Mastcellsaktiveringstest vid allergisk sjukdom

Syftet med denna studie är att bedöma om patienter med allvarliga allergiska sjukdomar uppvisar höga nivåer av mastcellsaktivering enligt det diagnostiska testet för mastcellaktivering som utredarna har utvecklat. De förväntar sig att patienter med anamnes på svåra allergiska reaktioner kommer att visa sig som högresponderare i det blodbaserade diagnostiska testet för mastcellaktivering. Dessutom, med hjälp av mikroarrayanalys som tillvägagångssätt för studier av genuttryck, förutser de vidare att genomiska biomarkörer som är korrelerade med den höga funktionella aktiveringen av in vitro-mastceller som härrör från dessa patienter lätt kan identifieras.

Cirka 100 ml perifert venöst blod från enskilda patienter kommer att sugas upp i hepariniserade sprutor och samlas upp i en bloduppsamlingspåse/-rör som innehåller kiseldioxid. Påsen/röret kommer omedelbart att bearbetas för generering av primära humana mastcellkulturer med det protokoll som tidigare har utvecklats [Inflammation Research 66: 25 (2017). Efter odling i 9 veckor kommer de resulterande mänskliga mastcellerna att analyseras med avseende på både deras funktionella aktivitet i termer av histaminfrisättning som svar på aktiveringen av immunglobulin E (IgE)-receptorer med hög affinitet i dessa celler och deras genuttrycksprofiler med hjälp av mikroarrayanalys . In vitro-funktionella och genomiska data kommer att korreleras med specifika diagnoser och mätningar av blodprostaglandin D2 (PGD2), PGD2-metaboliter, tryptas och histaminnivåer i blodet. För mediatoranalyser kommer plasma från varje försöksperson att samlas in efter klustret av differentieringspositiv 34 (CD34+) isoleringssteget och proverna kommer att alikvoteras och frysas vid -80 grader Celsius för efterföljande analys.