Abordagem ômica integrativa para rinite alérgica (IntegOmics)

O muco nasal e o epitélio nasal são as primeiras barreiras de defesa contra alérgenos. Várias proteínas são encontradas no muco nasal que desempenham um papel na rinite alérgica e refletem a resposta imune à exposição ao alérgeno. A diferença no perfil proteômico de pacientes com rinite alérgica e controles saudáveis ​​pode fornecer informações sobre como a resposta funciona e quais proteínas podem levar a uma reação imunológica aprimorada ou a uma resposta de defesa, como aumento da integridade epitelial. Sabe-se também que o epitélio das vias aéreas desempenha um papel crucial na regulação das respostas imunes das vias aéreas e da inflamação. O perfil de expressão gênica é amplamente utilizado para analisar doenças complexas. Para o perfil de expressão gênica do epitélio das vias aéreas no estado doente e saudável, bem como no estado basal e provocado, pode esclarecer o mecanismo das reações de defesa e o curso dos processos inflamatórios. As proteínas do muco nasal como consequência de diferentes expressões gênicas podem ser vistas como parte dos produtos finais desse complexo mecanismo e interação entre alérgenos e o epitélio.

As proteínas do muco nasal têm diferentes origens e locais de produção e a expressão gênica não necessariamente resulta em metabólitos funcionais. O objetivo deste projeto proposto é tentar analisar em uma abordagem proteômica holística a resposta ao alérgeno em um nível genético/genômico desde o epitélio nasal até o nível proteômico/proteômico no muco nasal. Esta análise nos dá uma visão de como os diferentes perfis de expressão gênica resultam em uma expressão de proteína e esclarece quais proteínas são originadas diretamente do epitélio e quais são resultado da exsudação plasmática ou estão subjacentes a diferentes processos regulatórios.

De pacientes com rinite alérgica e controles saudáveis ​​serão obtidos muco nasal, mucosa nasal e soro. O muco nasal será coletado com um dispositivo de sucção especial equipado com uma armadilha de muco do meato médio sob controle endoscópico sem tocar na mucosa. A mucosa nasal será obtida através de escovas nasais sob anestesia local e colocada em cultura primária. Soro preparado a partir de amostras de sangue. Pacientes com alergia a grama ou pólen de árvores serão incluídos e o estado alérgico será determinado por testes cutâneos e RAST (Radio-Allergo-Sorbent-test). O tamanho amostral almejado será de 15 pacientes por grupo. As amostras serão obtidas dentro e fora da estação polínica. Os pacientes alérgicos preencherão uma pontuação de sintomas e as amostras serão coletadas quando os sintomas forem fortes (na estação do pólen) e desaparecerem (fora da estação do pólen). Para controles saudáveis, o ponto no tempo de coleta da amostra será correlacionado com os pacientes com rinite alérgica para terem uma exposição semelhante ao pólen. O muco nasal será enviado para Cromatografia Líquida Tandem espectrometria de massa para análise proteômica e das células epiteliais nasais o RNA será isolado e enviado para análise por Microarray. Por meio de uma abordagem ômica integrativa, a expressão de genes e proteínas será correlacionada e o cross talk entre o muco nasal e o epitélio será analisado. A identificação de genes-chave ou grupos de genes leva à identificação adicional de proteínas-chave ou grupos de proteínas como biomarcadores que podem servir para novas estratégias terapêuticas ou diagnósticas na rinite alérgica. A abordagem integrativa ômica reduz os potenciais candidatos, uma vez que o foco está na expressão de genes epiteliais e seus produtos proteicos e exclui proteínas que são altamente abundantes sem correlação direta com a exposição a alérgenos, por exemplo. através da exsudação plasmática. Além disso, a análise genômica e proteômica poderia explicar com mais detalhes como a barreira do muco e o epitélio são afetados pela exposição ao alérgeno. A comparação com controles saudáveis ​​e as mudanças longitudinais ao longo da temporada lançam luz sobre como esses indivíduos reagem à exposição ao alérgeno e como isso pode levar à prevenção da sensibilização.