Имплантация взрослых стволовых клеток, полученных из аутологичной жировой ткани, при заболеваниях роговицы (ADASCs-CT-CD) (ADASCs-CT-CD)

Различные типы стволовых клеток использовались по-разному в нескольких исследовательских проектах, чтобы найти оптимальную процедуру для регенерации стромы роговицы человека. Он включал несколько подходов, которые можно классифицировать как интрастромальную имплантацию стволовых клеток (1) отдельно, (2) вместе с биоразлагаемым каркасом, (3) с небиоразлагаемым каркасом или (4) с децеллюляризованным стромальным каркасом роговицы. Сложная структура стромы роговицы еще не воспроизведена, и существуют хорошо известные недостатки использования конструкций на основе синтетических каркасов. Недавно было описано несколько методов децеллюляризации роговицы, которые обеспечивают бесклеточный внеклеточный матрикс роговицы (ECM). Эти леса привлекли внимание в последние несколько лет. Каркас обеспечивает более естественную среду для роста и дифференцировки клеток по сравнению с синтетическими каркасами. Кроме того, компоненты ECM, как правило, сохраняются среди видов и хорошо переносятся даже ксеногенными реципиентами. Кератоциты необходимы для ремоделирования стромы роговицы и для нормальной физиологии эпителия. Это подчеркивает важность трансплантации клеточного заменителя вместе со структурной поддержкой (бесклеточный ВКМ) для выполнения этих критических функций в гомеостазе роговицы. Насколько известно исследователям, во всех попытках репопуляции децеллюляризованных каркасов роговицы использовались клетки роговицы, но эти клетки имеют серьезные недостатки, препятствующие их аутологичному использованию в клинической практике (повреждение донорской ткани, отсутствие клеток и неэффективные клеточные субкультуры). ), таким образом, попытки найти экстраокулярный источник аутологичных клеток. Недавнее исследование, проведенное исследователями, показало идеальную биологическую интеграцию децеллюляризованных стромальных пластинок роговицы человека (толщина 100 мкм) с колонизацией h-ADASC и без нее внутри роговицы кролика in vivo, при этом не наблюдалось какой-либо реакции отторжения, несмотря на то, что трансплантат был ксеногенным. Исследователи также продемонстрировали дифференцировку h-ADASC в функциональные кератоциты внутри этих имплантатов in vivo, которые затем достигли своей надлежащей биофункционализации. По мнению исследователя, трансплантация стволовых клеток вместе с децеллюляризированным ВКМ роговицы была бы наилучшей методикой для эффективного восстановления толщины больной роговицы человека, как при кератоконусе. Благодаря этому методу и использованию экстраокулярных мезенхимальных стволовых клеток пациентов можно трансформировать аллергенные трансплантаты в функциональные аутологичные трансплантаты, теоретически избегая риска отторжения.

Поток процесса определяется следующим образом: (1) изучение файла: которое начинается с получения файла пациента, файл будет отправлен назначенным врачам-координаторам для рассмотрения и представления медицинского отчета, затем медицинский отчет будет оценен в течение комитет по клеточной терапии и пациенту будет предложено пройти клиническое обследование, и после консультации последует ответ пациенту с медицинским решением с одобрением или отказом от набора, и если да, будет представлен и объяснен краткий отчет о процедуре. подробно сообщается пациенту, форма согласия должна быть подписана, если пациент согласен быть включенным в исследование, (2) госпитализация пациента: которая может начаться с заполнения форм процедуры и проведения предоперационной оценки (первоначальная обработка определяется как клиническая и биологическая оценка при CAS, которая может включать в себя остроту зрения без посторонней помощи и с наилучшей коррекцией в очках, рефракцию, исследование с помощью щелевой лампы, внутриглазное давление, офтальмоскопию, топографию роговицы aphy, аберрометрия, подсчет эндотелиальных клеток (зеркальная микроскопия), конфокальная микроскопия роговицы, а также анализы крови), все эти исследования должны проводиться специалистом и проверяться офтальмологом. Затем проводится липоаспирация подкожной жировой ткани пластическим хирургом, обработка образцов на объекте cGMP для выделения и характеристики стромально-сосудистой фракции, обогащенной ADASC, а также подготовка пластинок (оценка контроля качества будет осуществляться до и после всех этапов процедуры, начиная от сбора ADASCs до имплантации, включая культивирование клеток, клеточный покой, децеллюляризацию пластинки роговицы человека, рецеллюляризацию пластинок с помощью ADASCs и имплантацию; оценка будет включать жизнеспособность клеток, количество клеток, клеточный апоптоз, иммунофенотипирование, инфекция, воспаление путем анализа секретируемых цитокинов из ADASCs, разрезание пластинки, толщина пластинки, иммуноокрашивание, конфокальная микроскопия и др.); (3) родоразрешение (имплантация), которое начинается с перибульбарной или ретробульбарной анестезии, когда пациент помещается под операционный микроскоп, за которым следует фемтосекундная лазерная диссекция срединной стромальной пластинки, затем будут размещены аутологичные ADASC или пластинки или рецеллюляризированные пластинки. внутри кармана и, наконец, закрывается верхней застежкой с разрезом. Пациент будет подвергаться лечению антибиотиками/стероидами в течение определенного периода, а затем будет сопровождаться командой через 1 неделю, 2 недели, 1 месяц, 3 месяца, 6 месяцев.

Этот протокол клеточной терапии будет применяться исключительно в VISSUM (Аликанте, Испания), офтальмологическом центре Барракер (Барселона, Испания), больнице Рамон-и-Кахаль (Мадрид, Испания), больнице Принца Астурии (Мадрид, Испания) и больнице Мурсии (Мурсия). -Испания), в сотрудничестве с Мигелем Эрнандесом из Университета Эльче (Эльче-Испания).

Набор пациентов будет проходить: для липоаспирации, обработки, подготовки клеточных пластинок и оценки контроля качества в VISSUM (Аликанте, Испания), офтальмологическом центре Барракер (Барселона, Испания), больнице Рамон-и-Кахаль (Мадрид, Испания) и Мурсии. Госпиталь (Мурсия-Испания). Все эти этапы управляются VISSUM (проф. Дж. АЛИО).