Antiretroviraaliselle hoidolle (ART) joutuneiden lasten kardiometabolinen terveys kohdussa (ARTMOMSBABES)

I. Otoskoon laskenta Tilastollisen merkitsevyyden osoittamiseen vaadittava osallistujamäärä perustuu aiemmin julkaistuihin tutkimuksiin, joissa verisuonten toimintaa arvioitiin HIV-potilailla (Agu et al., 2019). Otoskoon (n = 64 henkilöä) laskemiseen käytettiin virhetodennäköisyyttä (α) 0,05 ja tehoa (1-β) 0,80 ja keskimääräistä vaikutuskokoa (d) 0,5. Olettaen, että keskeyttämisaste on 25 %, käytämme N = (64 + (64*25)/100) = 80 äitiä/ryhmä varmistaaksemme, että meillä on tarpeeksi otoskokoa/ryhmää osoittamaan tilastollista merkitsevyyttä. Osallistuvien äitien kokonaismäärä on siis 160 (80 tapausta ja 80 kontrollia) ja heidän jälkeläisensä - 160.

II. Eettinen hyväksyntä Eettinen suostumus ja lupa tutkimusprojektin toteuttamiseen hankitaan Walter Sisulu -yliopiston (WSU) terveystieteiden tiedekunnan tutkimus- ja etiikkakomitealta (HRSEC). Tutkimuksen tarkoitus selitetään naisille, jotka käyvät synnytysklinikalla Umtata Generalin ja Nelson Mandela Academic Hospitalsissa, Mthathassa, Eastern Cape Provincessa. Raskaana olevien naisten, jotka ovat halukkaita osallistumaan, tulee allekirjoittaa tietoinen suostumuslomake osallistuakseen tutkimukseen ja sallia lastensa osallistua tutkimukseen syntymästä lähtien.

III. Tutkimuksen suunnittelu Tässä tutkimuksessa käytetään prospektiivista tapauskontrollitutkimussuunnitelmaa.

IV. Valintaperusteet Saharan eteläpuoliset naiset, joilla on yksittäinen komplisoitumaton 11-14 viikon ikäinen raskaus, ovat HIV-positiivisia tapausryhmässä ja HIV-negatiivisia kontrolliryhmässä. Raskaana olevat naiset, joilla on tyypin 2 diabetes, raskausdiabetes, munuais- ja sydän- ja verisuonisairaudet tai mikä tahansa kriittinen terveydentila, suljetaan pois tutkimuksesta

V. Kokeellinen suunnitelma

Työpaketti 1 (raskaana olevat naiset):

Tätä tutkimusta varten kirjataan kolme synnytystä edeltävää käyntiä - Nämä käynnit tehdään raskauden ensimmäisen, toisen ja kolmannen kolmanneksen aikana.

Seuraavat tiedot ja parametrit arvioidaan jokaisen synnytystä edeltävän käynnin aikana:

1. Perustiedot: Äidin sydän- ja verisuonisairauksien demografinen, synnytys- ja perhehistoria ensimmäisen käynnin aikana kyselylomakkeella - kerran tutkimuksen alussa.
2. Antropometriset mittaukset: Pituus ja paino määritetään NHANES, 2009 suositusten mukaisesti. BMI lasketaan kaavalla paino/(pituus (m) x pituus (m)).
3. Verenpainemittaukset: Toimistoverenpaine mitataan Muntner et al.:n (2019) kuvaamalla tavalla kolmena kappaleena kolmen minuutin välein 10 minuutin levon jälkeen istuma-asennossa. Tätä seuraa 24 tunnin ambulatorinen verenpainemittaus päivä-/yöverenpaineen ja dipping-fenotyypin määrittämiseksi.
4. Istukan morfometria, arkkitehtuuri ja vaskularisaatio: Kohdun valtimoiden, napavaltimon ja keskimmäisen aivovaltimon ja kohdun valtimon keskimääräinen pulsaatioindeksi määritetään ultraäänellä. Sikiön aivoistukan suhde lasketaan mahdollisuuksien mukaan.
5. Endoteelitoimintatestit: Kaulavaltimon sisäkalvon paksuus, pulssiaallon nopeus ja virtausvälitteinen hidastuminen ja verkkokalvon valtimon arviointi mitataan ultraäänellä ja Vicorderilla (Ellins, 2017). Verkkokalvon mikrovaskulaarisuutta tutkitaan endoteelin toiminnan määrittämiseksi.
6. Endoteelitoiminnan markkerit: Endokaani, asymmetrinen dimetyyliarginiini (ADMA) ja typpioksidi (NO) määritetään käyttämällä ELISA-pakkauksia valmistajan ohjeiden mukaisesti.
7. Oksidatiivisen stressin merkkiaineet: Lipidiperoksidaatio, antioksidanttikapasiteetti ja 8-hydroksyyli-2-deoksiguaniini (8-OHdG) määritetään käyttämällä ELISA-sarjoja valmistajan ohjeiden mukaisesti.
8. Lipidiprofiiliindeksit: Kokonaiskolesteroli, triglyseridi, LDL-kolesteroli ja HDL-kolesteroli sekä hapettunut LDL-kolesteroli mitataan valmistajan ohjeiden mukaisesti.
9. Insuliiniresistenssi: Paastoglukoosin, glykoituneen hemoglobiinin ja insuliinin pitoisuudet määritetään sarjoilla valmistajan menetelmien mukaisesti. HOMA-IR-kaavaa käytetään insuliiniresistenssin laskemiseen nopeasta glukoosista ja insuliinista.
10. Munuaisten toimintaindeksit: glomerulusten suodatusnopeus (GFR), kreatiniini ja albumiini määritetään ja albumiinin ja kreatiniinin suhde lasketaan.

Työpaketti 2 (vastasyntyneet):

Synnytyksen aikana napanuoraverta kerätään oksidatiivisen stressin ja endoteelin toiminnan merkkiaineiden sekä sikiön epigeneettisten merkkiaineiden arvioimiseksi. Seuraavat tiedot kerätään:

1. Antropometriset mittaukset: Lapsen paino, pituus ja kallon ympärysmitta mitataan.
2. Verenpaineen mittaukset: Satunnainen verenpaine mitataan oskillometrisesti käyttämällä kertakäyttöisiä käsivarren kokoisia soveltuvia mansetteja. Verenpaine mitataan kolmena kappaleena viiden minuutin välein vähintään tunnin kuluttua vauvan ruokailusta ja vauvan nukkuessa (Samantha et al, 2015).
3. Endoteelitoiminnan markkerit: Endokaani, asymmetrinen dimetyyliarginiini (ADMA) ja typpioksidi (NO) määritetään käyttämällä ELISA-pakkauksia valmistajan ohjeiden mukaisesti.
4. Oksidatiivisen stressin merkkiaineet: Lipidiperoksidaatio, antioksidanttikapasiteetti ja 8-hydroksyyli-2-deoksiguaniini (8-OHdG) määritetään käyttämällä ELISA-sarjoja valmistajan ohjeiden mukaisesti.
5. Lipidiprofiiliindeksit: Kokonaiskolesteroli, triglyseridi, LDL-kolesteroli ja HDL-kolesteroli sekä hapettunut LDL-kolesteroli mitataan valmistajan ohjeiden mukaisesti.
6. Insuliiniresistenssi: napanuoraveren glukoosi- ja insuliinipitoisuudet määritetään valmistajan menetelmien mukaisesti. HOMA-IR-kaavaa käytetään insuliiniresistenssin laskemiseen.
7. Munuaisten toimintaindeksit: glomerulusten suodatusnopeus (GFR), kreatiniini ja albumiini määritetään. Myös albumiinin ja kreatiniinin suhde määritetään.
8. Epigeneettiset markkerit: 5-metyyli-2-deoksisytidiinin ja trimetyylihistonin H3K9 pitoisuudet virtsassa käyttäen Elisa-sarjaa valmistajan menetelmien mukaisesti.

Työpaketti 3 (Äidit 3 kk synnytyksen jälkeen)

Äitejä seurataan kolmen kuukauden kuluttua synnytyksestä. Tämän käynnin aikana äideiltä ei oteta verta eikä virtsanäytteitä. Vauvoilta otetaan virtsanäytteitä sydän- ja verisuonitautien riskitekijöiden mittaamiseksi. Seuraavat tiedot kerätään:

1. Antropometriset mittaukset: Pituus ja paino määritetään NHANES, 2009 suositusten mukaisesti. BMI lasketaan kaavalla paino/(pituus (m) x pituus (m)) sekä äidille että vauvalle.
2. Verenpainemittaukset: Toimistoverenpaine mitataan Puntner et al.:n (2019) kuvaamalla tavalla kolmena kappaleena kolmen minuutin välein 10 minuutin levon jälkeen istuma-asennossa. Tätä seuraa 24 tunnin ambulatorinen verenpainemittaus päivä-/yöverenpaineen ja dippausfenotyypin määrittämiseksi - äiti
3. Vauvan verenpaine mitataan makuuasennossa.
4. Endoteelitoimintatestit: Kaulavaltimon sisäkalvon paksuus, pulssiaallon nopeus ja virtausvälitteinen hidastuminen ja verkkokalvon valtimon arviointi mitataan ultraäänellä ja Vicorderilla (Ellins, 2017). Verkkokalvon mikrovaskulaarisuutta tutkitaan äidin endoteelin toiminnan määrittämiseksi.
5. Endoteelin toimintatestit: pulssiaallon nopeus ja virtausvälitteinen hidastuminen Vicorderilla vauvassa (Ng et al, 2018).

Työpaketti 4 (lapsi):

Tietoja kerätään lapsilta kolmen, kahdentoista ja kahdenkymmenenneljän kuukauden kuluttua syntymästä seuraavasti:

1. Antropometriset mittaukset: Lapsen paino, pituus ja kallon ympärysmitta mitataan.
2. Verenpaineen mittaukset: Satunnainen verenpaine mitataan oskillometrisesti käyttämällä kertakäyttöisiä käsivarren kokoisia soveltuvia mansetteja. Verenpaine mitataan kolmena kappaleena viiden minuutin välein vähintään tunnin kuluttua vauvan ruokailusta ja vauvan nukkuessa (Samantha et al, 2015).
3. Endoteelin toimintatestit: pulssiaallon nopeus ja virtausvälitteinen hidastuminen Vicorderilla (Ng et al, 2018).
4. Endoteelitoiminnan markkerit: Virtsanäytteet kerätään Endokaani-, asymmetrisen dimetyyliarginiinin (ADMA) ja typpioksidin (NO) määrityksiä varten käyttämällä ELISA-pakkauksia valmistajan ohjeiden mukaisesti.
5. Oksidatiivisen stressin merkkiaineet: Lipidiperoksidaatio, antioksidanttikapasiteetti ja 8-hydroksyyli-2-deoksiguaniini (8-OHdG) määritetään virtsanäytteistä ELISA-sarjoilla valmistajan ohjeiden mukaisesti.
6. Munuaisten toimintaindeksit: Virtsan kreatiniini ja albumiini määritetään. Myös albumiinin ja kreatiniinin suhde määritetään.
7. Epigeneettiset markkerit: 5-metyyli-2-deoksisytidiinin ja trimetyylihistoni H3K9:n pitoisuudet virtsassa käyttäen Elisa-sarjaa valmistajan menetelmien mukaisesti.
8. Endoteelin toimintatestit: pulssiaallon nopeus ja virtausvälitteinen hidastuminen Vicorderilla (Ng et al, 2018).