Impianto di cellule staminali adulte autologhe di derivazione adiposa per malattie della cornea (ADASCs-CT-CD) (ADASCs-CT-CD)

Diversi tipi di cellule staminali sono stati utilizzati in vari modi in diversi progetti di ricerca per trovare la procedura ottimale per rigenerare lo stroma corneale umano. Comprendeva diversi approcci che possono essere classificati come impianto intrastromale di cellule staminali (1) da solo, (2) insieme a un'impalcatura biodegradabile, (3) con un'impalcatura non biodegradabile o (4) con un'impalcatura stromale corneale decellularizzata. La complessa struttura dello stroma corneale non è stata ancora replicata e ci sono ben noti inconvenienti nell'uso di progetti basati su scaffold sintetici. Recentemente sono state descritte diverse tecniche di decellularizzazione corneale, che forniscono una matrice extracellulare corneale acellulare (ECM). Queste impalcature hanno guadagnato attenzione negli ultimi anni. Lo scaffold fornisce un ambiente più naturale per la crescita e la differenziazione delle cellule rispetto agli scaffold sintetici. Inoltre, i componenti dell'ECM sono generalmente conservati tra le specie e sono ben tollerati anche dai riceventi xenogenici. I cheratociti sono essenziali per il rimodellamento dello stroma corneale e per la normale fisiologia epiteliale. Ciò evidenzia l'importanza di trapiantare un sostituto cellulare insieme al supporto strutturale (ECM acellulare) per svolgere queste funzioni critiche nell'omeostasi corneale. Per quanto a conoscenza dei ricercatori, tutti i tentativi di ripopolare gli scaffold corneali decellularizzati hanno utilizzato cellule corneali, ma queste cellule presentano gravi inconvenienti che ne precludono l'uso autologo nella pratica clinica (danno del tessuto donatore, mancanza di cellule e sottocolture cellulari inefficienti ), quindi gli sforzi per trovare una fonte extraoculare di cellule autologhe. Un recente studio dei ricercatori ha mostrato una perfetta biointegrazione di lamine stromali corneali decellularizzate umane (spessore 100 µm) con e senza colonizzazione di h-ADASCs all'interno della cornea di coniglio in vivo, senza osservare alcuna risposta di rigetto nonostante l'innesto sia xenogenico. I ricercatori hanno anche dimostrato la differenziazione degli h-ADASC in cheratociti funzionali all'interno di questi impianti in vivo, che hanno poi raggiunto la loro corretta biofunzionalizzazione. Secondo l'opinione dello sperimentatore, il trapianto di cellule staminali insieme alla ECM corneale decellularizzata sarebbe la tecnica migliore per ripristinare efficacemente lo spessore di una cornea umana malata, come nel cheratocono. Attraverso questa tecnica, e utilizzando cellule staminali mesenchimali extraoculari di pazienti, è possibile trasformare innesti allergenici in innesti autologhi funzionali, evitando teoricamente il rischio di rigetto.

Il flusso del processo è definito come segue: (1) lo studio del file: che inizia ricevendo il file del paziente, il file verrà inoltrato ai coordinatori dei medici nominati per la revisione e l'invio del rapporto medico, quindi il rapporto medico sarà valutato entro al comitato di terapia cellulare e al paziente verrà richiesto un esame clinico e, previa consultazione, seguirà una risposta al paziente con decisione medica con l'approvazione o la non assunzione e, in caso affermativo, verrà presentata e spiegata una breve relazione sulla procedura in dettaglio al paziente, deve essere firmato un modulo di consenso se il paziente accetta di essere incluso nello studio, (2) il ricovero del paziente: che può iniziare con il completamento dei moduli procedurali e la valutazione preoperatoria (lavoro iniziale fino definito come una valutazione clinica e biologica su C.A.S che può includere l'acuità visiva non assistita e con la migliore correzione degli occhiali, rifrazione, esame con lampada a fessura, pressione intraoculare, fundoscopia, topografia corneale afia, aberrometria, conteggio delle cellule endoteliali (microscopia speculare), microscopia confocale corneale, così come esami del sangue), tutti questi test dovrebbero essere effettuati da uno specialista e rivisti da un oftalmologo. Quindi, una lipoaspirazione del tessuto adiposo sottocutaneo eseguita da un chirurgo plastico, l'elaborazione del campione presso una struttura cGMP per l'isolamento e la caratterizzazione della frazione vascolare stromale arricchita con ADASC e la preparazione delle lamine (la valutazione del controllo di qualità sarà realizzata prima e dopo tutte le fasi della procedura a partire dalla raccolta degli ADASC fino all'impianto, compresa la coltura cellulare, la quiescenza cellulare, la decellularizzazione della lamina corneale umana, la ricellularizzazione delle lamine con gli ADASC e l'impianto; la valutazione includerà la vitalità cellulare, il numero cellulare, l'apoptosi cellulare, immunofenotipizzazione, infezione, infiammazione mediante analisi delle citochine secrete dagli ADASC, taglio della lamina, spessore della lamina, immunocolorazione, microscopia confocale, ecc.); (3) il parto (impianto) che inizia con un'anestesia peribulbare o retrobulbare in cui il paziente viene posto sotto il microscopio operatorio, seguito da una dissezione lamellare medio-stromale assistita da laser a femtosecondi, quindi verranno posizionate le ADASC autologhe o le lamine o le lamine ricellularizzate all'interno della tasca, ed infine chiusa da una chiusura ad incisione superiore. Il paziente verrà sottoposto ad antibiotici/steroidi per un periodo definito e seguito dal team a 1 settimana, 2 settimane, 1 mese, 3 mesi, 6 mesi.

Questo protocollo di terapia cellulare sarà applicato esclusivamente presso VISSUM (Alicante-Spagna), Barraquer Ophthalmology Center (Barcellona-Spagna), Ramon y Cajal Hospital (Madrid-Spagna), Asturias Prince Hospital (Madrid-Spagna) e Murcia Hospital (Murcia -Spagna), in affiliazione con Miguel Hernandez dell'Università di Elche (Elche-Spagna).

Il reclutamento del paziente avverrà: per la lipoaspirazione, l'elaborazione, la preparazione delle lamine cellularizzate e le valutazioni del controllo di qualità presso VISSUM (Alicante-Spagna), Barraquer Ophthalmology Center (Barcellona-Spagna), Ramon y Cajal Hospital (Madrid-Spagna) e Murcia Ospedale (Murcia-Spagna). Tutti questi passaggi sono gestiti da VISSUM (Prof. J. ALIO).