Prueba de activación de mastocitos en enfermedades alérgicas

El objetivo de este estudio es evaluar si los pacientes con enfermedades alérgicas graves muestran altos niveles de activación de mastocitos según lo determinado por la prueba de diagnóstico de activación de mastocitos que han desarrollado los investigadores. Anticipan que los pacientes con antecedentes de reacciones alérgicas graves mostrarán una alta respuesta en la prueba diagnóstica de activación de mastocitos en sangre. Además, utilizando el análisis de micromatrices como enfoque para los estudios de expresión génica, anticipan que los biomarcadores genómicos que se correlacionan con la alta activación funcional de los mastocitos in vitro derivados de estos pacientes pueden identificarse fácilmente.

Aproximadamente 100 ml de sangre venosa periférica de pacientes individuales se extraerán en jeringas heparinizadas y se recolectarán en una bolsa/tubo de recolección de sangre que contiene sílice. La bolsa/tubo se procesará rápidamente para la generación de cultivos primarios de mastocitos humanos mediante el protocolo que se ha desarrollado previamente [Inflammation Research 66: 25 (2017). Después de cultivar durante 9 semanas, los mastocitos humanos resultantes se analizarán tanto por su actividad funcional en términos de liberación de histamina en respuesta a la activación de los receptores de inmunoglobulina E (IgE) de alta afinidad en estas células como por sus perfiles de expresión génica mediante análisis de micromatrices. . Los datos funcionales y genómicos in vitro se correlacionarán con diagnósticos específicos y mediciones de prostaglandina D2 en sangre (PGD2), metabolitos de PGD2, triptasa y niveles de histamina en sangre. Para los ensayos de mediadores, el plasma de cada sujeto se recolectará después del paso de aislamiento del grupo de diferenciación 34 positivo (CD34+) y las muestras se dividirán en alícuotas y se congelarán a -80 grados centígrados para su posterior análisis.