Autologní implantace dospělých kmenových buněk odvozených z tukové tkáně pro onemocnění rohovky (ADASCs-CT-CD) (ADASCs-CT-CD)

Různé typy kmenových buněk byly různými způsoby použity v několika výzkumných projektech k nalezení optimálního postupu pro regeneraci stromatu lidské rohovky. Zahrnoval několik přístupů, které lze klasifikovat jako intrastromální implantaci kmenových buněk (1) samotných, (2) společně s biodegradabilním skafoldem, (3) s nebiodegradovatelným skafoldem nebo (4) s decelularizovaným rohovkovým stromálním skafoldem. Složitá struktura stromatu rohovky dosud nebyla replikována a použití konstrukcí na bázi syntetického lešení má dobře známé nevýhody. Nedávno bylo popsáno několik technik decelularizace rohovky, které poskytují acelulární rohovkovou extracelulární matrici (ECM). Tato lešení získala pozornost v posledních několika letech. Scaffold poskytuje přirozenější prostředí pro růst a diferenciaci buněk ve srovnání se syntetickými scafoldy. Kromě toho jsou složky ECM mezi druhy obecně konzervované a jsou dobře snášeny i xenogenními příjemci. Keratocyty jsou nezbytné pro remodelaci stromatu rohovky a pro normální fyziologii epitelu. To zdůrazňuje důležitost transplantace buněčné náhrady spolu se strukturní podporou (acelulární ECM) pro provádění těchto kritických funkcí v homeostáze rohovky. Podle nejlepšího vědomí výzkumníků všechny pokusy o repopulaci decelularizovaných korneálních skeletů využívaly rohovkové buňky, ale tyto buňky mají velké nevýhody, které znemožňují jejich autologní použití v klinické praxi (poškození dárcovské tkáně, nedostatek buněk a neefektivní buněčné subkultury ), tedy snahy o nalezení extraokulárního zdroje autologních buněk. Nedávná studie výzkumníků ukázala dokonalou biointegraci lidských decelularizovaných stromálních lamin rohovky (tloušťka 100 µm) s kolonizací h-ADASCs uvnitř králičí rohovky a bez ní in vivo, aniž by byla pozorována jakákoli reakce odmítnutí navzdory tomu, že štěp je xenogenní. Výzkumníci také prokázali diferenciaci h-ADASC na funkční keratocyty uvnitř těchto implantátů in vivo, které pak dosáhly jejich správné biofunkcionalizace. Podle názoru vyšetřovatele by transplantace kmenových buněk spolu s decelularizovanou rohovkovou ECM byla nejlepší technikou, jak efektivně obnovit tloušťku nemocné lidské rohovky, jako je tomu u keratokonu. Prostřednictvím této techniky a za použití extraokulárních mezenchymálních kmenových buněk od pacientů je možné transformovat alergenní štěpy na funkční autologní štěpy, čímž se teoreticky zabrání riziku rejekce.

Průběh procesu je definován následovně: (1) spisová studie: která začíná přijetím spisu pacienta, spis bude předán určeným lékařským koordinátorům k posouzení a předložení lékařské zprávy, následně bude lékařská zpráva vyhodnocena v rámci komise pro buněčnou terapii a pacient budou požádáni o klinické vyšetření a po konzultaci bude následovat odpověď pacientovi s lékařským rozhodnutím se souhlasem nebo nezařazením, a pokud ano, bude předložena a vysvětlena stručná zpráva o postupu podrobně pacientovi, musí být podepsán formulář souhlasu, pokud pacient souhlasí se zařazením do studie, (2) přijetí pacienta: které může začít vyplněním formulářů procedury a provedením předoperačního vyhodnocení (počáteční zpracování definováno jako klinické a biologické hodnocení na C.A.S, které může zahrnovat bez pomoci a nejlépe brýlí korigovanou zrakovou ostrost, refrakci, vyšetření štěrbinovou lampou, nitrooční tlak, fundoskopii, topogr rohovky afy, aberometrie, počet endoteliálních buněk (spekulární mikroskopie), konfokální mikroskopie rohovky, stejně jako krevní testy), všechny tyto testy by měl provést odborník a zkontrolovat oftalmolog. Poté provede plastický chirurg lipoaspiraci podkožní tukové tkáně, zpracování vzorku v zařízení cGMP pro izolaci a charakterizaci stromální vaskulární frakce obohacené o ADASC a také přípravu lamin (hodnocení kontroly kvality bude provedeno před a po všech krocích postupu počínaje odběrem ADASC po implantaci včetně buněčné kultury, buněčného klidu, decelularizace laminy lidské rohovky, recelulární laminy pomocí ADASC a implantace; posouzení bude zahrnovat životaschopnost buněk, počet buněk, apoptózu buněk, imunofenotypizace, infekce, zánět pomocí analýzy secernovaných cytokinů z ADASC, řezání lamin, tloušťka lamin, imunobarvení, konfokální mikroskopie atd.); (3) porod (implantace), který začíná peribulbární nebo retrobulbární anestezií, kdy je pacient umístěn pod operační mikroskop, následuje femtosekundová laserem asistovaná střední stromální lamelární disekce, poté budou umístěny autologní ADASC nebo laminy nebo recelulární laminy v kapse a nakonec uzavřena uzávěrem s vynikající incizí. Pacient bude nasazen na antibiotika/steroidy na definovanou dobu a tým bude sledován po 1 týdnu, 2 týdnech, 1 měsíci, 3 měsících, 6 měsících.

Tento protokol buněčné terapie bude aplikován výhradně ve VISSUM (Alicante-Španělsko), Barraquer Oftalmology Center (Barcelona-Španělsko), Ramon y Cajal Hospital (Madrid-Španělsko), Asturias Prince Hospital (Madrid-Španělsko) a Murcia Hospital (Murcia -Španělsko), ve spojení s Miguelem Hernandezem z Elche University (Elche-Španělsko).

Nábor pacienta se uskuteční: pro lipoaspiraci, zpracování, přípravu celulárních lamin a hodnocení kontroly kvality ve VISSUM (Alicante-Španělsko), Barraquer Oftalmology Center (Barcelona-Španělsko), Ramon y Cajal Hospital (Madrid-Španělsko) a Murcia Nemocnice (Murcia-Španělsko). Všechny tyto kroky řídí VISSUM (Prof. J. ALIO).