livsmedel (vitt bröd, raffinerade spannmål, snabbmat, stekt mat, smör, späck, ost, förkylning, rött kött, godis, konserverat kött, sötade drycker, energidrycker, alkohol) med en total poängintervall 0-28 gånger/dag. Båda poängen för dietkvalitet beräknades för att standardisera det totala poängområdet till 0-100 poäng för varje. Följande formler användes:

PHDI (i poäng) = (100/20) × summa av frekvensen av konsumtion av 10 matvaror (tider/dag) NHDI (i poäng) = (100/28) × summa av frekvensen av konsumtion av 14 matvaror (tider/dag) uppskattade livsstilsbeteenden inkluderade frekvens av dagliga måltider, snacking, salt och sockeranvändning, fysiska aktiviteter, fysiska aktiviteter, etc.

Bedömning av kroppsmassa och kroppssammansättning Antropometriska mätningar gjordes i början av varje studiebesök för att säkerställa lika villkor för testförfarandena. Innan kroppssammansättningsanalys mättes vikt och höjd till närmaste 0,1 cm respektive 0,1 kg för höjd och vikt, med användning av en kalibrerad skala med en stadiometer (WB3007311, Tanita Corporation, Japan) respektive kroppsmassaindex (BMI). Kroppskompositionsanalys (FM och FFM) utfördes av både dubbla energi röntgenabsorptiometri (GE Lunar Prodigy-enhet-Allmänna elektriska sjukvårdssystem, Europa, Belgien) och förskjutningspletysmografi med BOD POD (Life Measurement Inc., Concord, CA, USA). Alla mätningar utfördes på morgonen (7: 30-10: 00 AM) och medan fasta (vattenintag rekommenderades), med omgivningstemperaturen upprätthålls vid 20-22 ° C. Alla deltagare undvek ansträngande träning i minst 24 timmar före varje besök.

Benmineraldensitetsmätningar Alla studiedeltagare genomgick dubbel-energi röntgenabsorptiometri (DXA) av samma tekniker med hjälp av en GE Lunar Prodigy-densitometer (General Electrics Healthcare Medical Systems, Europa, Belgien). Den effektiva dosen (μSV) för denna densitometer är 0,05. Parametrar erhållna från mätningen inkluderade benmineralinnehåll (BMC, G) och benmineraltäthet (BMD, G/CM2). BMD Z-poäng genererades med användning av köns-, ras- och åldersspecifika normativa DXA-databasprogramvaru-Enco. International Society for Clinical Densitometry (ISCD) -standarder rekommenderar användning av Z-poäng för att bedöma BMD hos premenopausala kvinnor. Benmineraltäthet (BMD) jämfördes med friska unga kvinnor vid varje mätning (ländryggen, total höft, femoral hals, radie) och en T-poäng beräknades. Enligt Världshälsoorganisationens definition indikeras osteoporos av en T -poäng mindre än -2,5 SD och osteopeni med en T -poäng mellan -1 och -2,5 SD. Benparametrar mättes enligt den antagna densitometri -metodiken och International Society for Clinical Densitometry -rekommendationerna. Ett standardkvalitetskontrollprogram användes, som inkluderade kontroll av DXA -utrustningen för att verifiera systemstabilitet och en visuell översyn av alla bilder av en erfaren examinator. Skannern kalibrerades dagligen eftersom DXA GE Lunar Prodigy -tillverkaren rekommenderade. Ett standardkalibreringsblock användes. Studien utfördes av ett team med nödvändiga certifieringar för att utföra perifer och axiell densitometri och erfarenhet av densitometri.

Salivsamling och provanalys stressrelaterade neuroendokrina markörer, nämligen salivkortisol och DHEA, kommer att mätas, liksom kortisol: DHEA-förhållandet. Innan Saliv -samlingen i laboratoriet instruerades deltagarna att avstå från att konsumera koffein och/eller nikotin i minst 4 timmar och alkohol i minst 24 timmar. Ostimulerade salivprover uppsamlades från fasta deltagare i engångs Eppendorf -plaströr med användning av spottmetoden i 10 minuter medan försökspersonerna vilade. Deltagarna ombads först att skölja munnen med vatten i cirka 30 sekunder och 10 minuter innan de tillhandahöll ett salivprov. Saliv samlades mellan 9:00 och 11:00 för att minimera cirkadiska skillnader. Prover av materialet (2 rör per person), omedelbart efter insamling, placerades i en frys vid -80 ° C och lagrades tills leverans till laboratoriet (Sanprobi Research and Development Center i Szczecin). Före analysen kommer prover att värmas och centrifugeras vid 1000 x g under 20 minuter för att avlägsna partikelformigt material. Kortisol och DHEA i mänsklig saliv kommer att mätas med kommersiellt tillgängliga satser med hjälp av en immunoenzymatisk metod enligt tillverkarens instruktioner. Alla prover kommer att behandlas i duplikat under samma analys. Statistiska analyser kommer att utföras med medelvärdet för de två replikatmätningarna. Råvärden kommer att logtransformeras och observationer större än tre SD: er från medelvärdet för varje provtagningstid kommer att uteslutas.

Fekalprovsamling och mikrobiota och kortisolanalys Fekalprovtagning utfördes enligt följande: Avföring samlades hemma på ankomstdagen vid laboratoriet eller dagen innan, kyldes omedelbart efter avföring i testämnet kylskåp och överfördes till laboratoriet. Prover lagrades vid -80 ° C fram till analys. Analys av tarmmikrobiota kommer att utföras i SanProbi Research and Development Center Laboratory i Szczecin med hjälp av Illumina nästa generations sekvenseringsteknik. DNA -extraktion från fekalprovet kommer att utföras med användning av kommersiellt tillgängliga isoleringssatser, följt av en bedömning av isolatets kvalitet (integritet). Nästa steg är DNA -amplifiering med PCR med användning av specifika primrar som kompletterar med konserverade gensekvenser på vardera sidan av målområdet. V2- och V3-hypervariabla fragmenten i regionen, bestående av cirka 400-500 baspar av de prokaryota 16S RRN-genen, dupliceras. Amplikonerna från varje prov är streckkodade med en kort "streckkod" -sekvens unik för varje prov. Slutligen utförs "multiplexerad" sekvensering med hög genomströmning av alla prover i en enda sekvensering.

Fekala prover för kortisolanalys kommer att värmas och utspädas med vatten, och den efterföljande proceduren är densamma som för salivprover framställda för kortisolanalys, såsom beskrivits ovan.

Personlighetsdimensioner Tio Item Personality Inventory (TIPI) -skalan är en validerad självadministrerad frågeformulär med 10 artiklar utformat för att utvärdera de psykosociala faktorerna. Tipi designades av Gosling et al. som ett kort instrument för att mäta de stora fem personlighetsdimensionerna med två objekt för varje drag (ett standardobjekt och ett omvänd poäng i varje drag). Dessa personlighetsdimensioner omfattar extraversion (att vara social, entusiastisk), behaglighet (pålitlighet, vara empatisk), samvetsgrannhet (självdisciplin, tillförlitlighet, själveffektivitet), emotionell stabilitet (motsatt dimension för neurotism, vara balanserad, lugn, förmåga att återstående stall), och öppenhet (curioositet och skapelse, öppenhet, är öppenhet, är öppet). Svaren i personlighetsskalan mättes på en sju-punkts Likert-skala och poängsatt som 1 = Håller inte med, 2 = Håller inte med måttligt, 3 = håller inte med lite, 4 = varken håller med om eller håller inte med, 5 = Håller med lite, 6 = Håller med måttligt, 7 = Håller med starkt. Svaren på omvända poäng omskodades för att vara förenliga med standardobjekt. Därefter beräknades medelvärdet av standardobjektet och det rekodda omvända objektet för att utgöra varje dimensions skalapoäng, som sträckte sig från 1 till 7. Högre skalor återspeglar en högre nivå för varje drag.

Varje TIPI-skala poäng kategoriserades med det konceptuella tillvägagångssättet, som delade skalan beroende på om poängen var lika med att vara "överens" eller högre (i genomsnitt) för att skapa två kategorier: lägre tipi (<5 som oeniga) och högre tipi-kategorier (5-7 som överens). Alla poäng för dimensionsskala som producerade överensstämmer och högre poäng indikerade att en högre nivå av den egenskapen och betraktades som en högre TIPI -kategori. Detta frågeformulärets interna tillförlitlighet med en Cronbachs alfavärde var 0,59. TIPI -frågeformuläret administrerades endast en gång under det första T1 -besöket.

Upplevd stress- och mentalhälsobedömning Vi samlade in 5 självrapport (SUB) skalor relaterade till breda domäner av upplevd stress och fysisk/mental hälsa: upplevd stressskala (PSS-10), korta copingorienteringar till problem upplevde inventering (kort-kapop), känsla av sammanhängande 13-artiklar (SOC-13), allmän hälsofrågeformulär GHQ-28, och TEN-personlighetsuppfinning (Tipi). Alla tester (i en standardiserad polsk version) baserades på självbedömningsfrågeformulär som publicerades på Google Drive-fildelningsplattformen.

PSS-10-formen användes för att bedöma intensiteten av stress relaterad till ens egna livserfarenheter under den senaste månaden och var en modifierad version av den upplevda stressskalan som utvecklats av Cohen. Respondenterna rapporterade på en 5-punkts Likert-skala (0 = aldrig, 1 = nästan aldrig, 2 = ibland, 3 = ganska ofta, 4 = mycket ofta) i vilken utsträckning situationer i deras liv under den senaste månaden var oförutsägbara, okontrollerbara och överväldigande. Poängen för de fyra positivt identifierade artiklarna (artiklarna 4, 5, 7, 8) vänds. Den maximala poängen är 40, med högre poäng som indikerar högre nivåer av upplevd stress. Enligt instruktionerna indikerar poäng i intervallet 0-13 en låg nivå av stress, poäng i intervallet 14-26 indikerar en måttlig stressnivå och poäng i intervallet 27-40 indikerar en hög nivå av upplevd stress. I denna studie hade skalan en Cronbachs alfa (α) på 0,85. Poäng på skalan jämfördes mellan de initiala och slutliga bedömningarna.

Den korta COPE är en förkortad version av 28-artiklar av Cope Inventory-frågeformuläret av Carver et al. och användes för att utvärdera situationella hanteringsstrategier (sätt som människor hanterar en specifik stressande händelse) och strategier för dispositioner (vanliga sätt människor hanterar stress i vardagen). I sin ursprungliga version avslöjade denna inventering adekvata nivåer av intern konsistens, förutom att visa bevis på giltigheten av dess faktorstruktur. Vi använde minikopt, den förkortade polska versionen av Cope Inventory Questionnaire. Skalan mäter 14 teoretiskt eller empiriskt grundade hanteringsstrategier (coping underskalor, var och en med två artiklar): självdistraktion, aktiv hantering, förnekande, substansanvändning, känslomässiga stöd, instrumentstöd, beteendetal, ventilation, positiva omdeklam, positiva, nekar, acceptans, självförstörning. För varje objekt indikerar respondenterna om de använder coping-svaret på en fyra-punkts Likert-skala (0 = jag brukar inte göra detta nästan alls; 1 = jag brukar göra detta sällan; 2 = jag brukar göra det ofta; 3 = jag brukar göra det nästan alltid).

Dessa underskalor kategoriserades futher i andra ordningens faktormodell, som bestod av "adaptiva copingstrategier" (användning av känslomässigt stöd, positiv omramning, acceptans, religion, humor, aktiv hantering, planering och användning av instrumentalt stöd) och "missanpassande copingstrategier" (ventilation, förnekning, substansering, beteendeuppdrag, självdistans och självbyle) och självbyle. Cronbachs alfa för de ursprungliga underskalorna varierade från 0,66 till 0,70. Den totala poängen för varje hanteringsstrategi är summan av poängen för två artiklar.

Känslan av Coherence Scale SOC-13 är en skala med 13 artiklar anpassad från en längre skala med 29 artiklar utvecklad av Antonovsky. Denna skala är ett självrapportfrågeformulär och består av tre underskalor: meningsfullhet (fyra artiklar), förståelse (fem artiklar) och hanterbarhet (fyra artiklar). Varje objekt innehåller svar som ändras mellan frågor och klassificeras från 1 till 7 på en Likert -skala. Fem variabler (artiklarna 1, 2, 3, 7 och 10) är negativt formulerade och är därför omvändkodade när objekt summeras för att få ett totalt objekt. SOC beräknades som medelvärdet för varje individ som hade svarat på minst 10 av de 13 artiklarna (intervall, 1.0-7.0) En högre poäng representerar en större känsla av sammanhållning. Studier av de psykometriska egenskaperna hos SOC-13-skalan har visat höga nivåer av giltighet och tillförlitlighet, och intern konsistens är mycket bra, med Cronbachs alfas från 0,70 till 0,92 i 127 studier med SOC-13. I den aktuella studien sträcker sig tillförlitlighetsberäkningarna för denna skala från a = 0,77-0,79.

GHQ-28 Allmänna hälsofrågeformulär utvecklades av Goldberg 1978. Det är ett mått på känslomässig besvär under de senaste veckorna som innehåller 28 artiklar och kan användas som ett community-screeningverktyg och för att upptäcka icke-specifika psykiatriska störningar bland individer i primärvården. Deltagarna frågades om symtom och/eller obehag som de nyligen hade upplevt. Varje objekt är betygsatt på en 4-punkts Likert-skala för att indikera symptomens svårighetsgrad från 0 till 3 (0 = inte alls, 1 = inte mer än vanligt, 2 = lite mer än vanligt, 3 = mycket mer än vanligt). Poäng för de sju positivt identifierade artiklarna (artiklarna 4, 5, 7, 8) vänds (1 = mer än vanligt, 2 = som vanligt, 3 = mindre än vanligt, 4 = mycket mindre än vanligt). Objekt summeras över fyra underskalor: somatiska symtom (artiklar 1-7), ångest/sömnlöshet (artiklar 8-14), social dysfunktion (artiklar 15-21) och major depression (artiklar 22-28). En hög GHQ-28-poäng indikerar ett troligt psykiatriskt fall. Normativa data för den utvärderade allmänna befolkningen indikerar en avgränsningspunkt ≥ 5. Tillförlitligheten beräknades med användning av Cronbach Alpha-koefficient och var 0,89-0,90.

Socioekonomisk status och stressande händelser Ett ytterligare frågeformulär formulerades av författarna, inklusive socioekonomisk status (SES) (ålder, bostad, familjestatus, utbildningsnivå) och frågor om stressande händelser (SES) som upplevdes under föregående månad.

Statistisk analys Kontinuerliga variabler presenteras som medel- och standardavvikelse och variabler från skalning som medianer och interkvartila intervall (25% till 75%). Kategoriska variabler presenteras som frekvenser. Skillnader mellan kategoriska variabler analyseras med Fishers exakta test. Alla kontinuerliga variabler testas för normalfördelning med hjälp av Shapiro-Wilk-testet, såväl som kurtos, skevhet och en grafisk utvärdering av distributionen av varje variabeldata. Förfaranden för datatransformation (t.ex. Box-COX-transformation) beaktas om de resulterar i en normal fördelning av alla transformerade variabler. Jämförelser mellan baslinjen och efter leveranstidspunkter (T1- och T2-besök) i LH+BL- eller PLA-grupperna bestäms med användning av t-testet för beroende variabler och effektstorlek uttryckt som Cohens D. Jämförelser mellan grupper i pre-postförändringar inom variabler bestäms med användning av t-testet för oberoende variabler. Om normaliteten kränks analyseras data med hjälp av Wilcoxon-signerad-rank-testet med effektstorlek uttryckt som rangkorrelationskoefficienten (RC). Mann-Whitney U-test används för att jämföra variablerna för att testa för skillnader mellan placebo och prebiotiska grupper. En alfa på <0,05 anses statistiskt signifikant. Data analyseras med STATISTICA 13.3 -programvaran (Statsoft Inc., USA).