Zdrowie kardiometaboliczne dzieci narażonych na terapię antyretrowirusową (ART) w życiu płodowym (ARTMOMSBABES)

I. Obliczenie wielkości próby Liczba uczestników wymagana do wykazania istotności statystycznej opiera się na wcześniej opublikowanych badaniach, w których oceniano czynność naczyń u pacjentów z HIV (Agu i in., 2019). Do obliczenia wielkości próby (n=64 osoby) zastosowano prawdopodobieństwo błędu (α) 0,05, moc (1-β) 0,80 i średnią wielkość efektu (d) 0,5. Zakładając 25% wskaźnik rezygnacji, użyjemy N = (64 + (64*25)/100) = 80 matek/grupę, aby upewnić się, że będziemy mieć wystarczającą wielkość próby/grupę, aby wykazać istotność statystyczną. Łączna liczba uczestniczących matek wyniesie zatem 160 (80 przypadków i 80 kontroli), a ich potomstwa – 160.

II. Zgoda etyczna Zgoda etyczna i pozwolenie na realizację projektu badawczego zostaną uzyskane od Komisji Badań i Etyki Wydziału Nauk o Zdrowiu (HRSEC) Uniwersytetu Waltera Sisulu (WSU). Cel badania zostanie wyjaśniony kobietom uczęszczającym do kliniki prenatalnej w szpitalach Umtata General i Nelson Mandela Academic Hospitals, Mthatha, Prowincja Przylądkowa Wschodnia. Kobiety w ciąży, które wyrażą chęć udziału w badaniu, będą zobowiązane do podpisania formularzy świadomej zgody na udział w badaniu oraz zgody na udział w badaniu swoich dzieci od urodzenia.

III. Projekt badania W tym badaniu wykorzystany zostanie projekt prospektywnego badania kliniczno-kontrolnego.

IV. Kryteria selekcji Kobiety z regionu Subsaharyjskiego z pojedynczymi niepowikłanymi 11-14 tygodniowymi ciążami muszą być nosicielami wirusa HIV w grupie przypadków i nosicielami wirusa HIV w grupie kontrolnej. Kobiety w ciąży z cukrzycą typu 2, cukrzycą ciążową, chorobami nerek i układu krążenia lub innymi poważnymi schorzeniami zostaną wykluczone z badania

V. Plan eksperymentu

Pakiet roboczy 1 (Kobiety w ciąży):

W tym badaniu zostaną zarejestrowane trzy wizyty przedporodowe – Wizyty te zostaną przeprowadzone w pierwszym, drugim i trzecim trymestrze ciąży.

Podczas każdej wizyty przedporodowej zostaną ocenione następujące informacje i parametry:

1. Informacje wyjściowe: Wywiad demograficzny, położniczy i rodzinny dotyczący chorób sercowo-naczyniowych u matki podczas pierwszej wizyty za pomocą kwestionariusza – jednorazowo na początku badania.
2. Pomiary antropometryczne: Wzrost i waga zostaną określone zgodnie z zaleceniami NHANES, 2009. BMI zostanie obliczone na podstawie wzoru waga/(wzrost (m) x wzrost (m)).
3. Pomiary ciśnienia krwi: Ciśnienie krwi w gabinecie będzie mierzone w sposób opisany przez Muntnera i in., (2019) w trzech powtórzeniach w trzyminutowych odstępach po 10 minutach odpoczynku w pozycji siedzącej. Po tym nastąpi 24-godzinny ambulatoryjny pomiar ciśnienia krwi w celu określenia ciśnienia krwi w ciągu dnia/nocy i fenotypu zanurzenia.
4. Morfometria łożyska, architektura i unaczynienie: Tętnice maciczne, tętnica pępowinowa i tętnica środkowa mózgu oraz tętnica maciczna będą określane za pomocą ultradźwięków. Stosunek mózgowo-łożyskowy płodu zostanie obliczony, jeśli to możliwe.
5. Testy funkcji śródbłonka: Grubość błony środkowej tętnicy szyjnej, prędkość fali tętna i spowolnienie zależne od przepływu oraz ocena tętnicy siatkówki zostaną zmierzone za pomocą ultrasonografii i Vicordera (Ellins, 2017). Mikrounaczynienie siatkówki zostanie zbadane w celu określenia funkcji śródbłonka.
6. Markery funkcji śródbłonka: Endocan, asymetryczna dimetyloarginina (ADMA) i tlenek azotu (NO) będą oznaczane za pomocą zestawów ELISA zgodnie z instrukcjami producenta.
7. Markery stresu oksydacyjnego: peroksydacja lipidów, całkowita pojemność przeciwutleniająca i 8-hydroksylo-2-deoksyguanina (8-OHdG) zostaną określone za pomocą zestawów ELISA zgodnie z protokołami producenta.
8. Wskaźniki profilu lipidowego: cholesterol całkowity, trójglicerydy, cholesterol LDL i cholesterol HDL oraz utleniony cholesterol LDL będą mierzone zgodnie z protokołem producenta.
9. Insulinooporność: Stężenia glukozy na czczo, hemoglobiny glikowanej i insuliny zostaną określone przy użyciu zestawów zgodnie z metodami producenta. Formuła HOMA-IR zostanie wykorzystana do obliczenia oporności na insulinę z szybkiej glukozy i insuliny.
10. Oznaczone zostaną wskaźniki czynności nerek: współczynnik przesączania kłębuszkowego (GFR), kreatynina i albumina oraz obliczony stosunek albuminy do kreatyniny.

Pakiet roboczy 2 (noworodki):

Podczas porodu zostanie pobrana krew pępowinowa w celu oceny markerów stresu oksydacyjnego i funkcji śródbłonka oraz markerów epigenetycznych u płodu. Gromadzone będą następujące dane:

1. Pomiary antropometryczne: Zmierzona zostanie waga, długość, obwód czaszki dziecka.
2. Pomiary ciśnienia krwi: Przypadkowe ciśnienie krwi będzie mierzone za pomocą oscylometrii przy użyciu jednorazowych mankietów odpowiednich do rozmiaru ramienia. Ciśnienie krwi będzie mierzone w trzech powtórzeniach w pięciominutowych odstępach co najmniej godzinę po posiłku dziecka i kiedy dziecko śpi (Samantha i in., 2015).
3. Markery funkcji śródbłonka: Endocan, asymetryczna dimetyloarginina (ADMA) i tlenek azotu (NO) będą oznaczane za pomocą zestawów ELISA zgodnie z instrukcjami producenta.
4. Markery stresu oksydacyjnego: peroksydacja lipidów, całkowita pojemność przeciwutleniająca i 8-hydroksylo-2-deoksyguanina (8-OHdG) zostaną określone za pomocą zestawów ELISA zgodnie z protokołami producenta.
5. Wskaźniki profilu lipidowego: cholesterol całkowity, triglicerydy, cholesterol LDL i cholesterol HDL oraz utleniony cholesterol LDL będą mierzone zgodnie z protokołem producenta.
6. Insulinooporność: stężenie glukozy i insuliny we krwi pępowinowej zostanie określone zgodnie z metodami producenta. Do obliczenia insulinooporności zostanie wykorzystany wzór HOMA-IR.
7. Oznaczone zostaną wskaźniki czynności nerek: przesączanie kłębuszkowe (GFR), kreatynina i albuminy. Określony zostanie również stosunek albuminy do kreatyniny.
8. Markery epigenetyczne: Stężenia 5-metylo-2-dezoksycytydyny i trimetylohistonu H3K9 w moczu przy użyciu zestawu Elisa zgodnie z metodami producenta.

Pakiet roboczy 3 (Matki po 3 miesiącach obserwacji poporodowej)

Matki będą obserwowane trzy miesiące po porodzie. Podczas tej wizyty od matek nie będą pobierane próbki krwi ani moczu. Próbki moczu będą pobierane od niemowląt w celu pomiaru czynników ryzyka CVD. Gromadzone będą następujące dane:

1. Pomiary antropometryczne: Wzrost i waga zostaną określone zgodnie z zaleceniami NHANES, 2009. BMI zostanie obliczone na podstawie wzoru waga/(wzrost (m) x wzrost (m)) zarówno dla matki, jak i dla dziecka.
2. Pomiary ciśnienia krwi: Ciśnienie krwi w gabinecie będzie mierzone w sposób opisany przez Puntnera i in., (2019) w trzech powtórzeniach w trzyminutowych odstępach po 10 minutach odpoczynku w pozycji siedzącej. Po tym nastąpi 24-godzinny ambulatoryjny pomiar ciśnienia krwi w celu określenia ciśnienia krwi w ciągu dnia/nocy i fenotypu zanurzenia - matka
3. Ciśnienie krwi będzie mierzone u dziecka w pozycji leżącej.
4. Testy funkcji śródbłonka: Grubość błony środkowej tętnicy szyjnej, prędkość fali tętna i spowolnienie zależne od przepływu oraz ocena tętnicy siatkówki zostaną zmierzone za pomocą ultrasonografii i Vicordera (Ellins, 2017). Mikrounaczynienie siatkówki zostanie zbadane w celu określenia funkcji śródbłonka u matki.
5. Testy funkcji śródbłonka: prędkość fali tętna i spowolnienie zależne od przepływu za pomocą Vicordera u dziecka (Ng i in., 2018).

Pakiet roboczy 4 (dziecko):

Dane będą zbierane od dzieci w wieku trzech, dwunastu i dwudziestu czterech miesięcy po urodzeniu w następujący sposób:

1. Pomiary antropometryczne: Zmierzona zostanie waga, długość, obwód czaszki dziecka.
2. Pomiary ciśnienia krwi: Przypadkowe ciśnienie krwi będzie mierzone za pomocą oscylometrii przy użyciu jednorazowych mankietów odpowiednich do rozmiaru ramienia. Ciśnienie krwi będzie mierzone w trzech powtórzeniach w pięciominutowych odstępach co najmniej godzinę po posiłku dziecka i kiedy dziecko śpi (Samantha i in., 2015).
3. Testy funkcji śródbłonka: prędkość fali tętna i spowolnienie zależne od przepływu za pomocą Vicordera (Ng i in., 2018).
4. Markery funkcji śródbłonka: Próbki moczu zostaną pobrane do testów Endocan, asymetrycznej dimetyloargininy (ADMA) i tlenku azotu (NO) przy użyciu zestawów ELISA zgodnie z instrukcjami producenta.
5. Markery stresu oksydacyjnego: peroksydacja lipidów, całkowita pojemność antyoksydacyjna i 8-hydroksylo-2-deoksyguanina (8-OHdG) zostaną oznaczone w próbkach moczu za pomocą zestawów ELISA zgodnie z protokołami producenta.
6. Wskaźniki funkcji nerek: Oznaczone zostanie stężenie kreatyniny i albuminy w moczu. Określony zostanie również stosunek albuminy do kreatyniny.
7. Markery epigenetyczne: Stężenia 5-metylo-2-dezoksycytydyny i trimetylohistonu H3K9 w moczu przy użyciu zestawu elisa zgodnie z metodami producenta.
8. Testy funkcji śródbłonka: prędkość fali tętna i spowolnienie zależne od przepływu za pomocą Vicordera (Ng i in., 2018).