Antiretrovirális terápiának (ART) kitett gyermekek kardiometabolikus egészsége méhben (ARTMOMSBABES)

I. A mintanagyság számítása A statisztikai szignifikancia kimutatásához szükséges résztvevők száma korábban publikált tanulmányokon alapul, amelyekben HIV-betegek érfunkcióját értékelték (Agu et al., 2019). A mintanagyság (n=64 fő) kiszámításához 0,05-ös hibavalószínűséget (α), 0,80-as teljesítményt (1-β), valamint 0,5-ös átlagos hatásméretet (d) használtunk. 25%-os lemorzsolódást feltételezve N = (64 + (64*25)/100) = 80 anya/csoportot fogunk használni annak biztosítására, hogy elegendő mintamérettel/csoporttal rendelkezzünk a statisztikai szignifikancia kimutatásához. A résztvevő anyák teljes száma tehát 160 lesz (80 eset és 80 kontroll), utódaik pedig 160 lesz.

II. Etikai jóváhagyás A kutatási projekt etikai hozzájárulását és engedélyét a Walter Sisulu Egyetem (WSU) Egészségtudományi Kar Kutatási és Etikai Bizottságától (HRSEC) kell beszerezni. A vizsgálat célját elmagyarázzák azoknak a nőknek, akik az Umtata General és Nelson Mandela Academic Hospitals, Mthatha, Eastern Cape tartomány terhesgondozási klinikáján vesznek részt. Azoknak a terhes nőknek, akik hajlandóak lesznek részt venni a vizsgálatban, alá kell írniuk a beleegyező nyilatkozatot a vizsgálatban való részvételhez, és lehetővé kell tenniük, hogy gyermekeik születésüktől kezdve részt vegyenek a vizsgálatban.

III. A vizsgálat felépítése Ebben a tanulmányban prospektív esetkontroll-tanulmány-tervet alkalmazunk.

IV. Kiválasztási kritériumok Azok a szubszaharai nők, akiknek 11-14 hetes szövődménymentes terhessége van, HIV-pozitívnak kell lenniük az esetcsoportban és HIV-negatívnak a kontrollcsoportban. A 2-es típusú cukorbetegségben, terhességi cukorbetegségben, vese- és szív- és érrendszeri betegségben szenvedő, vagy bármilyen kritikus egészségi állapotú terhes nőket kizárják a vizsgálatból.

V. Kísérleti terv

1. munkacsomag (terhes nők):

Három születés előtti látogatást rögzítünk ehhez a vizsgálathoz – Ezeket a látogatásokat a terhesség első, második és harmadik trimeszterében kell elvégezni.

Minden szülés előtti vizit során a következő információkat és paramétereket értékelik:

1. Alapinformációk: Az anyák demográfiai, szülészeti és családi anamnézisében szív- és érrendszeri betegségek az első látogatás során kérdőív segítségével – a vizsgálat kezdetén egyszer.
2. Antropometriai mérések: A magasságot és a súlyt az NHANES, 2009 ajánlásai szerint határozzák meg. A BMI a súly/(magasság (m) x magasság (m) képlet alapján kerül kiszámításra.
3. Vérnyomásmérés: Az irodai vérnyomást Muntner és munkatársai (2019) szerint háromszor, három perces időközönként mérik 10 perces ülő helyzetben végzett pihenés után. Ezt követi a 24 órás ambuláns vérnyomásmérés a nappali/éjszakai vérnyomás és a dipping fenotípus meghatározására.
4. A placenta morfometriája, felépítése és vaszkularizáció: A méhartériák, a köldökartéria és a középső agyi artéria, valamint az arteria méh artéria átlagos pulzációs indexét ultrahanggal határozzuk meg. A magzati cerebroplacentáris arányt lehetőség szerint kiszámítják.
5. Endothel funkciótesztek: A carotis intima media vastagságát, a pulzushullám sebességét és az áramlás által közvetített lassulást és a retinális artériák értékelését ultrahang és Vicorder segítségével mérik (Ellins, 2017). Az endothel funkció meghatározására a retina mikrovaszkulációját vizsgálják.
6. Az endothel funkció markerei: Az endokánt, az aszimmetrikus dimetil-arginint (ADMA) és a nitrogén-oxidot (NO) ELISA készletekkel vizsgálják a gyártó utasításai szerint.
7. Az oxidatív stressz markerei: A lipid-peroxidációt, a teljes antioxidáns kapacitást és a 8-hidroxil-2-dezoxiguanint (8-OHdG) ELISA kitekkel határozzuk meg a gyártó protokollja szerint.
8. Lipidprofil indexek: Az összkoleszterin, triglicerid, LDL-koleszterin és HDL-koleszterin, valamint az oxidált LDL-koleszterin mérése a gyártó protokollja szerint történik.
9. Inzulinrezisztencia: Az éhgyomri glükóz, a glikált hemoglobin és az inzulin koncentrációját kittel határozzák meg a gyártó módszerei szerint. A HOMA-IR képlet segítségével számítják ki az inzulinrezisztenciát gyors glükózból és inzulinból.
10. Vesefunkciós indexek: a glomeruláris filtrációs ráta (GFR), a kreatinin és az albumin meghatározása, valamint az albumin-kreatinin arány kiszámítása.

2. munkacsomag (újszülöttek):

A szülés során köldökzsinórvért vesznek az oxidatív stressz és az endothel funkció markereinek, valamint a magzat epigenetikai markereinek értékelésére. A következő adatokat gyűjtjük össze:

1. Antropometriai mérések: Megmérik a gyermek súlyát, hosszát, koponyakörfogatát.
2. Vérnyomásmérés: Az alkalmi vérnyomás mérése oszcillometriával történik, eldobható, karméretnek megfelelő mandzsetta segítségével. A vérnyomást háromszor, öt perces időközönként mérik, legalább egy órával a baba étkezése után, és amikor a baba alszik (Samantha et al, 2015).
3. Az endothel funkció markerei: Az endokánt, az aszimmetrikus dimetil-arginint (ADMA) és a nitrogén-oxidot (NO) ELISA készletekkel vizsgálják a gyártó utasításai szerint.
4. Az oxidatív stressz markerei: A lipid-peroxidációt, a teljes antioxidáns kapacitást és a 8-hidroxil-2-dezoxiguanint (8-OHdG) ELISA kitekkel határozzuk meg a gyártó protokollja szerint.
5. Lipidprofil indexek: Az összkoleszterint, a triglicerideket, az LDL-koleszterint és a HDL-koleszterint, valamint az oxidált LDL-koleszterint a gyártó protokollja szerint mérik.
6. Inzulinrezisztencia: a köldökzsinórvér glükóz- és inzulinkoncentrációját a gyártó módszerei szerint kell meghatározni. A HOMA-IR képletet fogják használni az inzulinrezisztencia kiszámításához.
7. Vesefunkciós indexek: glomeruláris filtrációs ráta (GFR), kreatinin és albumin kerül meghatározásra. Az albumin-kreatinin arányt is meghatározzák.
8. Epigenetikai markerek: 5-metil-2-dezoxicitidin és trimetil-hiszton H3K9 vizeletkoncentrációi Elisa kittel a gyártó módszerei szerint.

3. munkacsomag (anyák a szülés utáni 3 hónapos követés után)

Az anyákat három hónappal a szülés után követik nyomon. A látogatás során sem vért, sem vizeletmintát nem vesznek az anyáktól. A csecsemőktől vizeletmintákat vesznek a szív- és érrendszeri betegségek kockázati tényezőinek mérésére. A következő adatokat gyűjtjük össze:

1. Antropometriai mérések: A magasságot és a súlyt az NHANES, 2009 ajánlásai szerint határozzák meg. A BMI-t a súly/(magasság (m) x magasság (m)) képlet alapján számítják ki mind az anyára, mind a babára vonatkozóan.
2. Vérnyomásmérés: Az irodai vérnyomást Puntner és munkatársai (2019) leírása szerint háromszor, háromperces időközönként mérik, 10 perc pihenő után ülő helyzetben. Ezt követi a 24 órás ambuláns vérnyomásmérés a nappali/éjszakai vérnyomás és a dipping fenotípus meghatározására - anya
3. A vérnyomást a babánál fekvő helyzetben mérik.
4. Endothel funkciótesztek: A carotis intima media vastagságát, a pulzushullám sebességét és az áramlás által közvetített lassulást és a retinális artériák értékelését ultrahang és Vicorder segítségével mérik (Ellins, 2017). A retina mikrovaszkulációját vizsgálják az anya endothel funkciójának meghatározására.
5. Endothel funkciótesztek: pulzushullám-sebesség és áramlás által közvetített lassítás a Vicorder segítségével a babában (Ng et al, 2018).

4. munkacsomag (gyermek):

A születést követő három, tizenkét és huszonnégy hónapos gyermekektől az alábbiak szerint gyűjtenek adatokat:

1. Antropometriai mérések: Megmérik a gyermek súlyát, hosszát, koponyakörfogatát.
2. Vérnyomásmérés: Az alkalmi vérnyomás mérése oszcillometriával történik, eldobható, karméretnek megfelelő mandzsetta segítségével. A vérnyomást háromszor, öt perces időközönként mérik, legalább egy órával a baba étkezése után, és amikor a baba alszik (Samantha et al, 2015).
3. Endothel funkciótesztek: pulzushullám sebesség és áramlás által közvetített lassulás Vicorder segítségével (Ng et al, 2018).
4. Az endothel funkció markerei: A vizeletmintákat az endocan, az aszimmetrikus dimetil-arginin (ADMA) és a nitrogén-monoxid (NO) vizsgálatokhoz ELISA kitekkel, a gyártó utasításai szerint gyűjtik.
5. Az oxidatív stressz markerei: A lipid-peroxidációt, a teljes antioxidáns kapacitást és a 8-hidroxil-2-dezoxiguanint (8-OHdG) vizeletmintákban ELISA kitekkel határozzuk meg a gyártó protokollja szerint.
6. Vesefunkciós indexek: Meg kell határozni a vizelet kreatinint és albumint. Az albumin-kreatinin arányt is meghatározzák.
7. Epigenetikai markerek: Az 5-metil-2-dezoxicitidin és a trimetil-hiszton H3K9 vizeletkoncentrációi elisa készlettel a gyártó módszerei szerint.
8. Endothel funkciótesztek: pulzushullám sebesség és áramlás által közvetített lassulás Vicorder segítségével (Ng et al, 2018).