Insights on Dissemination of Lung Cancer (LUCID)

Em doentes com NSCLC ressecável tratados apenas com cirurgia ou com cirurgia como parte de um tratamento multimodal, serão avaliados os níveis de CTC, ctDNA, STAS e micrometástases ganglionares para verificar se estão associados a padrões de recidiva e a resultados a longo prazo.

Para alcançar este objetivo, a presença e a contagem de CTC e ctDNA serão analisadas a partir de amostras de sangue venoso periférico recolhidas em três momentos (antes e depois da cirurgia e durante o seguimento). Além disso, os seguintes aspetos serão avaliados como objetivos secundários:

1. Avaliar a consistência da transcriptómica espacial entre células tumorais localizadas no tumor pulmonar primário e aquelas presentes em STAS e/ou metástases ganglionares, bem como diferenças no perfil molecular entre células tumorais pulmonares primárias e células tumorais circulantes.
2. Quantificar o impacto das variáveis intraoperatórias na libertação de CTCs e ctDNA para a corrente sanguínea.

As principais variáveis intraoperatórias são:

• A sequência de ressecção das estruturas hilares (por exemplo, veia primeiro vs. artéria primeiro).
• Técnicas de manipulação pulmonar (cirurgia aberta, VATS, RATS).
• A extensão da ressecção (segmentectomia, lobectomia, pneumonectomia). Os CTCs serão analisados usando a plataforma padrão-ouro atual (sistema CellSearch, Menarini Silicon Biosystems, Itália), enquanto o ctDNA será avaliado usando a tecnologia de Sequenciação de Nova Geração (NGS) (plataforma ILLUMINA).

Para a avaliação da transcriptómica espacial, lâminas coradas com eosina e hematoxilina do tumor primário e de STAS e/ou metástases ganglionares serão analisadas usando a plataforma Xenium (10x Genomics, EUA) para quantificar espacialmente espécies de mRNA com o painel de perfilamento de Imuno-Oncologia Humana Xenium.

Para os pontos finais do projeto, variáveis contínuas serão descritas como mediana (IQR) e comparadas usando testes t ou testes de Mann-Whitney; variáveis categóricas serão descritas como n (%) e comparadas usando testes χ²/Fisher. OS e DFS serão estimados usando Kaplan-Meier, comparados com testes log-rank e analisados com modelos de Cox multivariados (verificação da suposição de proporcionalidade; resultados como HR e IC 95%). Para a incidência de recidiva considerando a morte como um evento competitivo (DFI), usaremos funções de incidência cumulativa e testes de Gray; para análise multivariada, o modelo de Fine-Gray (razão de sub-risco, IC 95%). Associações entre biomarcadores (CTC/ctDNA como contínuos e/ou dicotomizados, por exemplo, CTC ≥1 célula; VAF%/ng·mL) e resultados dependentes do tempo serão avaliadas com Cox/Fine-Gray; a probabilidade de STAS e micrometástases ganglionares com regressão logística. A dinâmica de CTC/ctDNA pré-/pós-cirurgia/seguimento será analisada usando testes emparelhados (Wilcoxon) e modelos lineares/mistos com medidas repetidas ou ANCOVA ajustando para valores basais. O efeito das variáveis intraoperatórias em ΔCTC/ΔctDNA será estimado usando modelos lineares/mistos; no risco de recidiva/morte com Cox/Fine-Gray, ajustando para idade, sexo, estadio, histótipo, grau (G3), invasão pleural visceral, PD-L1, abordagem (Aberta/VATS/RATS), extensão da ressecção e terapias adjuvantes (com possível estratificação por estadio). Dados em falta serão tratados com imputação múltipla (suposição MAR) e serão realizadas análises de sensibilidade (por exemplo, limiares alternativos de biomarcadores). Limiar de significância α = 0,05 bicaudal; valores p e IC 95% serão reportados; quando apropriado, correção para comparações múltiplas (Benjamini-Hochberg). Análise com R/Stata/SPSS.