Zanik mięśni w chorobie nowotworowej (MWIC) (MWIC)

Pacjenci: Rekrutowani będą pacjenci z rakiem górnego i dolnego odcinka przewodu pokarmowego do planowanej operacji resekcyjnej. Pacjenci zostaną zidentyfikowani przez zespół kliniczny na odpowiednim spotkaniu zespołu multidyscyplinarnego, a następnie zwrócą się do nich o informacje dotyczące badania i zgodę w klinice chirurgicznej. Dopasowane pod względem wieku, zdrowe grupy kontrolne poddawane planowej operacji z powodu łagodnych schorzeń (np. przepukliny) również zostaną zatrudnieni.

Fenotypowanie pacjenta: tomografia komputerowa wykonywana jako rutynowa część diagnozy i oceny stopnia zaawansowania zostanie wykorzystana do analizy składu ciała. Wszyscy zwerbowani pacjenci zostaną poddani analizie tomografii komputerowej, jeśli są obecni. Pacjenci kontrolni (np. przepukliny) mogą nie mieć tomografii komputerowej, ale jeśli to możliwe, zostaną przeanalizowane. Poprzeczny obraz CT z trzeciego kręgu lędźwiowego zostanie oceniony, a objętość tkanki oszacowana przez jednego przeszkolonego obserwatora. Pole przekroju poprzecznego tkanki mięśniowej i tłuszczowej zostanie znormalizowane dla wzrostu (cm2/m2). Oszacowania zapasów całego ciała zostaną wygenerowane z nieprzetworzonych danych (cm2) przy użyciu równań regresji. Wartości odcięcia dla niskiej muskulatury są oparte na badaniach sarkopenii i otyłości na podstawie tomografii komputerowej u pacjentów z rakiem. W poprzednim badaniu mediana czasu do biopsji mięśnia po tomografii komputerowej wynosiła 18 dni. Fenotypowanie będzie również obejmować pomiar podstawowych atrybutów fizycznych (np. wagi, wzrostu itp.) oraz zgłaszanych przez samych siebie zdolności fizycznych (poprzez kwestionariusze).

Ocena funkcji mięśni/aktywności fizycznej: W klinice zostanie przeprowadzona obiektywna ocena sprawności fizycznej wszystkich pacjentów. Będzie to obejmowało test „ustal czas i idź” oraz test „6 minut marszu”. Testy te zostały dobrze potwierdzone w literaturze i charakteryzują się dobrą wiarygodnością między oceniającymi. Chociaż dodają one niewielki ciężar niedogodności do wizyty w klinice pacjenta, jest to minimalne. Dodatkowo na uda pacjentów pod wodoodpornym opatrunkiem zostanie założony miernik aktywności fizycznej. Badacze zweryfikowali te glukometry u pacjentów z rakiem i są one małe (35 x 53 x 7 mm) i lekkie (20 g). W przypadku stosowania w poprzednich badaniach, jak powyżej, pacjenci uznali je za dyskretne i były dobrze tolerowane. Tam, gdzie to możliwe, badacze poproszą pacjentów o powtórzenie testu „time up and go” i „6-minutowego testu marszu” w klinice pooperacyjnej do 12 miesięcy po operacji.

Ocena samooceny pacjenta: W rutynowej klinice wszyscy pacjenci zostaną poproszeni o wypełnienie zatwierdzonych kwestionariuszy dotyczących ich zdrowia fizycznego i ich postrzegania tego stanu. Posłużą one do oceny ciężkości współzachorowalności, a także do oceny osłabienia. Przykładowe kwestionariusze obejmują Scottish Co-Morbidity Severity Score, Charlson Comorbidity Index i Edmonton Frail Scale. Rozważone zostaną inne kwestionariusze dotyczące zgłaszanego apetytu i funkcji, ale ogólnym celem będzie zadawanie wybranych pytań w celu zmniejszenia ciężaru pytań i zapobiegania zmęczeniu kwestionariuszem. Badacze poproszą uczestników o powtórzenie tych kwestionariuszy w rutynowej klinice do 12 miesięcy po operacji.

Pobieranie krwi i moczu: W rutynowej przychodni National Health Service (NHS) wszyscy pacjenci zostaną poproszeni o dostarczenie próbki krwi i moczu. Jeśli nie będzie to możliwe, zespół badawczy poprosi o pozwolenie na pobranie tych próbek w znieczuleniu ogólnym podczas planowanej operacji przez cewniki moczowe i naczyniowe wprowadzone w ramach rutynowej opieki. W fazie pooperacyjnej Badacze poproszą uczestników o dostarczenie próbek krwi i moczu, jeśli to możliwe, w rutynowej klinice do 12 miesięcy po operacji.

Biopsja mięśnia: Biopsja mięśnia prostego brzucha zostanie pobrana podczas zabiegu przez chirurga operacyjnego u wszystkich pacjentów. Zostanie on pobrany z nacięcia wykonanego w ramach planowanej operacji i nie wymaga dalszych nacięć. Tam, gdzie to możliwe, zostanie również pobrana dodatkowa biopsja igłowa mięśnia czworogłowego uda w celu porównania. Próbki zostaną oczyszczone z tłuszczów, krwi/tkanki włóknistej, szybko zamrożone w ciekłym azocie i przechowywane w temperaturze -80°C. Do immunohistochemii (IHC) próbki mięśni zostaną zszyte na korku, poddane obróbce w optymalnej temperaturze cięcia (OCT), a następnie obniżono do schłodzonego rozpuszczalnika izopentanowego (-190°C) przed przechowywaniem w -80°C.

Biopsja tkanki tłuszczowej: Biopsja tkanki tłuszczowej podskórnej i tam, gdzie to możliwe, tkanki tłuszczowej trzewnej zostanie pobrana w czasie operacji u wszystkich pacjentów przez chirurga. Ta procedura nie wymaga żadnych dodatkowych nacięć. Próbki te zostaną szybko zamrożone w ciekłym azocie i przechowywane w temperaturze -80°C.

Biopsja guza: W przypadku pacjentów z rakiem, po usunięciu wycinka podczas operacji, zostanie on zabrany do laboratorium patologii, gdzie dyżurny patolog pobierze skrawki guza. Odbędzie się to bez narażania stopnia zaawansowania klinicznego i zgodnie z obowiązującymi procedurami. Próbki guza zostaną podzielone na porcje i szybko zamrożone w ciekłym azocie w temperaturze -80°C. Nie dotyczy to grupy kontrolnej.

Powtórne pobieranie próbek: W klinice kontrolnej NHS wszyscy pacjenci zostaną poproszeni o dostarczenie powtórnych próbek krwi i moczu, które zostaną podzielone na porcje i szybko zamrożone w ciekłym azocie w temperaturze -80°C. Tam, gdzie pacjent jest podatny, zostanie również poproszony o wykonanie pojedynczej biopsji igłowej mięśnia czworogłowego uda. Zostanie to przeprowadzone w klinice w znieczuleniu miejscowym przy użyciu standardowej techniki aseptycznej. Istnieje pewien dyskomfort związany z wstrzyknięciem środka miejscowo znieczulającego, ale jest to przejściowe. Występuje również pewien dyskomfort związany z biopsją mięśnia, ale jest on krótkotrwały iw przeszłości był dobrze tolerowany. Biopsja mięśnia czworogłowego uda będzie wymagana tylko podczas rutynowej kontroli (około 6-8 miesięcy po operacji). Tam, gdzie to możliwe, podczas kolejnych rutynowych wizyt kontrolnych podczas trwania badania wymagane będą powtórzone próbki krwi i moczu. Badacze przewidywali, że będzie to miało miejsce do 12 miesięcy po operacji.

Immunohistochemia (IHC) i Western Blot: Zostaną one przeprowadzone zgodnie z poprzednimi publikacjami. W przypadku IHC zamrożone skrawki mięśni będą barwione wspólnie pod kątem ciężkiego łańcucha lamininy i miozyny lub lla w celu rozróżnienia rodzaju włókien. Skrawki parafinowe mogą być również używane i barwione. Rozmieszczenie typów włókien, pole przekroju poprzecznego poszczególnych włókien oraz rozmieszczenie jąder (lokalizacja centralna i obwodowa w celu oceny poziomu regeneracji) zostaną ocenione przez zastrzeżoną platformę do analizy obrazu. Potencjalne markery do pomiaru będą obejmować szlaki będące członkami autofagii (beclin, lampa, globulina antytymocytowa (ATG)); apoptoza (polimeraza rybozy poliadenozynodifosforanu (PARP), kaspaza-3); stres oksydacyjny (nitrozylowany 4-hydroksynonenal (HNE) i ubikwitynowane [K48, K63] białka); stres komórkowy (czynnik jądrowy (pochodzący z erytroidów 2) podobny do 2 białko pochodzące z komórek erytroidalnych typu Kelch z białkiem związanym z homologią Cap 'N' Collar 1 (NRF2KEAP1), białko szoku cieplnego (HSP), retikulum endoplazmatyczne (ER) - stres ); stan zapalny (kinaza IkB (IKK), czynnik jądrowy kappa-wzmacniacz łańcucha lekkiego aktywowanych komórek B (NFkB)-9p65, str. 38, kinaza związana z sygnałem zewnątrzkomórkowym (erk) 1/2, c-Jun N-końcowa kinaza (jnk)); dojrzewanie komórek satelitarnych (Paired Box (Pax)3, Pax7, czynnik miogenny (MYF)5, M-kadheryna); miogeneza (miogenina, desmina); sma/matki przeciwko dekapentaplegii (SMAD) (SMAD3, fosfoSMAD3); i P-selektyna.

Analiza białka C-reaktywnego (CRP): Ogólnoustrojowe zapalenie (SI) zostanie ocenione na podstawie stężenia CRP w osoczu, które zostanie zmierzone za pomocą zautomatyzowanego testu immunoturbidymetrycznego przeprowadzonego przez Department of Clinical Chemistry, Royal Infirmary of Edinburgh (RIE).

Analizy te będą prowadzone zarówno na Uniwersytecie w Edynburgu, jak iw siedzibie międzynarodowych współpracowników. Każda tkanka przekazana spod opieki Uniwersytetu zostanie w pełni zanonimizowana przy użyciu unikalnych identyfikatorów badań.

Obecne badanie jest kontynuacją poprzedniego badania finansowanego i wspieranego przez Cancer Research United Kingdom (Wielka Brytania). W ramach tych badań pobrano próbki tkanek, z których część pozostaje na Uniwersytecie. Badacze zamierzają wykorzystać te pozostałe próbki, aby zwiększyć moc nowych próbek, które zbierają badacze, zwiększając wielkość kohorty, a tym samym prawdopodobieństwo, że jakikolwiek potencjalny biomarker zostanie zidentyfikowany jako znaczący, a nie błędny. Ponadto włączenie tych próbek do analizy zwiększy ich wartość, przewyższającą już uzyskaną dzięki włączeniu do poprzedniego projektu.