Implante autólogo de células-tronco adultas derivadas de tecido adiposo para doenças da córnea (ADASCs-CT-CD) (ADASCs-CT-CD)

Diferentes tipos de células-tronco têm sido usados ​​de várias maneiras em vários projetos de pesquisa para encontrar o procedimento ideal para regenerar o estroma da córnea humana. Ele incluiu várias abordagens que podem ser classificadas como implantação intraestromal de células-tronco (1) isoladamente, (2) em conjunto com um andaime biodegradável, (3) com um andaime não biodegradável ou (4) com um andaime estromal corneano descelularizado. A estrutura complexa do estroma da córnea ainda não foi replicada e existem desvantagens bem conhecidas no uso de designs baseados em andaimes sintéticos. Recentemente, várias técnicas de descelularização da córnea foram descritas, as quais fornecem uma matriz extracelular (MEC) corneana acelular. Esses andaimes ganharam atenção nos últimos anos. O andaime fornece um ambiente mais natural para o crescimento e diferenciação de células quando comparado com andaimes sintéticos. Além disso, os componentes da ECM são geralmente conservados entre as espécies e são bem tolerados mesmo por receptores xenogênicos. Os ceratócitos são essenciais para a remodelação do estroma da córnea e para a fisiologia epitelial normal. Isso destaca a importância de transplantar um substituto celular junto com o suporte estrutural (ECM acelular) para realizar essas funções críticas na homeostase da córnea. Tanto quanto é do conhecimento dos investigadores, todas as tentativas de repovoar andaimes descelularizados da córnea usaram células da córnea, mas essas células têm grandes desvantagens que impedem seu uso autólogo na prática clínica (dano do tecido do doador, falta de células e subculturas celulares ineficientes ), daí os esforços para encontrar uma fonte extraocular de células autólogas. Um estudo recente dos pesquisadores mostrou uma biointegração perfeita de lâminas estromais corneanas humanas decelularizadas (100 µm de espessura) com e sem colonização de h-ADASCs dentro da córnea de coelho in vivo, sem observar qualquer resposta de rejeição apesar do enxerto ser xenogênico. Os pesquisadores também demonstraram a diferenciação de h-ADASCs em ceratócitos funcionais dentro desses implantes in vivo, que então alcançaram sua biofuncionalização adequada. Segundo a opinião do pesquisador, o transplante de células-tronco juntamente com ECM corneana descelularizada seria a melhor técnica para restaurar efetivamente a espessura de uma córnea humana doente, como no ceratocone. Por meio dessa técnica, e utilizando células-tronco mesenquimais extraoculares de pacientes, é possível transformar enxertos alergênicos em enxertos autólogos funcionais, evitando teoricamente o risco de rejeição.

O fluxo do processo é definido da seguinte forma: (1) estudo de prontuário: que começa com o recebimento do prontuário do paciente, o prontuário será encaminhado aos médicos coordenadores indicados para análise e envio do laudo médico, em seguida o laudo será avaliado dentro o comitê de terapia celular e o paciente serão solicitados para exame clínico, e após a consulta, uma resposta ao paciente com decisão médica seguirá com a aprovação ou não para ser recrutado e, em caso afirmativo, um breve relatório sobre o procedimento será apresentado e explicado em detalhes para o paciente, um formulário de consentimento deve ser assinado se o paciente concordar em ser incluído no estudo, (2) a admissão do paciente: que pode começar com o preenchimento dos formulários do procedimento e a avaliação pré-operatória (avaliação inicial definido como uma avaliação clínica e biológica em C.A.S, que pode incluir acuidade visual sem auxílio e corrigida por melhores óculos, refração, exame de lâmpada de fenda, pressão intraocular, fundoscopia, topografia corneana afia, aberrometria, contagem de células endoteliais (microscopia especular), microscopia confocal da córnea, bem como exames de sangue), todos esses exames devem ser feitos por um especialista e revisados ​​por um oftalmologista. Em seguida, uma lipoaspiração do tecido adiposo subcutâneo a ser realizada por um cirurgião plástico, processamento da amostra em uma instalação cGMP para isolamento e caracterização da fração vascular estromal enriquecida com ADASCs, bem como preparo das lâminas (a avaliação do controle de qualidade será realizada antes e após todas as etapas do procedimento, desde a coleta de ADASCs até a implantação, incluindo cultura celular, quiescência celular, descelularização da lâmina corneana humana, recelularização das lâminas com ADASCs e implantação; a avaliação incluirá viabilidade celular, número de células, apoptose celular, imunofenotipagem, infecção, inflamação por análise de citocinas secretadas de ADASCs, corte de lâmina, espessura de lâmina, imunocoloração, microscopia confocal, etc.); (3) a entrega (implante) que começa por uma anestesia peribulbar ou retrobulbar onde o paciente é colocado sob microscópio cirúrgico, seguido por uma dissecção lamelar medioestromal assistida por laser de femtosegundo, então os ADASCs autólogos ou lâminas ou lâminas recelularizadas serão colocados dentro do bolso, e finalmente fechado por um fechamento de incisão superior. O paciente será colocado sob antibiótico/esteróides por um período definido e acompanhado pela equipe em 1 semana, 2 semanas, 1 mês, 3 meses, 6 meses.

Este protocolo de terapia celular será aplicado exclusivamente no VISSUM (Alicante-Espanha), Barraquer Ophthalmology Center (Barcelona-Espanha), Ramon y Cajal Hospital (Madrid-Espanha), Asturias Prince Hospital (Madrid-Espanha) e Murcia Hospital (Murcia -Espanha), em parceria com Miguel Hernandez da Universidade de Elche (Elche-Espanha).

O recrutamento do paciente será realizado: para a lipoaspiração, processamento, preparação das lâminas celularizadas e avaliações de controle de qualidade em VISSUM (Alicante-Espanha), Barraquer Ophthalmology Center (Barcelona-Espanha), Ramon y Cajal Hospital (Madrid-Espanha) e Murcia Hospital (Múrcia-Espanha). Todas essas etapas são gerenciadas pelo VISSUM (Prof. J. ALIO).