Elucidando a base molecular e bioquímica da doença da mutação AhR humana

Em um estudo anterior, identificamos uma família consanguínea do norte de Israel com três filhos afetados por nistagmo infantil idiopático (NII) e hipoplasia foveal, que seguem um modo de herança autossômica recessiva do gene AhR. neste estudo iremos:

1. Determinar se o fenótipo da doença é consequência de uma diminuição ou ausência da atividade de AHH induzida por AHR. Para tanto, a atividade da enzima AHH basal e mediada por ligantes será comparada em familiares heterozigóticos e homozigóticos versus voluntários saudáveis.
2. Examinar os níveis de proteína em estado estacionário da proteína AHR em células de pacientes homo e heterozigóticos versus os de voluntários saudáveis. Se nenhuma proteína mutante for detectada, determinaremos o efeito da mutação na estabilidade do mRNA.
3. Analisar os níveis de estado estacionário de proteínas parceiras relacionadas (como ANRT) e níveis de proteínas de alvos transcricionais (AHH) em membros da família heterozigóticos e homozigóticos versus voluntários saudáveis.
4. Investigar a capacidade do alelo mutante de induzir ativação transcricional em um sistema de teste de levedura manipulado. Usaremos uma linhagem de levedura engenheirada para conter AHR humano e translocador nuclear de AHR juntamente com um gene repórter para investigar se a mutação interfere na ativação da transcrição.