Dopad vybraných probiotických bakterií na střevní mikrobiotu, ukazatele stresu a výživový stav mladých dospělých (PROBASTRESS)

Úvod Počet lidí, kteří dostávají psychiatrické služby, se v posledních několika letech zvyšuje. V Polsku se počet lidí s duševními poruchami v ambulantní péči v posledních letech zvýšil o 150 000 a dosáhl celkem více než 1,2 milionu pacientů. Očekává se, že počet lidí vyžadujících psychologickou a psychiatrickou péči poroste v nadcházejících desetiletích. Použitá psychofarmakoterapie ne vždy přináší očekávané výsledky léčby. Výsledkem je, že stále více pozornosti věnuje nefarmakologické interakce. V posledních letech došlo k rostoucímu výzkumu vztahu mezi výživou a jeho dopadem na duševní stav lidí s duševními poruchami. Věda o potravinách a výživě, psychodietie a nutripsychiatry, prosperující vědecká oblast, získávají význam. Zjištění výzkumu naznačují, že zdroje výživy a stresu ovlivňují zdraví jednotlivce. V této sféře byla také studována role probiotických bakterií Lactobacillus helvetitics a Bifidobacterium longum jako součást lidského mikrobiomu a výsledky z rostoucího počtu článků potvrzují jejich široký rozsah aplikací a pozitivní účinky na různé oblasti zdraví. Předchozí studie ukázaly, že suplementace bifidobacterium longum nebo kompozitou z nich s jinými bakteriálními kmeny pozitivně ovlivnilo, mimo jiné, zdraví kostí postmenopauzálních žen, zmírnilo gastrointestinální nepohodlí, snížila vnímaný stres a zlepšila depresi, úzkost a ukazatele nálady u dospělých dospělých u dospělých u dospělých. Na druhé straně, suplementace složením několika bakteriálních kmenů, včetně Lactobacillus helveticus a bifidobacterium longum, ovlivnilo snižování tukové hmoty u obézních a s nadváhou. Zdá se, že probiotická suplementace má velký potenciál pro zlepšení zdraví a kvality života, včetně prevence a léčby depresivních a úzkostných poruch a schopnosti vyrovnat se se stresem. V této oblasti však stále není nedostatek výzkumu, zejména pokud jde o samotný Lactobacillus helvetitic a kombinaci kmenů Lactobacillus helveticus a bifidobacterium longum.

S ohledem na to byl plánován výzkumný projekt pro zkoumání účinků probiotických doplňků a kvality stravy na širokou škálu psychologických, mikrobiologických, biochemických a klinických výsledků. Cílem studie bylo vyhodnotit účinky cílené suplementace novým složením probiotických kmenů Lactobacillus helveticus a Bifidobacterium longum na složení a kvalitu střevního mikrobioty, neuroendokrinní markery, vnímané intenzity stresu, psychosomatické reakce a strategie kopií, které se lišily v mladých ženách. We hypothesised that supplementation with probiotic bacteria at a daily dose of 3 x 109 CFU, irrespective of diet quality, would result in changes in the gut microbiota towards higher proportions of beneficial bacteria, reduce stress-related neuroendocrine markers and the intensity of perceived stress and its psychosomatic symptoms, and improve stress-coping strategies, mental health potential and have a beneficial effect on body composition components and bone Hustota u zdravých mladých žen ve srovnání s placebem.

Návrh studie a populace Tato randomizovaná, placebem kontrolovaná, 2-ramene, paralelní, dvojitě slepá intervenční pokus byla provedena v několika vlnách od září 2023 do března 2024 2023 na Katedře lidské výživy a dietetiky (Poznań Unihrsity of Life Sciences). Každá vlna začala během podzimních měsíců a byla dokončena během zimních měsíců. Velikost vzorku byla vypočtena pomocí softwaru GPOWER (verze 3.1.9.7, Universität Düsseldorf, Německo). Stručně řečeno, pro detekci významné změny vnímané úrovně stresu s oboustranným t-testem, hladinou významnosti 5%a statistickou sílu 80%, byla stanovena velikost vzorku 110, vzhledem k 30%míře předčasného ukončení studia. Do této studie bylo zpočátku zapsáno 120 žen. Jednalo se pouze o ženy v rané dospělosti. Kritéria způsobilosti pro studii zahrnovaly pohlaví žen, věk 20–30 let, BMI <30 kg/m2. Kritéria vyloučení byla: diagnostikovaná chronická a/nebo vážná zdravotní poruchy (např. Diabetes, astma, hypertenze, onemocnění ledvin), těhotenství, užívání probiotik po dobu 8 týdnů před zapsáním studijního protokolu, nedávné a současné léčby antibiotiky, použití farmaceutického antidepresiva. Všichni účastníci byli zdraví dobrovolníci, kteří byli plně informováni o cílech studie a před vstupem do studie poskytli informovaný souhlas s účastí. Protokol studie byl přezkoumán a schválen Bioetickou komisí Karol Marcinkowski University of Medical Sciences v Poznanu v Poznanu v Pozniku (povolení č. 244/23, vydané 9. března 2023). Studie splňuje prohlášení o konsorce o randomizovaných studiích. Všechny postupy se řídily pokyny Helsinské deklarace z roku 2013 a dobré klinické praxe.

Zapsaní dobrovolníci byli rovnoměrně, náhodně a slepě přiřazeni buď ke skupině intervence (LH+BL), přijímající probiotické bakterie nebo skupinu placeba (PLA) po dobu 12 týdnů doplňování. Randomizace byla prováděna výrobcem doplňků s počítačově generovanými kódy pomocí výzkumného randomizer (www.randomizer.org). Celý protokol studie zahrnoval seznámení a dvě laboratorní návštěvy na Katedře lidské výživy a dietetiky na začátku a na konci studie (T1, T2; před/po doplnění LH+BL [LH+BL PRE a LH+BL POST] a PLA Supletation [Plapre and Plapost]). Hlavní protokol studie zahrnoval hodnocení stravovacích návyků při návštěvě studie T1. Při každé ze studijních návštěv T1 a T2 byla provedena měření hmotnosti, výšky, složení těla, hustoty kostí, stresové odezvy a strategií stresu, hodnocení duševního zdraví, jakož i slibů a vzorkování stolice. Primárními měřeními výsledků jsou složení mikrobioty, vnímaná intenzita stresu a neuroendokrinní markery související s stresem (slinný kortizol, slinný DHEA a poměr kortizolu DHEA, fekální kortizol); Sekundárními výsledkovými měřeními jsou strategie sdružování stresu, psychosomatické symptomy, pocit soudržnosti, složení těla a hustotu kostí). Veškeré testování bylo provedeno ráno současně pro účastníka. Účastníci prohlásili, že během studijního protokolu nezavedli žádné změny ve svém životním stylu, výživě nebo doplňování a byli připraveni na každou návštěvu stejným způsobem. Kromě toho byl zachován telefonní kontakt v případě nedodržení protokolu nebo gastrointestinálních příznaků nebo nežádoucích účinků.

Z protokolu studie bylo 20 výpadků. Hlavními důvody ukončení léčby byla antibiotická terapie během protokolu (n = 10) a přerušení studie bez důvodu před druhou návštěvou (n = 10). Ve skupinách PLA bylo 11 výpadků v LH+BL a 9. Nakonec 100 žen (23,5 ± 2,7 let; 61,6 ± 9,4 kg tělesné hmotnosti; 1,67 ± 0,06 m výška) dokončila celý studijní protokol a bylo zahrnuto do analýz.

Doplnění v experimentálním postupu byl každý účastník doplněn chronickou dávkou 1 kapsle denně LH+BL nebo PLA v randomizované paralelní sekvenci. Účastníkům bylo poskytnuto blistrové balíčky kapslí LH+BL obsahujících 3 x 109 CFU kombinovaných probiotických kmenů lyofilizovaných probiotických bakterií bifidobacterium longum Rosell®-175 a Lactobacillus Helveticus rosoll®-52 (Sanprobi®stress) nebo Pla Capsules Assienec. Tobolky PLA obsahovaly pouze plnivy bramborového škrobu a stearátu hořčíku. Shell kapsle sestával z hydroxypropylmethylcelulózy a hmotnost jedné kapsle byla 420 mg. Probiotika byla ve stejných kapslích jako PLA a nemohla být rozlišena vzhledem a chutí. Tobolky LH+BL a PLA byly získány od sanprobi sp. Z O.O. sp. k., (Szczecin, Polsko). Kombinace a koncentrace probiotik použitých v této studii byly založeny na doporučeních výrobce. Přípravy byly spravovány každému účastníkovi obálek označených jedinečným kódem. Podle doporučeného postupu oslepování byly formulace připraveny předem laboratoří výrobce, která se do studie přímo nezúčastnila. Pokud jde o dvojitou zaslepení, ani vědci, ani účastníci nevěděli, zda byl podáván LH+BL nebo PLA. Podrobnosti o randomizaci byly anonymizovány a zveřejněny po ukončení protokolu.

Strava a životní styl

Dietní údaje byly shromažďovány pomocí ověřeného dotazníku pro frekvenci potravin Kompan® zveřejněné na platformě sdílení souborů Google. Dotazník zahrnoval potraviny běžně spotřebované polskou populací, seskupená do 25 kategorií potravin. Účastníci byli požádáni, aby si vybrali, jak často za posledních 12 měsíců konzumovali každý typ jídla. Dostupné frekvenční odpovědi byly přeměněny v denních frekvencích a sestávaly z nikdy (0krát/den), 1-3krát měsíčně (0,06krát/den), jednou týdně (0,14krát/den), několikrát týdně (0,5krát/den), jednou denně (1,0krát denně), nebo několikrát denně). Kvalita stravy byla popsána dvěma skóre kvality stravy: pro-zdravý index stravy (PHDI) a nezdravý index stravy (NHDI). Obě skóre kvality stravy byla vypočtena jako součet denních frekvencí (v časech/den) spotřeby potravin. PhDI zahrnovalo 10 předmětů představujících potenciálně pro-zdravá jídla (celozrnné chléb, celozrnné obiloviny, mléko, fermentované mléčné nápoje, tvaroh, bílé maso, ryby, luštěniny, ovoce a zeleninu) s celkovým skóre od 0 do 20krát denně. NHDI zahrnovalo 14 potravin představujících potenciálně nezdravé potraviny (bílý chléb, rafinované obiloviny, rychlé občerstvení, smažené potraviny, máslo, sýr, sýr, studené řezy, červené maso, sladkosti, konzervované masa, slazené nápoje, energetické nápoje, alkohol) s celkovým rozsahem skóre 0-28krát/den. Obě skóre kvality stravy byla přepočítána pro standardizaci celkového rozsahu skóre na 0-100 bodů za každý. Byly použity následující vzorce:

PhDI (v bodech) = (100/20) × součet frekvence spotřeby 10 potravin (časy/den) NHDI (v bodech) = (100/28) × součet frekvence spotřeby 14 potravin (časy/den) Odhadované chování životního stylu zahrnovalo frekvenci denních jídel, občerstvení, sůl a využití cukru, kouření atd.

Posouzení tělesné hmotnosti a složení těla byla provedena antropometrická měření na začátku každé studie, aby se zajistily stejné podmínky pro zkušební postupy. Před analýzou složení těla byla měřena hmotnost a výška na nejbližší 0,1 cm a 0,1 kg pro výšku a hmotnost, respektive, za použití kalibrovaného stupnice se stadiometrem (WB3007311, Tanita Corporation, Japonsko) a index tělesné hmotnosti (BMI). Analýza složení těla (FM a FFM) byla prováděna jak duální energetickou rentgenovou absorpční absorpcí (Ge Lunar Prodigy Device-General Electrics Healthcare Medical Systems, Evropa, Belgie), tak i vysídlením pomocí BSK POD (Life Measurement Inc., Concord, CA, USA). Všechna měření byla provedena ráno (7: 30-10: 00 dopoledne) a zatímco byl doporučen půst (byl doporučen příjem vody), přičemž okolní teplota byla udržována při 20-22 ° C. Všichni účastníci se vyhnuli namáhavému cvičení po dobu nejméně 24 hodin před každou návštěvou.

Měření hustoty kostních minerálů Všichni účastníci studie podstoupili duální energetickou rentgenovou absorpční absorpci (DXA) stejným technikem pomocí denzitometru GE Lunar Prodigy (General Electrics Healthcare Medical Systems, Evropa, Belgie). Efektivní dávka (μsv) pro tento denzitometr je 0,05. Parametry získané z měření zahrnovaly obsah minerálů kostí (BMC, G) a hustotu minerálů kostí (BMD, G/CM2). BMD Z-skóre byly generovány pomocí normativního softwaru DXA databázového softwaru DXA ENCCO. Standardy Mezinárodní společnosti pro klinickou denzitometrii (ISCD) doporučují použití Z-skóre k posouzení BMD u premenopauzálních žen. Hustota kostních minerálů (BMD) byla porovnána se zdravými mladými ženami při každém měření (bederní páteř, celková kyčle, femorální krk, poloměr) a T-skóre bylo vypočteno. Podle definice Světové zdravotnické organizace je osteoporóza označena T -skóre menším než -2,5 SD a osteopenií T -skóre mezi -1 a -2,5 SD. Parametry kostí byly měřeny podle přijaté metodiky denzitometrie a Mezinárodní společnosti pro doporučení klinické denzitometrie. Byl použit standardní program kontroly kvality, který zahrnoval kontrolu zařízení DXA k ověření stability systému a vizuální revizi všech obrázků zkušeným zkoušejícím. Skener byl kalibrován denně, jak doporučil výrobce DXA GE Lunar Prodigy. Byl použit standardní kalibrační blok. Studie byla provedena týmem s nezbytnými certifikacemi k provedení periferní a axiální denzitometrie a zkušeností v denzitometrii.

Budou měřeny neuroendokrinní markery související se stresem a analýzou vzorků stresu, jmenovitě kortizol a DHEA slin a poměr kortizolu: DHEA. Před sběrem slin v laboratoři byli účastníci instruováni, aby se zdrželi konzumace kofeinu a/nebo nikotinu po dobu nejméně 4 hodin a alkoholu po dobu nejméně 24 hodin. Nestimulované vzorky slin byly odebrány od účastníků nalačno v jednorázových plastových trubicích Eppendorf pomocí metody plivání po dobu 10 minut, zatímco subjekty spočívaly. Účastníci byli nejprve požádáni o opláchnutí úst vodou po dobu přibližně 30 sekund a 10 minut před poskytnutím vzorku slin. Salivy byly shromážděny mezi 9:00 a 11:00, aby se minimalizovaly cirkadiánní rozdíly. Vzorky materiálu (2 zkumavky na osobu), bezprostředně po sběru, byly umístěny do mrazničky při -80 ° C a uloženy až do odeslání do laboratoře (Sanprobi Research and Development Center v szczecinu). Před analýzou budou vzorky zahřívány a odstředěny při 1000 x g po dobu 20 minut, aby se odstranil materiál částic. Kortizol a DHEA v lidských slinách budou měřeny komerčně dostupnými soupravami pomocí imunoenzymatické metody podle pokynů výrobce. Všechny vzorky budou zpracovány duplikátem během stejného testu. Statistické analýzy budou prováděny pomocí průměru dvou replikačních měření. Hodnoty RAW budou transformovány logem a pozorování větší než tři SD z průměru pro každou dobu odběru vzorků budou vyloučeny.

Fekální sběr vzorků a analýza mikrobioty a kortizolu byla provedena fecální vzorkování následovně: výkaly byly shromážděny doma v den příjezdu do laboratoře nebo dne předtím, bezprostředně po defekaci v lednici testovaného subjektu a přeneseny do laboratoře. Vzorky byly skladovány při -80 ° C až do analýzy. Analýza střevní mikrobioty bude prováděna v laboratoři Sanprobi Research and Development Center v SZCZECIN pomocí technologie sekvenování nové generace Illumina. Extrakce DNA z fekálního vzorku bude provedena pomocí komerčně dostupných izolačních souprav, následuje posouzení kvality (integrity) izolátu. Dalším krokem je amplifikace DNA pomocí PCR s použitím specifických primerů komplementárních k konzervovaným genovým sekvencím na obou stranách cílové oblasti. Hypervariabilní fragmenty V2 a V3 v oblasti, sestávající z přibližně 400-500 párů bází prokaryotického genu RRN 16S, jsou duplikovány. Amplikony z každého vzorku jsou čárově kódovány krátkou sekvencí „čárového kódu“ jedinečné pro každý vzorek. Nakonec se v jednom sekvenčním běhu provádí vysoce výkonné „multiplexované“ sekvenování všech vzorků.

Fekální vzorky pro analýzu kortizolu budou zahřívány a zředěny vodou a následný postup je stejný jako u vzorků slin připravených pro analýzu kortizolu, jak je popsáno výše.

Osobnostní rozměry Deset položek Inventory Inventory Scale (TIPI) je validovaný 10-bodová dotazník s vlastním podáváním určeným k vyhodnocení psychosociálních faktorů. Tipi navrhl Gosling et al. Jako krátký nástroj pro měření rozměrů osobnosti Big Five se dvěma položkami pro každou vlastnost (standardní položka a položka s obrácením v každé vlastnosti). Tyto dimenze osobnosti zahrnují extraverzi (sociální, nadšené), souhlasnost (důvěryhodnost, empatická), svědomitost (sebekázeň, spolehlivost, soběstačnost), emoční stabilita (opačná dimenze vůči neuroticismu; být vyvážená, klidná, klidná, klidná, klidná, klidná, klidná, klidná) a otevřenost (otevřenost a kreativita). Odpovědi v měřítku osobnosti byly měřeny na sedmibodové Likertově stupnici a skórovaly jako 1 = silně nesouhlasit, 2 = nesouhlasit mírně, 3 = nesouhlasit, 4 = ani souhlasí, ani nesouhlasí, 5 = souhlasí, 6 = souhlasí, 7 = silně souhlasí. Reakce na položky s reverzním skóre byly překódovány tak, aby byly v souladu se standardními položkami. Poté byl vypočítán průměr standardní položky a recodované položky s reverzní hodnotou, aby se vytvořila skóre stupnice každé dimenze, která se pohybovala od 1 do 7. Skóre vyšších stupnice odráží vyšší úroveň každé vlastnosti.

Každé skóre měřítka Tipi bylo kategorizováno podle koncepčního přístupu, který dělil měřítko podle toho, zda se skóre rovná „souhlasím“ nebo vyššímu (v průměru), aby vytvořila dvě kategorie: nižší tipi (<5 jako nesouhlasně) a vyšší kategorie Tipi (5-7 podle souhlasu). Jakékoli skóre stupnice rozměru, které vytvořilo souhlasí a vyšší skóre, naznačovalo vyšší úroveň této vlastnosti a bylo považováno za kategorii vyšší Tipi. Tento dotazník je vnitřní spolehlivost s Cronbachovou hodnotou 0,59. Dotazník Tipi byl podáván pouze jednou během počáteční návštěvy T1.

Vnímané hodnocení stresu a duševního zdraví jsme shromáždili 5 stupnic vlastního hlášení (sub) souvisejících se širokými doménami vnímaného stresu a fyzického/duševního zdraví: vnímaná měřítko stresu (PSS-10), krátká orientace na zvládání do problémů (briefingový příchod), inventarizace (špičkové přírody), inventarizace (špičkové), Personalita Personality (TipI). Všechny testy (ve standardizované polské verzi) byly založeny na dotaznících sebehodnocení zveřejněné na platformě sdílení souborů Google.

Forma PSS-10 byla použita k posouzení intenzity stresu souvisejícího s vlastními životními zkušenostmi v posledním měsíci a byla upravenou verzí vnímané stresové stupnice vyvinuté Cohenem. Respondenti informovali o 5-bodové Likertově stupnici (0 = nikdy, 1 = téměř nikdy, 2 = někdy 3 = docela často, 4 = velmi často), do jaké míry byly situace v jejich životě během minulého měsíce nepředvídatelné, nekontrolovatelné a ohromující. Skóre pro čtyři položky pozitivně identifikované (položky 4, 5, 7, 8) jsou obráceny. Maximální skóre je 40, přičemž vyšší skóre ukazuje vyšší úrovně vnímaného stresu. Podle pokynů, skóre v rozmezí 0-13 naznačuje nízkou úroveň stresu, skóre v rozmezí 14-26 naznačuje mírnou úroveň napětí a skóre v rozmezí 27-40 naznačuje vysokou úroveň vnímaného stresu. V této studii měla stupnice Cronbachovo alfa (a) 0,85. Skóre na stupnici byla porovnána mezi počátečním a konečným hodnocením.

Krátký Cope je zkrácená 28-bodová verze dotazníku Cope Inventory od Carver et al. a byl použit k posouzení strategií situačního zvládání (způsoby, jak se lidé vyrovnávají s konkrétní stresující událostí) a strategie dispozičního zvládání (obvyklé způsoby, jak se lidé vyrovnávají se stresem v každodenním životě). Ve své původní verzi tento inventář odhalil přiměřenou úroveň vnitřní konzistence, kromě toho, že prokázal důkaz o platnosti struktury faktoru. Použili jsme mini-cope, zkrácenou polskou verzi dotazníku Cope Inventory dotazník. Měřítko měří 14 teoreticky nebo empiricky zakotvené strategie zvládání (zvládání subškálů, každá se dvěma položkami): sebe-distrakce, aktivní zvládání, popírání, náboženství, náboženství, náboženství a náboženství a náboženství a náboženství, náboženství a náboženství, náboženství, náboženství a náboženství, náboženství a náboženství, náboženství, náboženství, náboženství, náboženství. Pro každou položku respondenti uvádějí, zda používají odezvu zvládání na čtyřbodové Likertově stupnici (0 = obvykle to nedělám téměř vůbec; 1 = obvykle to dělám zřídka; 2 = obvykle to dělám často; 3 = obvykle to dělám téměř vždy).

Tyto dílčí škály byly rozděleny do modelu faktoru druhého řádu, který sestával z „adaptivních strategií zvládání“ (použití emoční podpory, pozitivního převzorkování, přijetí, náboženství, humoru, aktivního zvládání, plánování a použití instrumentální podpory) a „maladaptivní strategie kopírování“ a odvzdušňování, popírání, zneužívání behavions, samostatně a samospráva). Cronbachova alfa pro původní dílčí stupnice se pohybovala od 0,66 do 0,70. Celkové skóre každé strategie zvládání je součet skóre dvou položek.

Pocit měřítka koherence SOC-13 je 13-bodová stupnice přizpůsobená z delší 29-bodové stupnice vyvinuté Antonovsky. Toto měřítko je dotazník pro vlastní hlášení a skládá se ze tří dílčích stupnic: smysluplnost (čtyři položky), srozumitelnost (pět položek) a spravovatelnost (čtyři položky). Každá položka obsahuje odpovědi, které se mění mezi otázkami a jsou hodnoceny od 1 do 7 v Likertově stupnici. Pět proměnných (položky 1, 2, 3, 7 a 10) je negativně formulováno, a proto jsou reverzní kódovány, když jsou položky shrnuty, aby se získala celková položka. SOC byl vypočítán jako průměr pro každého jednotlivce, který odpověděl nejméně 10 ze 13 položek (rozsah, 1,0-7,0) Vyšší skóre představuje větší pocit soudržnosti. Studie psychometrických vlastností stupnice SOC-13 prokázaly vysoké úrovně platnosti a spolehlivosti a vnitřní konzistence je velmi dobrá, přičemž Cronbachovy alfy se ve 127 studiích pomocí SOC-13 používají od 0,70 do 0,92. V této studii se odhady spolehlivosti v tomto měřítku pohybují od a = 0,77-0,79.

Obecný dotazník o zdraví GHQ-28 byl vyvinut společností Goldberg v roce 1978. Je to míra emocionální tísně v posledních několika týdnech, která obsahuje 28 položek a mohlo by být použity jako nástroj pro screening komunitu a pro detekci nespecifických psychiatrických poruch mezi jednotlivci v nastavení primární péče. Účastníci byli dotázáni na příznaky a/nebo nepohodlí, které nedávno zažili. Každá položka je hodnocena na čtyřbodové Likertově stupnici, aby se naznačovala závažnost symptomů od 0 do 3 (0 = vůbec, 1 = ne více než obvykle, 2 = o něco více než obvykle, 3 = mnohem více než obvykle). Skóre pro sedm pozitivně identifikovaných položek (položky 4, 5, 7, 8) jsou obráceny (1 = více než obvykle, 2 = obvykle, 3 = méně než obvykle, 4 = mnohem méně než obvykle). Položky jsou shrnuty napříč čtyřmi subškály: somatické příznaky (položky 1-7), úzkost/nespavost (položky 8-14), sociální dysfunkce (položky 15-21) a hlavní deprese (položky 22-28). Vysoké skóre GHQ-28 naznačuje pravděpodobný psychiatrický případ. Normativní údaje pro hodnocenou obecnou populaci ukazují na mezní bod ≥ 5. Spolehlivost byla vypočtena pomocí Cronbachova alfa koeficientu a byla 0,89-0,90.

Autoři vytvořili socioekonomický status a stresující události další dotazník, včetně socioekonomického statusu (SES) (věk, místo bydliště, rodinného stavu, úrovně vzdělání) a otázek o všech stresujících událostech (SES), které se zažily během předchozího měsíce.

Statistická analýza kontinuálních proměnných jsou prezentovány jako průměrná a standardní odchylka a proměnné od škálování jako mediánů a mezikvartilní rozsahy (25% až 75%). Kategorické proměnné jsou prezentovány jako frekvence. Rozdíly mezi kategorickými proměnnými jsou analyzovány pomocí Fisherova přesného testu. Všechny kontinuální proměnné jsou testovány na normální distribuci pomocí testu Shapiro-Wilk, jakož i kurtózy, skewness a grafické vyhodnocení distribuce každé proměnné údaje. Postupy transformace dat (např. Transformace box-cox) se zvažují, pokud mají za následek normální rozdělení všech transformovaných proměnných. Srovnání časových bodů základní linie a po odeslání (návštěvy T1 a T2) ve skupinách LH+BL nebo PLA jsou stanoveny pomocí t-testu pro závislé proměnné a velikost efektu vyjádřeného jako Cohenovy d. Srovnání mezi skupinami ve změnách před post-post v proměnných se stanoví pomocí t-testu pro nezávislé proměnné. Pokud je normalita porušena, jsou data analyzována pomocí testu podpisovaného rank Wilcoxon s velikostí účinku vyjádřeného jako korelační koeficient pořadí (RC). Test Mann-Whitney U se používá ke srovnání proměnných pro testování rozdílů mezi placebem a prebiotickými skupinami. Alfa <0,05 je považován za statisticky významný. Data jsou analyzována pomocí softwaru Statistica 13.3 (Statsoft Inc., USA).