Загрязнение ткани яичка с помощью ОТ-ПЦР у участников с солидными опухолями (TESTIMAR)

Некоторые солидные опухоли имеют высокий риск метастатической локализации, в том числе и в яичках. Есть опасения по поводу возможного присутствия злокачественных клеток в ткани яичка, которые могут вызвать рецидив основного заболевания после реимплантации. Таким образом, возможность поражения ткани яичка необходимо оценивать с помощью чувствительных молекулярных методов.

Основываясь на нашем опыте выявления методом ОТ-ПЦР минимальной остаточной болезни (МОБ) при нейробластоме с 1994 г. [Tchirkov et al. 2003] и в области криоконсервации ткани яичка с 2012 года, мы хотим разработать специфический и чувствительный метод обнаружения остаточных заболеваний с помощью ОТ-ПЦР, чтобы оценить загрязнение опухолью собранной ткани яичка.

Популяция исследования: мы выбрали 3 модели солидных опухолей у детей с высоким риском метастазирования и которые часто требуют стерилизующего лечения (химио- и/или лучевая терапия): нейробластома, опухоль Юинга и альвеолярная рабдосаркома. Мы будем использовать четыре линии опухолевых клеток: IMR32 и SK-NSH для нейробластомы; РД-ЭС для опухоли Юинга; RH-30 для рабдосаркомы. Мы планируем использовать 20 фрагментов на строку.

Продолжительность исследования: 12 месяцев. Дизайн исследования. Будет собрана ткань яичка без известных злокачественных новообразований, но с состоянием, требующим биопсии (оценка фертильности).

Собранная кора яичка будет обработана для восстановления всех жизнеспособных сперматозоидов, а затем мы используем оставшуюся ткань для заражения линиями опухолевых клеток. Затем определение специфического транскрипта будет проведено с помощью ОТ-ПЦР в свежей ткани и после замораживания/оттаивания. Суммарная РНК будет извлечена с помощью TRI-реагента, а qRT-PCR будет проведена с использованием технологии «TaqMan».

Первичная конечная точка: достижение чувствительности около 1/106 клеток.