Kardiometabolické zdraví dětí vystavených antiretrovirové terapii (ART) v děloze (ARTMOMSBABES)

I. Výpočet velikosti vzorku Počet účastníků potřebný k prokázání statistické významnosti je založen na dříve publikovaných studiích, ve kterých byla hodnocena vaskulární funkce u pacientů s HIV (Agu et al., 2019). Pravděpodobnost chyby (α) 0,05 a síla (1- β) 0,80 a průměrná velikost účinku (d) 0,5 byly použity k výpočtu velikosti vzorku (n= 64 osob). Za předpokladu 25% míry předčasného ukončení studia použijeme N = (64 + (64*25)/100) = 80 matek/skupinu, abychom zajistili, že budeme mít dostatečnou velikost vzorku/skupinu k prokázání statistické významnosti. Celkový počet zúčastněných matek tedy bude 160 (80 případů a 80 kontrol) a jejich potomků - 160.

II. Etické schválení Etický souhlas a povolení k provedení výzkumného projektu bude získáno od Výboru pro výzkum a etiku Fakulty zdravotnických věd (HRSEC) Univerzity Waltera Sisulu (WSU). Účel studie bude vysvětlen ženám navštěvujícím prenatální kliniku v Umtata General a Nelson Mandela Academic Hospitals, Mthatha, Eastern Cape Province. Těhotné ženy, které budou ochotny se zúčastnit, budou muset podepsat informovaný souhlas s účastí ve studii a umožnit svým dětem účastnit se studie od narození.

III. Design studie V této studii bude použit design prospektivní případové kontrolní studie.

IV. Kritéria výběru Subsaharské ženy s jednočetným nekomplikovaným těhotenstvím ve věku 11-14 týdnů musí být HIV pozitivní pro skupinu případů a HIV negativní pro kontrolní skupinu. Ze studie budou vyloučeny těhotné ženy s diabetem 2. typu, gestačním diabetem, ledvinovými a kardiovaskulárními chorobami nebo jakýmkoli kritickým zdravotním stavem.

V. Experimentální plán

Pracovní balíček 1 (těhotné ženy):

Pro tuto studii budou zaznamenány tři prenatální návštěvy - Tyto návštěvy budou provedeny během prvního, druhého a třetího trimestru gestace.

Při každé předporodní návštěvě budou posouzeny následující informace a parametry:

1. Základní informace: Mateřská demografická, porodnická a rodinná anamnéza kardiovaskulárních onemocnění během první návštěvy pomocí dotazníku – jednou na začátku studie.
2. Antropometrická měření: Výška a hmotnost budou stanoveny podle doporučení doporučení NHANES, 2009. BMI se vypočítá pomocí vzorce hmotnost/(výška (m) x výška (m)).
3. Měření krevního tlaku: Krevní tlak v kanceláři bude měřen tak, jak popsal Muntner et al., (2019) v triplikátech v tříminutových intervalech po 10 minutách odpočinku v sedě. Poté bude následovat 24hodinové ambulantní měření krevního tlaku pro stanovení denního/nočního krevního tlaku a fenotypu ponoru.
4. Placentární morfometrie, architektura a vaskularizace: Uterinní tepny, umbilikální tepna a střední cerebrální tepna a uterinní tepna budou stanoveny ultrazvukem. Pokud je to možné, vypočte se fetální cerebroplacentární poměr.
5. Testy endoteliální funkce: Tloušťka karotidové intimy, rychlost pulzní vlny a zpomalení zprostředkované průtokem a hodnocení retinální tepny budou měřeny pomocí ultrasonografie a Vicorderu (Ellins, 2017). K určení endoteliální funkce bude studována retinální mikrovaskulatura.
6. Markery endoteliální funkce: Endokan, asymetrický dimethylarginin (ADMA) a oxid dusnatý (NO) budou testovány pomocí souprav ELISA podle pokynů výrobce.
7. Markery oxidačního stresu: Peroxidace lipidů, celková antioxidační kapacita a 8-hydoxyl-2-deoxyguanin (8-OHdG) budou stanoveny pomocí souprav ELISA podle protokolů výrobce.
8. Indexy lipidového profilu: Celkový cholesterol, triglyceridy, LDL cholesterol a HDL cholesterol a oxidovaný LDL-cholesterol budou měřeny podle protokolu výrobce.
9. Inzulínová rezistence: Koncentrace glukózy nalačno, glykovaného hemoglobinu a inzulínu budou stanoveny pomocí souprav podle metod výrobce. Vzorec HOMA-IR bude použit k výpočtu inzulínové rezistence z rychlé glukózy a inzulínu.
10. Renální funkční indexy: bude stanovena glomerulární filtrace (GFR), kreatinin a albumin a vypočítán poměr albuminu ke kreatininu.

Pracovní balíček 2 (novorozenci):

Během porodu bude odebrána pupečníková krev pro hodnocení markerů oxidačního stresu a endoteliální funkce a epigenetických markerů u plodu. Budou shromažďovány následující údaje:

1. Antropometrická měření: Změří se váha, délka, obvod hlavy dítěte.
2. Měření krevního tlaku: Příležitostný krevní tlak bude měřen oscilometrií pomocí jednorázových manžet odpovídající velikosti paže. Krevní tlak bude měřen třikrát v pětiminutových intervalech nejméně jednu hodinu po jídle dítěte a když dítě spí (Samantha et al, 2015).
3. Markery endoteliální funkce: Endokan, asymetrický dimethylarginin (ADMA) a oxid dusnatý (NO) budou testovány pomocí souprav ELISA podle pokynů výrobce.
4. Markery oxidačního stresu: Peroxidace lipidů, celková antioxidační kapacita a 8-hydoxyl-2-deoxyguanin (8-OHdG) budou stanoveny pomocí souprav ELISA podle protokolů výrobce.
5. Indexy lipidového profilu: Celkový cholesterol, triglyceridy, LDL cholesterol a HDL cholesterol a oxidovaný LDL-cholesterol budou měřeny podle protokolu výrobce.
6. Inzulinová rezistence: koncentrace glukózy v pupečníkové krvi a inzulinu budou stanoveny podle metod výrobce. Vzorec HOMA-IR bude použit pro výpočet inzulinové rezistence.
7. Budou stanoveny renální funkční indexy: glomerulární filtrace (GFR), kreatinin a albumin. Bude také stanoven poměr albuminu ke kreatininu.
8. Epigenetické markery: Koncentrace 5-methyl-2-deoxycytidinu a trimethyl histonu H3K9 v moči pomocí soupravy Elisa podle metod výrobce.

Pracovní balíček 3 (matky 3 měsíce po porodu)

Matky budou sledovány tři měsíce po porodu. Během této návštěvy nebudou matkám odebírány vzorky krve ani moči. Děti budou odebírány vzorky moči pro měření rizik KVO. Budou shromažďovány následující údaje:

1. Antropometrická měření: Výška a hmotnost budou stanoveny podle doporučení doporučení NHANES, 2009. BMI se vypočítá pomocí vzorce hmotnost/(výška (m) x výška (m)) pro matku i dítě.
2. Měření krevního tlaku: Krevní tlak v kanceláři bude měřen tak, jak je popsáno v Puntner et al., (2019) v triplikátech v tříminutových intervalech po 10 minutách odpočinku v sedě. Následovat bude 24h ambulantní měření krevního tlaku pro stanovení denního/nočního krevního tlaku a dipping fenotypu - matka
3. Krevní tlak bude měřen u dítěte v poloze na zádech.
4. Testy endoteliální funkce: Tloušťka karotidové intimy, rychlost pulzní vlny a zpomalení zprostředkované průtokem a hodnocení retinální tepny budou měřeny pomocí ultrasonografie a Vicorderu (Ellins, 2017). Bude studována retinální mikrovaskulatura za účelem stanovení endoteliální funkce u matky.
5. Endoteliální funkční testy: rychlost pulzní vlny a zpomalení zprostředkované průtokem pomocí Vicorderu u dítěte (Ng et al, 2018).

Pracovní balíček 4 (dítě):

Údaje budou shromažďovány od dětí ve třech, dvanácti a dvaceti čtyřech měsících po narození takto:

1. Antropometrická měření: Změří se váha, délka, obvod hlavy dítěte.
2. Měření krevního tlaku: Příležitostný krevní tlak bude měřen oscilometrií pomocí jednorázových manžet odpovídající velikosti paže. Krevní tlak bude měřen třikrát v pětiminutových intervalech nejméně jednu hodinu po jídle dítěte a když dítě spí (Samantha et al, 2015).
3. Endoteliální funkční testy: rychlost pulzní vlny a zpomalení zprostředkované průtokem pomocí Vicorderu (Ng et al, 2018).
4. Markery endoteliální funkce: Vzorky moči budou odebrány pro testy Endocan, asymetrický dimethylarginin (ADMA) a oxid dusnatý (NO) pomocí souprav ELISA podle pokynů výrobce.
5. Markery oxidačního stresu: Peroxidace lipidů, celková antioxidační kapacita a 8-hydoxyl-2-deoxyguanin (8-OHdG) budou stanoveny ve vzorcích moči pomocí souprav ELISA podle protokolů výrobce.
6. Ukazatele funkce ledvin: Stanoví se kreatinin a albumin v moči. Bude také stanoven poměr albuminu ke kreatininu.
7. Epigenetické markery: Koncentrace 5-methyl-2-deoxycytidinu a trimethyl Histone H3K9 v moči za použití soupravy elisa podle metod výrobce.
8. Endoteliální funkční testy: rychlost pulzní vlny a zpomalení zprostředkované průtokem pomocí Vicorderu (Ng et al, 2018).