Saúde Cardiometabólica de Crianças Expostas à Terapia Antirretroviral (TARV) no útero (ARTMOMSBABES)

I. Cálculo do tamanho da amostra O número de participantes necessário para mostrar significância estatística é baseado em estudos publicados anteriormente nos quais a função vascular foi avaliada em pacientes com HIV (Agu et al., 2019). Uma probabilidade de erro (α) de 0,05, um poder (1-β) de 0,80 e um tamanho de efeito médio (d) de 0,5 foram usados ​​para calcular o tamanho da amostra (n= 64 pessoas). Assumindo uma taxa de abandono de 25%, usaremos N = (64 + (64*25)/100) = 80 mães/grupo para garantir que teremos tamanho de amostra/grupo suficiente para mostrar significância estatística. O número total de mães participantes será, portanto, 160 (80 casos e 80 controles) e seus filhos - 160.

II. Aprovação ética O consentimento ético e a permissão para realizar o projeto de pesquisa serão obtidos do Comitê de Ética e Pesquisa da Faculdade de Ciências da Saúde (HRSEC) da Walter Sisulu University (WSU). O objetivo do estudo será explicado às mulheres que frequentam a clínica pré-natal nos Hospitais Acadêmicos Umtata General e Nelson Mandela, Mthatha, Província do Cabo Oriental. As mulheres grávidas que desejarem participar deverão assinar formulários de consentimento informado para participar do estudo e permitir que seus filhos participem do estudo desde o nascimento.

III. Projeto de estudo Um projeto de estudo de caso-controle prospectivo será usado neste estudo.

4. Critérios de seleção Mulheres subsaarianas com gestações únicas não complicadas de 11 a 14 semanas, ser HIV positivo para o grupo caso e HIV negativo para o grupo controle. Mulheres grávidas com diabetes tipo 2, diabetes gestacional, doenças renais e cardiovasculares ou qualquer condição crítica de saúde serão excluídas do estudo

V. Plano Experimental

Pacote de trabalho 1 (Mulheres grávidas):

Três consultas pré-natais serão registradas para este estudo - Essas consultas serão realizadas durante o primeiro, segundo e terceiro trimestres de gestação.

As seguintes informações e parâmetros serão avaliados durante cada consulta pré-natal:

1. Informações de base: Dados demográficos maternos, obstétricos e histórico familiar de doenças cardiovasculares durante a primeira visita usando um questionário - uma vez no início do estudo.
2. Medidas antropométricas: Altura e peso serão determinados conforme recomendações do NHANES, recomendações de 2009. O IMC será calculado usando a fórmula peso/(altura (m) x altura (m)).
3. Medições da pressão arterial: A pressão arterial do consultório será medida conforme descrito por Muntner et al., (2019) em triplicata em intervalos de três minutos após 10 minutos de repouso na posição sentada. Isso será seguido por medição ambulatorial da pressão arterial de 24 h para determinação da pressão arterial diurna/noturna e fenótipo de imersão.
4. Morfometria, arquitetura e vascularização placentária: As artérias uterinas, artéria umbilical e cerebral média e o índice de pulsação média da artéria uterina serão determinados por ultrassonografia. A relação cérebro-placentária fetal será calculada quando possível.
5. Testes de função endotelial: Espessura da camada íntima da carótida, velocidade da onda de pulso e lentidão mediada pelo fluxo e avaliação da artéria retiniana serão medidos usando ultrassonografia e Vicorder (Ellins, 2017). A microvasculatura da retina será estudada para determinar a função endotelial.
6. Marcadores de função endotelial: Endocan, dimetilarginina assimétrica (ADMA) e óxido nítrico (NO) serão testados usando kits ELISA de acordo com as instruções dos fabricantes.
7. Marcadores de estresse oxidativo: Peroxidação lipídica, capacidade antioxidante total e 8-hidroxil-2-desoxiguanina (8-OHdG) serão determinados usando kits ELISA conforme protocolos do fabricante.
8. Índices de perfil lipídico: Colesterol total, triglicerídeos, colesterol LDL e colesterol HDL e colesterol LDL oxidado serão medidos de acordo com o protocolo do fabricante.
9. Resistência à insulina: As concentrações de glicose em jejum, hemoglobina glicada e insulina serão determinadas usando kits de acordo com os métodos do fabricante. A fórmula HOMA-IR será usada para calcular a resistência à insulina a partir de glicose e insulina em jejum.
10. Índices de função renal: taxa de filtração glomerular (TFG), creatinina e albumina serão determinados e a relação entre albumina e creatinina calculada.

Pacote de Trabalho 2 (Neonatos):

Durante o parto, o sangue do cordão umbilical será coletado para avaliação de marcadores de estresse oxidativo e função endotelial e marcadores epigenéticos no feto. Serão recolhidos os seguintes dados:

1. Medidas antropométricas: Serão medidos o peso, comprimento, circunferência craniana da criança.
2. Medições da pressão arterial: A pressão arterial casual será medida por oscilometria usando manguitos descartáveis ​​apropriados para o tamanho do braço. A pressão arterial será medida em triplicata com intervalos de cinco minutos pelo menos uma hora após a refeição do bebê e quando o bebê estiver dormindo (Samantha et al, 2015).
3. Marcadores de função endotelial: Endocan, dimetilarginina assimétrica (ADMA) e óxido nítrico (NO) serão testados usando kits ELISA de acordo com as instruções dos fabricantes.
4. Marcadores de estresse oxidativo: Peroxidação lipídica, capacidade antioxidante total e 8-hidroxil-2-desoxiguanina (8-OHdG) serão determinados usando kits ELISA conforme protocolos do fabricante.
5. Índices de perfil lipídico: Colesterol total, triglicerídeos, colesterol LDL e colesterol HDL e colesterol LDL oxidado serão medidos de acordo com o protocolo do fabricante.
6. Resistência à insulina: as concentrações de glicose e insulina no cordão umbilical serão determinadas de acordo com os métodos do fabricante. A fórmula HOMA-IR será usada para calcular a resistência à insulina.
7. Índices de função renal: taxa de filtração glomerular (TFG), creatinina e albumina serão determinados. A proporção de albumina para creatinina também será determinada.
8. Marcadores epigenéticos: Concentrações de urina de 5-metil-2-desoxicitidina e trimetil histona H3K9 usando o kit Elisa de acordo com os métodos do fabricante.

Pacote de Trabalho 3 (Mães em 3 meses de acompanhamento pós-natal)

As mães serão acompanhadas três meses após o parto. Durante esta visita, não serão coletadas amostras de sangue nem de urina das mães. Amostras de urina serão coletadas de bebês para medição dos fatores de risco de DCV. Serão recolhidos os seguintes dados:

1. Medidas antropométricas: Altura e peso serão determinados conforme recomendações do NHANES, recomendações de 2009. O IMC será calculado usando a fórmula peso/(altura (m) x altura (m)) para a mãe e o bebê.
2. Medições da pressão arterial: A pressão arterial do consultório será medida conforme descrito por Puntner et al., (2019) em triplicata em intervalos de três minutos após 10 minutos de repouso na posição sentada. Isso será seguido por medição ambulatorial da pressão arterial de 24 h para determinação da pressão arterial diurna/noturna e fenótipo de imersão - mãe
3. A pressão arterial será medida no bebê na posição supina.
4. Testes de função endotelial: Espessura da camada íntima da carótida, velocidade da onda de pulso e lentidão mediada pelo fluxo e avaliação da artéria retiniana serão medidos usando ultrassonografia e Vicorder (Ellins, 2017). A microvasculatura da retina será estudada para determinar a função endotelial na mãe.
5. Testes de função endotelial: velocidade da onda de pulso e desaceleração mediada por fluxo usando o Vicorder no bebê (Ng et al, 2018).

Pacote de Trabalho 4 (Criança):

Os dados serão coletados de crianças aos três, doze e vinte e quatro meses após o nascimento da seguinte forma:

1. Medidas antropométricas: Serão medidos o peso, comprimento, circunferência craniana da criança.
2. Medições da pressão arterial: A pressão arterial casual será medida por oscilometria usando manguitos descartáveis ​​apropriados para o tamanho do braço. A pressão arterial será medida em triplicata com intervalos de cinco minutos pelo menos uma hora após a refeição do bebê e quando o bebê estiver dormindo (Samantha et al, 2015).
3. Testes de função endotelial: velocidade da onda de pulso e desaceleração mediada por fluxo usando o Vicorder (Ng et al, 2018).
4. Marcadores de função endotelial: Amostras de urina serão coletadas para ensaios de Endocan, dimetilarginina assimétrica (ADMA) e óxido nítrico (NO) usando kits ELISA de acordo com as instruções do fabricante.
5. Marcadores de estresse oxidativo: Peroxidação lipídica, capacidade antioxidante total e 8-hidroxil-2-desoxiguanina (8-OHdG) serão determinados em amostras de urina usando kits ELISA conforme protocolos do fabricante.
6. Índices de função renal: A creatinina e a albumina urinárias serão determinadas. A proporção de albumina para creatinina também será determinada.
7. Marcadores epigenéticos: Concentrações de urina de 5-metil-2-desoxicitidina e trimetil Histona H3K9 usando kit elisa de acordo com os métodos do fabricante.
8. Testes de função endotelial: velocidade da onda de pulso e desaceleração mediada por fluxo usando o Vicorder (Ng et al, 2018).