Prozkoumejte eNAMPT v biologii mnohočetného myelomu a zjistěte jeho roli v progresi onemocnění

Pozadí a předběžné údaje:

Mnohočetný myelom (MM) je charakterizován klonální expanzí maligních plazmatických buněk v kostní dřeni (BM) s kontinuálním šířením nádorových buněk dovnitř a ven z BM. Kontinuální interakce mezi BM stromálními buňkami (BMSC) a MM buňkami podporuje proliferaci, přežití, migraci a lékovou rezistenci nádorových buněk. BMSC jak produkcí cytokinů, tak interakcí buňka-buňka, skutečně řídí schopnost MM buněk vstoupit do krevního řečiště, což vede k navádění nebo extravazaci klonálních buněk do vzdálených tkání, což zase vede k tvorbě nových BM výklenků.

Přechod z epitelu na mezenchym (EMT) je biologický jev, při kterém se epiteliální buňky mohou přepnout na mezenchymální fenotyp prostřednictvím narušení adheze buňka-buňka a buněčné polarity, remodelace cytoskeletu a změny adheze buňka-matrix. Celkově tyto události vedou ke zlepšení migračních a invazivních vlastností postižených buněk. Je pozoruhodné, že EMT nastává fyziologicky během normálního embryonálního vývoje a regenerace tkáně, ale v rakovinných buňkách je spojena s rysy agresivity nádoru, včetně invaze, metastáz, stopkovitosti a rezistence vůči lékům. EMT je běžně pozorována u solidních nádorů, ale nedávno byla popsána také u MM. V takovém kontextu studie ukázaly, že hypoxie spojená s BM výklenky produkuje výstup a šíření MM buněk prostřednictvím získání rysů podobných EMT, což zase zvýšením exprese CXCR4 vede k rozvoji extramedulárního onemocnění (EMD).

Změny v buněčném metabolismu se ukázaly jako jeden z charakteristických znaků rakoviny, na který by se mohly případně zaměřit nové terapeutické přístupy. Mezi těmito změnami se objevuje biosyntéza nikotinamidadenindinukleotidu (NAD+) jako nový terapeutický cíl u nádorů. Nikotinamid fosforybosyltransferáza (NAMPT), enzym omezující rychlost produkce NAD+ z nikotinamidu (NAM) v savčích buňkách, je často up-regulován u rakoviny, včetně MM, a její význam jako potenciálního terapeutického cíle naše skupina široce prozkoumala. Avšak kromě své intracelulární aktivity jako klíčového metabolického enzymu je NAMPT také přítomen v extracelulárním prostředí, kde působí jako eNAMPT jako cytokin/adipokin. Ačkoli mechanismy, které jsou základem sekrece eNAMPT, stále zůstávají objasněny, obecně se uznává, že existuje pozitivní korelace mezi sekrecí eNAMPT a intracelulárními hladinami NAMPT. Nedávné důkazy ukazují, že plazmatické hladiny eNAMPT jsou významně vyšší u pacientů s rakovinou ve srovnání se zdravými dárci u několika hematologických a solidních novotvarů. V této souvislosti bylo zjištěno, že eNAMPT má protumorogenní účinky, jako je podpora proliferace rakovinných buněk a tvorba kolonií, udělování odolnosti vůči apoptóze a utváření mikroprostředí nádoru podporou neoangiogeneze a ovlivněním imunitní odpovědi.

Výzkumníci nedávno prokázali klíčovou roli, kterou hraje eNAMPT při získávání EMT v lidských buňkách rakoviny prsu. Nadměrná exprese NAMPT podporuje získání morfologie rakovinných buněk podobné fibroblastům snížením exprese E-cadherinu ve spojení s upregulací N-cadherinu, vimentinu a ZEB1. Důležité je, že NAMPT-indukovaná EMT není spojena s enzymatickou aktivitou NAMPT a ani s hladinami jeho produktu nikotinamid mononukleotid (NMN). Naopak se zdá, že EMT je zprostředkována eNAMPT prostřednictvím jeho schopnosti aktivovat signální dráhu TGFβ prostřednictvím zvýšené produkce TGFβ1.

Na základě našich předchozích pozorování zde výzkumníci plánují dále zkoumat eNAMPT v biologii MM a stanovit jeho roli v progresi onemocnění, kde akvizice EMT představuje charakteristický znak rakoviny. Výsledky odvozené z návrhu by snad mohly identifikovat nové biologické zranitelnosti takové malignity a také inovativní biomarker pro sledování progrese onemocnění.

Vyšetřovatelé předběžně změřili sérové ​​hladiny eNAMPT ve vzorcích PB pacientů s nově diagnostikovaným mnohočetným myelomem (NDMM) (n=20) a zdravých dárců (HD; n=6). Je zajímavé, že bylo zjištěno, že hladiny eNAPMT jsou významně vyšší u nádorů než u kontrol, což ukazuje na relevantní roli tohoto cytokinu v biologii MM. Tato data poskytují zdůvodnění pro další zkoumání role eNAMPT v MM.

Kolekce vzorků:

Retrospektivní vzorky pacientů s MM budou odvozeny ze dvou různých databází (UNITO a UNIGE) a sloučeny do nové specifické databáze věnované tomuto projektu, aby pokryla různá stádia onemocnění, která budou analyzována.

UNITO bude koordinovat a provádět výběr vzorků, které budou zahrnuty. UNITO bude schopno poskytnout požadovaný počet vzorků pro tuto studii. Nakonec bude z předchozích klinických studií, které byly provedeny během posledních 5 let, vybrán nezávislý reprezentativní soubor 100 MM vzorků pacientů.

Obecně budou vzorky splňovat následující parametry:

• Pacienti muži a ženy starší 18 let;
• Vzorky séra odvozené od PB odebrané v různých fázích onemocnění (pacienti s MGUS, SMM, NDMM a RRMM s MM)
• K dispozici je dostatek CD138+ buněk nebo RNA z CD138+ buněk;
• K dispozici jsou údaje o mediánu přežití ≥ 2 roky a údaje o léčbě (přežití bez progrese a celkové přežití);
• Vzorek kostní dřeně získaný před zahájením sledované terapie;
• Pacienti souhlasili s použitím jejich vzorku pro výzkumné účely.

Pro každou z příslušných dostupných klinických studií, ze kterých budou vzorky pocházet, bude provedeno posouzení proveditelnosti a analýza síly dostupných vzorků a klinických dat. Toto hodnocení se provádí s cílem rozhodnout, vybrat a vytvořit soubor dat, který poskytuje vědecky a statisticky spolehlivé důkazy pro predikci účinnosti léčby. Vybrané léčebné režimy (kombinace léků), které budou analyzovány, pokrývají kompletní spektrum tříd léčby MM, včetně inhibitorů proteazomu, imunomodulačních léků (IMiD), alkylačních látek, inhibitorů HDAC a monoklonálních protilátek. Vzorky pacientů budou odvozeny z kontrolovaných klinických studií a budou vybrány z různých léčebných skupin obsahujících pacienty, kteří dostávali stejné léčebné režimy na základě jednoho z následujících léků nebo kombinací: Bortezomib (inhibitor proteazomu), Carfilzomib (inhibitor proteazomu), Thalidomid (IMiD), Lenalidomid (IMiD), Pomalidomid (IMiD), Melfalan (alkylační činidlo), Panabinostat (inhibitor HDAC) a Daratumumab (monoklonální protilátka).

Odhady velikosti vzorku jsou založeny na předchozích zkušenostech se schopností významně určit rozdíly v přežití mezi pozitivními a negativními případy pro určitou léčbu pro dostatečně velkou skupinu. Vzhledem k velikosti účinku alespoň 3 a incidenci podtypu 20 % bude velikost skupiny 100 případů dostatečná k významnému stanovení prediktivní hodnoty podtypu. (menší velikost účinku a menší výskyt by pravděpodobně nebyly klinicky relevantní).