Salute cardiometabolica dei bambini esposti a terapia antiretrovirale (ART) in utero (ARTMOMSBABES)

I. Calcolo della dimensione del campione Il numero di partecipanti richiesto per mostrare la significatività statistica si basa su studi pubblicati in precedenza in cui la funzione vascolare è stata valutata nei pazienti affetti da HIV (Agu et al., 2019). Per calcolare la dimensione del campione (n= 64 persone) sono stati utilizzati una probabilità di errore (α) di 0,05, una potenza (1-β) di 0,80 e una dimensione media dell'effetto (d) di 0,5. Supponendo un tasso di abbandono del 25%, utilizzeremo N = (64 + (64*25)/100) = 80 madri/gruppo per assicurarci di avere un campione/gruppo sufficiente per mostrare la significatività statistica. Il numero totale delle madri partecipanti sarà quindi 160 (80 casi e 80 controlli) e la loro prole - 160.

II. Approvazione etica Il consenso etico e l'autorizzazione a svolgere il progetto di ricerca saranno ottenuti dal Comitato etico e di ricerca della Facoltà di scienze della salute (HRSEC) presso la Walter Sisulu University (WSU). Lo scopo dello studio sarà spiegato alle donne che frequentano la clinica prenatale negli ospedali accademici Umtata General e Nelson Mandela, Mthatha, Provincia del Capo Orientale. Le donne in gravidanza che saranno disposte a partecipare dovranno firmare moduli di consenso informato per partecipare allo studio e consentire ai propri figli di partecipare allo studio dalla nascita.

III. Disegno dello studio In questo studio verrà utilizzato un disegno di studio prospettico caso controllo.

IV. Criteri di selezione Donne dell'Africa subsahariana con gravidanze singole non complicate di 11-14 settimane, essere HIV positive per il gruppo caso e HIV negative per il gruppo di controllo. Le donne in gravidanza con diabete di tipo 2, diabete gestazionale, malattie renali e cardiovascolari o qualsiasi condizione di salute critica saranno escluse dallo studio

V. Piano sperimentale

Pacchetto di lavoro 1 (donne incinte):

Per questo studio verranno registrate tre visite prenatali - Queste visite verranno effettuate durante il primo, secondo e terzo trimestre di gestazione.

Le seguenti informazioni e parametri saranno valutati durante ogni visita prenatale:

1. Informazioni di riferimento: storia demografica materna, ostetrica e familiare di malattie cardiovascolari durante la prima visita utilizzando un questionario - una volta fuori all'inizio dello studio.
2. Misure antropometriche: altezza e peso saranno determinati secondo le raccomandazioni delle raccomandazioni NHANES, 2009. L'IMC verrà calcolato utilizzando la formula peso/(altezza (m) x altezza (m)).
3. Misurazioni della pressione sanguigna: la pressione sanguigna in ufficio sarà misurata come descritto da Muntner et al., (2019) in triplicato a intervalli di tre minuti dopo 10 minuti di riposo in posizione seduta. Questo sarà seguito dalla misurazione ambulatoriale della pressione sanguigna 24 ore su 24 per la determinazione della pressione sanguigna diurna / notturna e del fenotipo di immersione.
4. Morfometria placentare, architettura e vascolarizzazione: Le arterie uterine, l'arteria ombelicale e l'arteria cerebrale media e l'indice pulsante medio dell'arteria uterina saranno determinati mediante ultrasuoni. Quando possibile, verrà calcolato il rapporto cerebroplacentare fetale.
5. Test di funzionalità endoteliale: lo spessore dell'intima media carotidea, la velocità dell'onda del polso e il rallentamento mediato dal flusso e la valutazione dell'arteria retinica saranno misurati mediante ecografia e Vicorder (Ellins, 2017). La microvascolarizzazione retinica sarà studiata per determinare la funzione endoteliale.
6. Marcatori della funzione endoteliale: Endocan, dimetil arginina asimmetrica (ADMA) e ossido nitrico (NO) saranno dosati utilizzando i kit ELISA secondo le istruzioni del produttore.
7. Marcatori di stress ossidativo: la perossidazione lipidica, la capacità antiossidante totale e l'8-idrossil-2-deossiguanina (8-OHdG) saranno determinate utilizzando i kit ELISA secondo i protocolli del produttore.
8. Indici del profilo lipidico: il colesterolo totale, i trigliceridi, il colesterolo LDL e il colesterolo HDL e il colesterolo LDL ossidato saranno misurati secondo il protocollo del produttore.
9. Resistenza all'insulina: la glicemia a digiuno, l'emoglobina glicata e le concentrazioni di insulina saranno determinate utilizzando kit secondo i metodi del produttore. La formula HOMA-IR verrà utilizzata per calcolare la resistenza all'insulina da glucosio veloce e insulina.
10. Indici di funzionalità renale: verranno determinati la velocità di filtrazione glomerulare (GFR), la creatinina e l'albumina e verrà calcolato il rapporto tra albumina e creatinina.

Pacchetto di lavoro 2 (Neonati):

Durante il parto, verrà raccolto il sangue del cordone ombelicale per la valutazione dei marcatori di stress ossidativo e della funzione endoteliale e dei marcatori epigenetici nel feto. Verranno raccolti i seguenti dati:

1. Misure antropometriche: Verranno misurati il ​​peso, la lunghezza, la circonferenza cranica del bambino.
2. Misurazioni della pressione sanguigna: la pressione sanguigna casuale verrà misurata mediante oscillometria utilizzando polsini monouso della misura del braccio. La pressione sanguigna sarà misurata in triplicato con intervalli di cinque minuti almeno un'ora dopo il pasto del bambino e quando il bambino dorme (Samantha et al, 2015).
3. Marcatori della funzione endoteliale: Endocan, dimetil arginina asimmetrica (ADMA) e ossido nitrico (NO) saranno dosati utilizzando i kit ELISA secondo le istruzioni del produttore.
4. Marcatori di stress ossidativo: la perossidazione lipidica, la capacità antiossidante totale e l'8-idrossil-2-deossiguanina (8-OHdG) saranno determinate utilizzando i kit ELISA secondo i protocolli del produttore.
5. Indici del profilo lipidico: il colesterolo totale, i trigliceridi, il colesterolo LDL e il colesterolo HDL e il colesterolo LDL ossidato saranno misurati secondo il protocollo del produttore.
6. Resistenza all'insulina: la glicemia del cordone ombelicale e le concentrazioni di insulina saranno determinate secondo i metodi del produttore. La formula HOMA-IR verrà utilizzata per calcolare la resistenza all'insulina.
7. Indici di funzionalità renale: verranno determinati la velocità di filtrazione glomerulare (GFR), la creatinina e l'albumina. Verrà determinato anche il rapporto tra albumina e creatinina.
8. Marcatori epigenetici: concentrazioni nelle urine di 5-metil-2-deossicitidina e trimetil istone H3K9 utilizzando il kit Elisa secondo i metodi del produttore.

Pacchetto di lavoro 3 (Madri a 3 mesi di follow-up postnatale)

Le madri verranno seguite tre mesi dopo il parto. Durante questa visita non verranno prelevati campioni di sangue né di urina dalle madri. I campioni di urina saranno raccolti dai bambini per la misurazione dei responsabili del rischio CVD. Verranno raccolti i seguenti dati:

1. Misure antropometriche: altezza e peso saranno determinati secondo le raccomandazioni delle raccomandazioni NHANES, 2009. L'IMC sarà calcolato utilizzando la formula peso/(altezza (m) x altezza (m)) sia per la madre che per il bambino.
2. Misurazioni della pressione sanguigna: la pressione sanguigna in ufficio sarà misurata come descritto da Puntner et al., (2019) in triplicato a intervalli di tre minuti dopo 10 minuti di riposo in posizione seduta. Questo sarà seguito dalla misurazione ambulatoriale della pressione sanguigna 24 ore su 24 per la determinazione della pressione sanguigna diurna/notturna e del fenotipo di immersione - madre
3. La pressione sanguigna sarà misurata nel bambino in posizione supina.
4. Test di funzionalità endoteliale: lo spessore dell'intima media carotidea, la velocità dell'onda del polso e il rallentamento mediato dal flusso e la valutazione dell'arteria retinica saranno misurati mediante ecografia e Vicorder (Ellins, 2017). La microvascolarizzazione retinica sarà studiata per determinare la funzione endoteliale nella madre.
5. Test di funzionalità endoteliale: velocità dell'onda del polso e rallentamento mediato dal flusso utilizzando il Vicorder nel bambino (Ng et al, 2018).

Pacchetto di lavoro 4 (Bambino):

I dati saranno raccolti dai bambini a tre, dodici e ventiquattro mesi dopo la nascita come segue:

1. Misure antropometriche: Verranno misurati il ​​peso, la lunghezza, la circonferenza cranica del bambino.
2. Misurazioni della pressione sanguigna: la pressione sanguigna casuale verrà misurata mediante oscillometria utilizzando polsini monouso della misura del braccio. La pressione sanguigna sarà misurata in triplicato con intervalli di cinque minuti almeno un'ora dopo il pasto del bambino e quando il bambino dorme (Samantha et al, 2015).
3. Test di funzionalità endoteliale: velocità dell'onda del polso e rallentamento mediato dal flusso utilizzando il Vicorder (Ng et al, 2018).
4. Marcatori della funzione endoteliale: I campioni di urina saranno raccolti per Endocan, dimetil arginina asimmetrica (ADMA) e dosaggi di ossido nitrico (NO) utilizzando i kit ELISA secondo le istruzioni del produttore.
5. Marcatori di stress ossidativo: la perossidazione lipidica, la capacità antiossidante totale e l'8-idrossil-2-deossiguanina (8-OHdG) saranno determinate nei campioni di urina utilizzando i kit ELISA secondo i protocolli del produttore.
6. Indici di funzionalità renale: Saranno determinate la creatinina e l'albumina nelle urine. Verrà determinato anche il rapporto tra albumina e creatinina.
7. Marcatori epigenetici: concentrazioni nelle urine di 5-metil-2-deossicitidina e trimetil istone H3K9 utilizzando il kit Elisa secondo i metodi del produttore.
8. Test di funzionalità endoteliale: velocità dell'onda del polso e rallentamento mediato dal flusso utilizzando il Vicorder (Ng et al, 2018).