Terapias Avançadas para Metástases Hepáticas (LiMeT)

Antecedentes e justificativa - CRC e PDAC são a segunda e quarta causa mais comum de morte por câncer, respectivamente. Os pacientes afetados por esses cânceres morrem de MTS no fígado. As terapias convencionais são ativas em ambos os tumores primários, mas falham na doença metastática. A eficácia da imunoterapia por bloqueio do ponto de checagem imunológico e terapia celular adotiva com células T tumor-específicas é apenas parcial ou temporária em MTS de tumores sólidos, por causa de mecanismos imunossupressores locais. Isso é particularmente relevante para o MTS hepático, no qual um meio tolerogênico natural pode sustentar ainda mais a imunossupressão induzida por células cancerígenas e infiltrar células imunes, como macrófagos associados a tumores (TAMs), células supressoras derivadas de mieloides (MDSCs), neutrófilos e reguladores T ou células B.

A este respeito, as evidências sugerem que a progressão do CCR primário ou metastático está correlacionada com a infiltração imune deficiente e inflamação. Além disso, nossos resultados publicados em PDAC primário suportam uma correlação entre a progressão do tumor e uma forte assinatura anti-inflamatória/imunossupressora tipo 2. Sabe-se que a eficácia da quimioterapia depende também da reativação e/ou repolarização das respostas imunes direcionadas ao tumor. A quimioterapia pré-cirúrgica pode induzir efeitos benéficos e alterações potencialmente direcionáveis ​​no perfil imunológico de CRC ou PDAC MTS.

Os investigadores levantam a hipótese de que uma combinação de: i) morte direta de células cancerígenas por células T específicas do tumor transferidas adotivamente e ii) controle indireto da progressão do tumor por meio da reprogramação do microambiente do tumor controlaria o MTS hepático de CRC e PDAC.

Assim, os pesquisadores propõem uma caracterização completa do meio metastático nesses dois tipos de câncer para moldar racionalmente, com base em semelhanças e diferenças, ATMPs inovadores.

Os resultados experimentais obtidos das amostras biológicas serão correlacionados: i) com os dados clínicos dos pacientes no momento da inclusão e ao longo de seu acompanhamento; e ii) para um subgrupo de pacientes, com dados bioquímicos e imunológicos de amostras de sangue periférico coletadas rotineiramente como parte de seu acompanhamento clínico, com o objetivo adicional de identificar novos parâmetros biológicos e/ou assinaturas para ajudar na estratificação de pacientes e a adequação dos tratamentos.

Objetivos - Os investigadores querem estudar:

1. a carga mutacional do tumor e a composição do microambiente do tumor metastático no fígado;
2. as vias inibitórias que restringem a imunidade no fígado MTS;
3. a amplitude antigênica e clonal das respostas das células T antitumorais;
4. as variações espaço-temporais das células imunes efetoras e reguladoras após a terapia;
5. as características das células tumorais e seu microambiente no fígado MTS versus (vs) tumor primário;
6. as variações longitudinais de parâmetros clínicos, bem como marcadores biológicos e imunológicos derivados do sangue durante o acompanhamento médico de pacientes.
7. Além disso, querem coletar e biobancar amostras de pacientes para apoiar a validação e seleção dos novos ATMPs desenvolvidos pelos outros parceiros do programa translacional.

Os objetivos primordiais serão:

1. para identificar vias imunossupressoras/exaustão
2. desenvolver uma biblioteca de TCR específico de tumor (N≥5/tipo de tumor) e identificar novos alvos de CAR (N≥1/tipo de tumor) em CRC e PDAC MTS

Desenho do estudo - Este protocolo clínico visa caracterizar profundamente as células tumorais MTS e seu microambiente, incluindo modificações dinâmicas possivelmente informativas de perfis pró-tumorais a antitumorais que podem seguir a quimioterapia, que é administrada pré-cirurgia (neo-adjuvante) a um número substancial fração de pacientes. Os pacientes com PDAC e CRC MTS serão, portanto, caracterizados por investigações transversais ou longitudinais em pacientes virgens de quimioterapia versus pacientes tratados.

Além disso, os pesquisadores pretendem comparar o MTS hepático com o tumor primário, a fim de destacar modificações qualitativas dinâmicas nas células cancerígenas, infiltrados imunes e microambiente não imune que possam facilitar a progressão da doença para a disseminação metastática. Essas modificações podem oferecer uma janela de oportunidade para a aplicação ideal de nossos ATMPs. Para tanto, pacientes com PDAC não metastáticos primários submetidos à ressecção cirúrgica serão incluídos neste estudo e acompanhados para monitoramento do desenvolvimento de MTS metacrônico no fígado, que, sempre que possível, serão caracterizados e comparados com seus pareados/não pareados, previamente coletadas, amostras de tumores primários. Amostras de sangue periférico no momento do diagnóstico de MTS hepático também serão coletadas e analisadas. Além disso, naqueles pacientes com CRC MTS submetidos à ressecção síncrona de CRC primário e MTS hepático, análises comparativas serão realizadas no tumor de ambos os locais, permitindo o perfil intra e interpaciente de ambos os nichos tumorais.

Além disso, os resultados das análises de pesquisas em vários níveis serão correlacionados com os dados clínicos coletados de todos os pacientes no momento da inclusão no estudo e durante seu acompanhamento clínico, sempre que possível por até 2 anos, considerando pacientes PDAC, e 3 anos , considerando CRC.

Em particular, para pacientes com CCR metastático, o acompanhamento clínico será associado à coleta concomitante de amostras de sangue em pontos temporais seriados, que serão prospectivamente biobancados para análises posteriores destinadas a: i) estudar correlatos biológicos e imunológicos do estado clínico do paciente; ii) avaliar os principais discriminantes previamente identificados em amostras de sangue analisadas no momento da cirurgia hepática MTS, para servir como preditores precoces de progressão ou recorrência hepática e possivelmente como indicadores para estratificação terapêutica.

Os investigadores esperam coletar amostras de tecido/sangue e dados clínicos de pelo menos:

• 200 pacientes com CCR metastático (sincrônico ou metacrônico);
• 150 pacientes PDAC não metastáticos;
• 75 pacientes PDAC MTS síncronos e cerca de 20 pacientes metacrônicos PDAC MTS, os últimos originalmente inscritos como pacientes primários não metastáticos para o estudo longitudinal, para um total de 95 pacientes metastáticos PDAC;
• 30 voluntários saudáveis, como controles negativos.

Diferentes amostras biológicas (sangue periférico, tecido tumoral primário e/ou metastático, sangue portal) serão coletadas, no decorrer do atendimento diagnóstico e terapêutico padrão desses pacientes, e serão em parte analisadas diretamente e em parte biobancadas para estudos posteriores . Paralelamente, serão coletados dados clínicos dos pacientes no momento da inclusão no estudo e, sempre que possível, por um período de acompanhamento de até 2 anos, para pacientes com PDAC, e 3 anos, para pacientes com CCR.

A análise estatística dos dados coletados será realizada ao longo do estudo clínico, iniciando-se 6 meses após a inclusão do primeiro paciente até 6 meses após o término do acompanhamento dos pacientes, totalizando 7 anos. O estudo terá duração de 7 anos.

Diferentes amostras biológicas (sangue periférico, tecido tumoral primário e/ou metastático, sangue portal) serão coletadas, no decorrer do atendimento diagnóstico e terapêutico padrão desses pacientes, e serão em parte analisadas diretamente e em parte biobancadas para estudos posteriores . Paralelamente, serão coletados dados clínicos dos pacientes desde o momento da inclusão no estudo por um período de acompanhamento de 2 anos, para pacientes com PDAC, e de 3 anos, para pacientes com CRC.

A análise estatística dos dados clínicos e experimentais coletados será realizada durante todo o estudo clínico, iniciando-se 6 meses após a inclusão do primeiro paciente até o final do acompanhamento dos pacientes, totalizando 7 anos. O estudo terá duração de 7 anos.

As atividades de pesquisa serão organizadas e integradas em 6 pacotes de trabalho (WPs):

1. Coleta e biobanco do material de pacientes com CRC e PDAC MTS para o fígado e com PDAC primário não metastático ressecável.
2. Definição da carga mutacional do tumor, perfil epigenético e de expressão gênica do fígado metastático CRC e PDAC em massa e em nível de célula única.
3. Avaliação da composição molecular e celular do CRC e, se possível, do fígado PDAC MTS por tecnologias de transcriptômica espacial (NICHE-seq e Visium).
4. Caracterização das paisagens imunes do CRC e, se possível, do fígado PDAC MTS por citometria de fluxo de alta dimensão.
5. Validação dos resultados moleculares obtidos em 2) e 4).
6. Definição da paisagem antigênica e repertório TCR de CRC e PDAC fígado MTS.

Os resultados obtidos pelos WPs acima mencionados serão cruzados com dados de acompanhamento clínico e servirão para calibrar as atividades do programa voltadas para o desenvolvimento de novos MTAs.