Test aktywacji komórek tucznych w chorobie alergicznej

Celem tego badania jest ocena, czy pacjenci z ciężkimi chorobami alergicznymi wykazują wysoki poziom aktywacji komórek tucznych, co określono za pomocą diagnostycznego testu aktywacji komórek tucznych opracowanego przez badaczy. Przewidują, że pacjenci z ciężkimi reakcjami alergicznymi w wywiadzie wykażą się wysoką odpowiedzią w teście diagnostycznym aktywacji komórek tucznych na podstawie krwi. Co więcej, stosując analizę mikromacierzy jako podejście do badań ekspresji genów, przewidują ponadto, że biomarkery genomiczne, które są skorelowane z aktywacją wysoce funkcjonalną komórek tucznych in vitro pochodzących od tych pacjentów, można łatwo zidentyfikować.

Około 100 ml krwi żylnej obwodowej od poszczególnych pacjentów zostanie pobrane do heparynizowanych strzykawek i zebrane do worka/probówki do pobierania krwi zawierającej krzemionkę. Worek/probówka zostanie niezwłocznie przetworzony w celu wytworzenia pierwotnych hodowli ludzkich komórek tucznych przy użyciu wcześniej opracowanego protokołu [Inflammation Research 66: 25 (2017). Po hodowli przez 9 tygodni uzyskane ludzkie komórki tuczne będą analizowane zarówno pod kątem ich aktywności funkcjonalnej pod względem uwalniania histaminy w odpowiedzi na aktywację receptorów immunoglobuliny E (IgE) o wysokim powinowactwie w tych komórkach, jak i ich profili ekspresji genów za pomocą analizy mikromacierzy . Dane funkcjonalne i genomiczne in vitro zostaną skorelowane z konkretnymi diagnozami i pomiarami poziomu prostaglandyny D2 (PGD2), metabolitów PGD2, tryptazy i histaminy we krwi. W przypadku testów mediatorów, osocze od każdego osobnika zostanie pobrane po etapie izolacji klastra różnicowania 34 dodatniego (CD34+), a próbki zostaną podzielone na porcje i zamrożone w temperaturze -80 stopni Celsjusza do późniejszej analizy.