Investigue o eNAMPT na biologia do mieloma múltiplo e estabeleça seu papel na progressão da doença

Antecedentes e dados preliminares:

O mieloma múltiplo (MM) é caracterizado por uma expansão clonal de células plasmáticas malignas na medula óssea (MO) com uma disseminação contínua de células tumorais para dentro e para fora da MO. Uma interação contínua entre células estromais BM (BMSCs) e células MM suporta a proliferação, sobrevivência, migração e resistência a drogas de células tumorais. De fato, as BMSCs, tanto pela produção de citocinas quanto pelas interações célula-célula, controlam a capacidade das células MM de entrar na corrente sanguínea, levando ao homing ou extravasamento de células clonais para tecidos distantes, o que, por sua vez, resulta na formação de novos nichos de BM.

A transição epitelial para mesenquimal (EMT) é um fenômeno biológico pelo qual as células epiteliais podem mudar para um fenótipo mesenquimal através da ruptura da adesão célula-célula e da polaridade celular, remodelação do citoesqueleto e alteração da adesão célula-matriz. No geral, esses eventos levam a propriedades migratórias e invasivas aprimoradas das células afetadas. Notavelmente, a EMT ocorre fisiologicamente durante o desenvolvimento embrionário normal e a regeneração tecidual, mas, em células cancerígenas, tem sido associada a características de agressividade do tumor, incluindo invasão, metástase, estame e resistência a drogas. A EMT é comumente observada em tumores sólidos, mas foi recentemente descrita também em MM. Nesse contexto, estudos têm mostrado que a hipóxia associada aos nichos da BM produz egresso e disseminação de células MM por meio da aquisição de características semelhantes a EMT que, por sua vez, ao aumentar a expressão de CXCR4, produz o desenvolvimento de doença extramedular (EMD).

Alterações no metabolismo celular emergiram como uma das características do câncer que poderiam ser alvo de novas abordagens terapêuticas. Entre essas alterações, a biossíntese de nicotinamida adenina dinucleotídeo (NAD+) está emergindo como um novo alvo terapêutico em tumores. A nicotinamida fosforibosiltransferase (NAMPT), a enzima limitante da produção de NAD+ a partir da nicotinamida (NAM) em células de mamíferos, é frequentemente regulada positivamente em cânceres, incluindo MM, e sua relevância como potencial alvo terapêutico tem sido amplamente explorada por nosso grupo. No entanto, além de sua atividade intracelular como enzima metabólica chave, a NAMPT também está presente no meio extracelular, onde exerce ações semelhantes a citocinas/adipocinas como eNAMPT. Embora os mecanismos subjacentes à secreção de eNAMPT ainda não tenham sido elucidados, é comumente aceito que existe uma correlação positiva entre a secreção de eNAMPT e os níveis intracelulares de NAMPT. Evidências recentes mostram que os níveis plasmáticos de eNAMPT são significativamente maiores em pacientes com câncer em comparação com doadores saudáveis ​​em várias neoplasias hematológicas e sólidas. Nesse contexto, eNAMPT demonstrou exercer efeitos pró-tumorigênicos, como promover a proliferação de células cancerígenas e a formação de colônias, conferindo resistência à apoptose e moldando o microambiente tumoral, promovendo a neoangiogênese e afetando a resposta imune.

Os investigadores demonstraram recentemente o papel fundamental desempenhado pelo eNAMPT na aquisição de EMT em células de câncer de mama humano. Em detalhes, a superexpressão de NAMPT promove a aquisição de morfologia semelhante a fibroblastos de células cancerígenas, reduzindo a expressão de E-caderina em associação com a regulação positiva de N-caderina, Vimentina e ZEB1. É importante ressaltar que a EMT induzida por NAMPT não está associada à atividade enzimática de NAMPT e nem aos seus níveis de produto mononucleotídeo de nicotinamida (NMN). Pelo contrário, EMT parece ser mediado por eNAMPT através da sua capacidade de ativar a via de sinalização TGFβ via aumento da produção de TGFβ1.

Com base em nossas observações anteriores, aqui os investigadores planejam investigar ainda mais o eNAMPT na biologia do MM e estabelecer seu papel na progressão da doença, onde a aquisição de EMT representa uma marca registrada dos cânceres. Espera-se que os resultados derivados da proposta identifiquem novas vulnerabilidades biológicas de tal malignidade e também um biomarcador inovador para o monitoramento da progressão da doença.

Os investigadores mediram preliminarmente os níveis séricos de eNAMPT em amostras PB de pacientes recém-diagnosticados com mieloma múltiplo (NDMM) (n= 20) e doadores saudáveis ​​(HDs; n=6). Curiosamente, os níveis de eNAPMT foram significativamente maiores nos tumores do que nos controles, apontando para um papel relevante dessa citocina na biologia do MM. Esses dados fornecem a justificativa para futuras investigações do papel do eNAMPT no MM.

Coleta de amostras:

Amostras retrospectivas de pacientes com MM serão derivadas de dois bancos de dados diferentes (UNITO e UNIGE) e combinadas em um novo banco de dados específico dedicado a este projeto para cobrir os diferentes estágios da doença que serão analisados.

A UNITO coordenará e fará a seleção das amostras que serão incluídas. A UNITO poderá fornecer o número necessário de amostras para este estudo. Por fim, um conjunto independente e representativo de 100 amostras de pacientes MM será selecionado a partir de ensaios clínicos anteriores conduzidos nos últimos 5 anos.

Em geral, as amostras atenderão aos seguintes parâmetros:

• Pacientes masculinos e femininos maiores de 18 anos;
• Amostras de soro derivadas de PB coletadas em diferentes fases da doença (pacientes MGUS, SMM, NDMM e RRMM MM)
• Células CD138+ suficientes ou RNA de células CD138+ estão disponíveis;
• Dados de sobrevida mediana de ≥ 2 anos e dados de tratamento estão disponíveis (livre de progressão e sobrevida global);
• Amostra de medula óssea adquirida antes do início da terapia de interesse;
• Os pacientes consentiram no uso de sua amostra para fins de pesquisa.

Uma avaliação de viabilidade e análise de poder das amostras disponíveis e dados clínicos serão realizadas para cada um dos respectivos ensaios clínicos disponíveis dos quais as amostras serão originárias. Essa avaliação é realizada para decidir, selecionar e construir um conjunto de dados que forneça evidências científica e estatisticamente sólidas para a previsão da eficácia do tratamento. Os regimes de tratamento selecionados (combinações de medicamentos) que serão analisados ​​abrangem todo o espectro de classes de tratamento para MM, incluindo inibidores de proteassoma, drogas imunomoduladoras (IMiDs), agentes alquilantes, inibidores de HDAC e anticorpos monoclonais. As amostras de pacientes serão provenientes de ensaios clínicos controlados e serão selecionadas de diferentes grupos de tratamento, contendo pacientes que receberam os mesmos esquemas de tratamento, com base em um dos seguintes medicamentos ou combinações: Bortezomib (inibidor de proteassoma), Carfilzomib (inibidor de proteassoma), Talidomida (IMiD), Lenalidomida (IMiD), Pomalidomida (IMiD), Melfalano (agente alquilante), Panabinostat (inibidor de HDAC) e Daratumumab (anticorpo monoclonal).

As estimativas do tamanho da amostra são baseadas em experiências anteriores de poder determinar significativamente as diferenças de sobrevivência entre casos positivos e negativos para um determinado tratamento para um grupo suficientemente grande. Dado um tamanho de efeito de pelo menos 3 e uma incidência do subtipo de 20%, um tamanho de grupo de 100 casos será suficiente para determinar significativamente o valor preditivo do subtipo. (um tamanho de efeito menor e uma incidência menor provavelmente não seriam clinicamente relevantes).