Implantacja autologicznych dorosłych komórek macierzystych pochodzących z tkanki tłuszczowej w leczeniu chorób rogówki (ADASC-CT-CD) (ADASCs-CT-CD)

Różne typy komórek macierzystych zostały wykorzystane na różne sposoby w kilku projektach badawczych, aby znaleźć optymalną procedurę regeneracji zrębu rogówki człowieka. Obejmowało ono kilka podejść, które można sklasyfikować jako śródstromalną implantację komórek macierzystych (1) samodzielnie, (2) razem z rusztowaniem biodegradowalnym, (3) z rusztowaniem nieulegającym biodegradacji lub (4) z odkomórkowionym rusztowaniem zrębu rogówki. Złożona struktura zrębu rogówki nie została jeszcze odtworzona, a stosowanie syntetycznych konstrukcji opartych na rusztowaniach ma dobrze znane wady. Ostatnio opisano kilka technik decelularyzacji rogówki, które zapewniają bezkomórkową macierz zewnątrzkomórkową rogówki (ECM). Rusztowania te zyskały uwagę w ciągu ostatnich kilku lat. Rusztowanie zapewnia bardziej naturalne środowisko dla wzrostu i różnicowania komórek w porównaniu z rusztowaniami syntetycznymi. Ponadto składniki ECM są generalnie zachowane wśród gatunków i są dobrze tolerowane nawet przez ksenogenicznych biorców. Keratocyty są niezbędne do przebudowy zrębu rogówki i prawidłowej fizjologii nabłonka. Podkreśla to znaczenie przeszczepiania substytutu komórkowego wraz ze wsparciem strukturalnym (bezkomórkowa ECM) w celu podjęcia tych krytycznych funkcji w homeostazie rogówki. Zgodnie z najlepszą wiedzą badaczy, we wszystkich próbach ponownego zaludnienia odkomórkowionych rusztowań rogówki wykorzystywano komórki rogówki, ale komórki te mają poważne wady, które wykluczają ich autologiczne zastosowanie w praktyce klinicznej (uszkodzenie tkanki dawcy, brak komórek i nieefektywne podhodowle komórkowe) ), stąd wysiłki zmierzające do znalezienia pozagałkowego źródła komórek autologicznych. Niedawne badanie przeprowadzone przez badaczy wykazało doskonałą biointegrację ludzkich pozbawionych komórek blaszek podścieliska rogówki (o grubości 100 µm) z kolonizacją h-ADASC i bez kolonii wewnątrz rogówki królika in vivo, bez obserwowania jakiejkolwiek odpowiedzi odrzucenia, mimo że przeszczep jest ksenogeniczny. Badacze wykazali również różnicowanie h-ADASC w funkcjonalne keratocyty wewnątrz tych implantów in vivo, które następnie osiągnęły właściwą biofunkcjonalizację. Zdaniem badacza przeszczep komórek macierzystych wraz z odkomórkowioną ECM rogówki byłby najlepszą techniką skutecznego przywrócenia grubości chorej rogówki ludzkiej, takiej jak w przypadku stożka rogówki. Dzięki tej technice i użyciu zewnątrzgałkowych mezenchymalnych komórek macierzystych pochodzących od pacjentów możliwe jest przekształcenie alergennych przeszczepów w funkcjonalne autologiczne przeszczepy, teoretycznie unikając ryzyka odrzucenia.

Przebieg procesu jest zdefiniowany w następujący sposób: (1) badanie akt: które rozpoczyna się od otrzymania dokumentacji pacjenta, dokumentacja zostanie przekazana wyznaczonym koordynatorom lekarzy w celu przeglądu i złożenia raportu medycznego, następnie raport medyczny zostanie oceniony w ciągu komisja terapii komórkowej i pacjent zostaną poproszeni o poddanie się badaniu klinicznemu, a po konsultacji pacjent otrzyma odpowiedź z decyzją lekarską z akceptacją lub odmową rekrutacji, a jeśli tak, złożenie krótkiego raportu z zabiegu i wyjaśnienie szczegółowo pacjentowi, w przypadku wyrażenia przez pacjenta zgody na udział w badaniu należy podpisać formularz zgody, (2) przyjęcie pacjenta: które może rozpocząć się od wypełnienia formularzy zabiegowych i wykonania oceny przedoperacyjnej (opracowanie wstępne zdefiniowana jako ocena kliniczna i biologiczna na podstawie C.A.S, która może obejmować dokonaną samodzielnie i najlepiej skorygowaną okularami ostrość wzroku, refrakcję, badanie w lampie szczelinowej, ciśnienie wewnątrzgałkowe, badanie dna oka, topografię rogówki afilia, aberrometria, liczba komórek śródbłonka (mikroskopia zwierciadlana), konfokalna mikroskopia rogówki, a także badania krwi), wszystkie te badania powinny być wykonane przez specjalistę i ocenione przez okulistę. Następnie lipoaspiracja podskórnej tkanki tłuszczowej do wykonania przez chirurga plastycznego, obróbka próbki w zakładzie cGMP w celu izolacji i charakterystyki frakcji naczyniowej zrębu wzbogaconej ADASC oraz przygotowanie blaszek (ocena kontroli jakości zostanie przeprowadzona przed i po wszystkich etapach procedury, począwszy od pobrania ADASC do implantacji, w tym hodowli komórkowej, spoczynku komórek, decelularyzacji blaszki rogówki ludzkiej, recelularyzacji blaszek ADASC i implantacji; ocena będzie obejmować żywotność komórek, liczbę komórek, apoptozę komórek, immunofenotypowanie, infekcja, zapalenie poprzez analizę wydzielanych cytokin z ADASC, cięcie blaszki, grubość blaszki, immunobarwienie, mikroskopia konfokalna itp.); (3) poród (implantacja), który rozpoczyna się znieczuleniem okołogałkowym lub pozagałkowym, w którym pacjentka jest umieszczana pod mikroskopem operacyjnym, po którym następuje wspomagane laserem femtosekundowym wycięcie blaszek środkowego podścieliska, po czym autologiczne ADASC lub blaszki lub blaszki recelularyzowane zostaną umieszczone w kieszeni, a na koniec zamknięte przez lepsze zamknięcie nacięcia. Pacjent zostanie poddany antybiotykoterapii / sterydom przez określony czas, a zespół będzie obserwowany przez 1 tydzień, 2 tygodnie, 1 miesiąc, 3 miesiące, 6 miesięcy.

Ten protokół terapii komórkowej będzie stosowany wyłącznie w VISSUM (Alicante-Hiszpania), Barraquer Ophthalmology Centre (Barcelona-Hiszpania), Ramon y Cajal Hospital (Madryt-Hiszpania), Asturias Prince Hospital (Madryt-Hiszpania) i Murcia Hospital (Murcia -Hiszpania), we współpracy z Miguelem Hernandezem z Elche University (Elche-Hiszpania).

Rekrutacja pacjentów będzie miała miejsce: do lipoaspiracji, przetwarzania, przygotowania blaszek komórkowych i oceny kontroli jakości w VISSUM (Alicante-Hiszpania), Centrum Okulistyki Barraquer (Barcelona-Hiszpania), Szpitalu Ramon y Cajal (Madryt-Hiszpania) i Murcji Szpital (Murcja-Hiszpania). Wszystkimi tymi etapami zarządza VISSUM (prof. J. ALIO).