Aerosolkombinationsterapi av all-trans retinoinsyra och isotretinoin som en ny behandling för att inducera neutraliserande antikroppar hos covid-19-infekterade patienter bättre än vaccin: en innovativ behandling (Antibodies)

Detta är en fas 2, , randomiserad (1:1:1), placebokontrollerad, 2-veckors, proof-of-concept-studie för att utvärdera säkerheten och tolerabiliteten samt den mekanistiska effekten av oral administrering av potenta neutrofilhämmare elastas (inhalerad all transretinoinsyra och inhalerad isotretinoin hos försökspersoner infekterade med COVID-19

Tyvärr genomgår alla vaccinerade apor som behandlats med Oxford-vaccinet, känt som ChAdOx1 nCoV-19, mänskliga försök i Storbritannien. infekterade när de utmanas, bedömt av återvinning av virusgenomiskt RNA från nasala sekret, säger Dr William Haseltine, en tidigare professor vid Harvard Medical School som hade en central roll i utvecklingen av tidiga HIV/Aids-behandlingar. och i allmänhet kommer framtida covid-19-vaccination som är beroende av inaktiverat virusvaccin att begränsas till friska personer med stark immunitet och det kommer inte att ges till patienter med historia av kontakt med en SARS-CoV-2-infektion (positiv i nukleinsyratest) . Förutom covid-19 leder virala antigener till att stimulera antikroppsbildningen av IgM i akut fas och IgG-typ i kronisk fas, vilket underlättar viralt inträde och fusion med infekterade celler genom upptag av virus-IgG-komplexet via Fc-familjen av receptorer och senare viral fusion med antigenpresenterande celler som makrofager, B-celler, monocyter via FcR-familjen och vaskulärt endotel genom den neonatala Fc-receptorn (nFcR) istället för antikroppar inducerad viral agglutination och detta är känt som antikroppsberoende förstärkning (ADE)(2).

Det finns olika hypoteser om hur ADE uppstår och det finns en sannolikhet att mer än en mekanism existerar. I en sådan väg saknar vissa celler i immunsystemet de vanliga receptorerna på sina ytor som viruset använder för att komma in, men de har Fc-receptorer som binder till ena änden av antikroppar. Viruset binder till antigenbindningsstället i andra änden och tar på så sätt in i och infekterar immuncellen. Denguevirus kan använda denna mekanism för att infektera mänskliga makrofager, om det förekom en föregående infektion med en annan stam av viruset, vilket gör att en normalt mild virusinfektion blir livshotande.(3) En pågående fråga i covid-19-pandemin är om och i så fall i vilken utsträckning covid-19 får ADE från tidigare infektion med andra coronavirus.

ADE kan hämma vaccinutveckling: ADE kan hämma vaccinutveckling, eftersom ett vaccin kan orsaka produktion av antikroppar som via ADE förvärrar sjukdomen vaccinet är designat för att skydda mot. Vaccinkandidater för denguevirus och kattinfektiös peritonitvirus (ett kattkoronavirus) var tvungna att stoppas eftersom de framkallade ADE.(4)

ADE vid coronavirusinfektion kan orsakas av hög mutationshastighet av genen som kodar spike (S) protein. En grundlig analys av aminosyravariabilitet i SARS-CoV-2-virusproteiner, som inkluderade S-proteinet, avslöjade att minst konservativa aminosyror finns i de flesta exponerade fragment av S-protein inklusive receptorbindande domän (RBD).(5) Försenat antikroppssvar och utsöndring efter covid -19-symtom är ansvarig för antikroppsberoende förstärkning (ADE)

En studie visar att den första serokonversionsdagen för IgA var 2 dagar efter debut av initiala symtom, och den första serokonversionsdagen för IgM och IgG var 5 dagar efter debut. Den positiva andelen antikroppar i de 183 proverna var 98,9 %, 93,4 % och 95,1 % för IgA, IgM respektive IgG. Serokonverteringsfrekvensen för IgA, IgM eller IgG var 100 % 32 dagar efter symtomdebut. Enligt den kumulativa serokonversionskurvan var medianomvandlingstiden för IgA, IgM och IgG 13, 14 respektive 14 dagar. (6)

Eftersom detta immunsvar tar ett tag att visa sig kommer antikroppstester att vara negativa för de som nyligen infekterats med COVID-19, vilket är anledningen till att de inte används för diagnos.

"Om det är början på infektionen, tar du inte upp det, det är något som utvecklas först senare", Dr Melanie Ott, virolog och immunolog vid Gladstone Institutes och professor vid University of California, San Francisco. (7)

Så huvudutredaren förväntar sig att fördröjt antikroppssvar och försenat byte av immunglobulinklass är huvudorsaken till antikroppars infektivitet och icke-specificitet i den mycket muterade covid-19-infektionen

IgG-antikroppar med hög affinitet kan effektivt lösa Covid-19-infektion

De mer än 100 covid-19-vaccinerna som är under utveckling fokuserar främst på ett annat immunsvar: antikroppar. Dessa proteiner tillverkas av B-celler och fäster helst vid SARS-CoV-2 och förhindrar det från att komma in i celler. T-celler däremot motverkar infektioner på två olika sätt. Hjälpar-T-celler sporrar B-celler och andra immunförsvarare till handling, medan mördar-T-celler riktar in sig på och förstör infekterade celler. Sjukdomens svårighetsgrad kan bero på styrkan hos dessa T-cellssvar(1).

Studier av humorala svar på infektioner har huvudsakligen varit inriktade på produktion av högaffinitets-IgG-antikroppar som effektivt löser en infektion. Det har dock varit väl känt att humoralt immunsvar på infektion kan vara ett tveeggat svärd som antingen fungerar som en skyddande mekanism för att lösa infektionen eller förvärrar vävnadsskadan, t.ex. IgG-svar orsakar dödlig akut lungskada genom att snedvrida inflammationslösande svar vid SARS.(8)

När det gäller luftvägsinfektion, medan IgM- och IgG-isotyper har varit den primära tonvikten för att karakterisera immunitet, har mukosala och systemiska IgA-svar som kan spela en avgörande roll i sjukdomspatogenesen fått mycket mindre uppmärksamhet.(9),(11).

Höga neutrofiler vid covid-19-infektion kan vara orsaken till försenat antikroppssvar och allvarliga komplikationer

Humoralt immunsvar, särskilt produktion av neutraliserande antikroppar, spelar en skyddande roll genom att begränsa infektion i senare skede och förhindrar återinfektion i framtiden. I SARS-CoV kartlades både T- och B-cellsepitoper utförligt för de strukturella proteinerna S-, N-, M- och E-protein.(12) En begränsad serologisk information om SARS-CoV-2 rapporterades. I en preliminär studie visade en patient toppspecifik IgM dag 9 efter sjukdomsdebut och bytet till IgG vecka 2.25. Intressant nog visar sera från 5 patienter med bekräftad covid-19 viss korsreaktivitet med SARS-CoV, men inte annat coronavirus . Dessutom kunde alla sera från patienter neutralisera SARS-CoV-2 i en plackanalys in vitro, vilket tyder på en möjlig framgångsrik montering av de humorala svaren.(13) Huruvida kinetiken/titern för specifik antikropp korrelerar med sjukdomens svårighetsgrad återstår att undersöka.(14)

I allvarliga fall av coronavirus sjukdom 2019 (COVID-19) utvecklas viral lunginflammation till andningssvikt. Neutrofila extracellulära fällor (NET) är extracellulära vävar av kromatin, mikrobicida proteiner och oxiderande enzymer som frisätts av neutrofiler för att innehålla infektioner. Men när de inte är korrekt reglerade har NET potential att sprida inflammation och mikrovaskulär trombos - inklusive i lungorna hos patienter med akut andnödsyndrom. Medan förhöjda nivåer av blodneutrofiler förutsäger sämre utfall i COVID-19, har NETs roll inte undersökts. Vi rapporterar nu att sera från patienter med COVID-19 (n = 50 patienter, n = 84 prover) har förhöjda nivåer av cellfritt DNA, myeloperoxidas(MPO)-DNA och citrullinerad histon H3 (Cit-H3); de två sistnämnda är mycket specifika markörer för NET.(15)

Neutrofiler är sofistikerade celler som kan anpassa sig till förändrad inflammation

Neutrofiler är inte enkla påsar med enzymer som skickas för att döda patogener innan de adaptiva immuncellerna flyttar in. Faktum är att de kan svara på förändrad inflammatorisk status; neutrofiler kan producera cytokiner, förändra deras genuttryck under inflammation och under "åldrande" och överleva betydligt längre än vad man traditionellt tror, ​​med en studie som placerar livslängden från benmärgen till 5,4 dagar. Som en konsekvens kan neutrofiler anpassa sig till förändrade förhållanden och styra andra cellers beteende - en uppgift som de kan utföra med en viss sofistikering.

Det finns ett antal murina modeller där T-cellssvaren kan förvärras genom att utarma neutrofiler, vilket antyder att de har en reglerande roll. Detta undertryckande av T-cellssvar av neutrofiler kräver nära kontakt och utveckling av en immunologisk synaps - kanske eftersom mediatorerna trodde var ansvariga, diffunderar inte reaktiva syrearter och H2O2 långt. Upptag av apoptotiska eller nekrotiska neutrofiler hämmar också DC-antigenpresentation och samstimulering, vilket resulterar i minskade T-cellssvar - en situation som kan utnyttjas av patogener. Till exempel fångar neutrofiler L. major och uppslukas därefter av DC, vilket undertrycker antigenpresentation och T-cellspriming

NE visades också hämma mognad och funktion av dendritiska celler, inklusive uttryck av de samstimulerande molekylerna CD40, CD80 och CD86 Inflammatoriska lungsekret hämmar dendritiska cellmognad och funktion via neutrofil elastas.(16)

Hämmare av elastas vid covid-19-infektion:

1. Alvelestat utvecklades som behandling för lungsjukdomar som kronisk obstruktiv lungsjukdom. Alevelestat verkar genom att blockera vissa proteiner i kroppen som är ansvariga för inflammation och skador på lungorna som kan leda till KOL-symtom.

   Alvelestat-hämmare av elastas stimulerar murin B-lymfocytdifferentiering till IgG- och IgA-producerande celler via immunglobulinklassbyte och inducering, även känd som isotypbyte, isotypisk kommutation eller klassväxlingsrekombination (CSR), är en biologisk mekanism som förändrar en B-cells produktion av immunglobulin från en typ till en annan, såsom från isotypen IgM till isotypen IgG

   En studie visade att utarmning av neutrofiler förbättrar produktionen av mukosal IgA och IgG efter sublingual immunisering med Bacillus anthracis ödemtoxin som adjuvans. Dessa tidigare studier visade också att en omvänd korrelation existerar mellan antalet neutrofiler och produktion av IgA av B-celler. Med hjälp av specifika inhibitorer av elastas, tog vi upp huruvida elastasaktiviteten hos neutrofil kan vara den faktor som stör produktionen av IgA och möjligen andra immunglobulinisotyper. Vi fann att murina splenocyter och mesenteriska lymfkörtelceller odlade i 5 dagar i närvaro av neutrofila elastashämmare utsöndrade högre nivåer av IgG och IgA än celler odlade i frånvaro av inhibitorer och även denna behandling ökade dock frekvensen av CD4+ T-celler .(17) Som ett slemhinneinriktat virus skulle SARS-CoV-2 förväntas generera sekretoriskt IgA (sIgA) och inducera stark mukosal immunitet. Den antivirala slemhinneimmuniteten har faktiskt visat sig vara delvis ett resultat av IgA-medierade interaktioner med de patogena mikroorganismerna för att förhindra patogener från att fästa vid cellytan.(17) Uppreglerad IgA-produktion kan vara resultatet av ökade nivåer av TGF-β och IL-10 som främjar antikroppsbyte vid SARS-CoV-2-infektion.(17) En studie rapporterade att utarmning av neutrofiler före systemisk injektion av vaccin ökade omfattningen av antigenspecifika CD4+ T-cellssvar och nivåerna av antigenspecifika serum IgG-svar.(18)

   Alvelestat och Sivelestat visade sig stimulera AID-mRNA-syntes. NE-hämmarna inducerade också uttryck av BAFF, APRIL och IL-10 mRNA på ett dosberoende sätt. Neutrofil elastas och de relaterade serinproteaserna cathepsin G och proteinas 3, visades reglera cytokinsvar genom aktivering eller nedbrytning av cytokiner, cytokinreceptorer eller tollliknande receptorer.(18) Detta överensstämmer med vår upptäckt att NE-hämmare stimulerar IL-10-uttryck, men även BAFF och APRIL i kulturer av splenocyter. IL-10 rapporterades reglera uttryck av AID för induktion av Ig CSR. (19) och det är väletablerat att IL-10 underlättar Ig-klassbyte för produktion av IgA (20). Således tyder dessa data på att NE-hämmare stimulerar antikroppsproduktion genom stimulering av AID och hämning av aktiveringen/nedbrytningen av cytokiner och cytokinreceptorer genom elastas. NE visades också hämma mognad och funktion av dendritiska celler, inklusive uttryck av de samstimulerande molekylerna CD40, CD80 och CD86.(21). Således kan närvaron av neutrofilinhibitorer ha främjat mognaden av dendritiska celler och deras uttryck av BAFF och APRIL och kanske samstimulerande molekyler (dvs CD40) för ökad antikroppsproduktion. Även om Alvelestat och Sivelestat är specifika NE-hämmare, bör man tänka på att de också kan hämma relaterade elastasliknande enzymer. I detta avseende rapporterades aktiverade humana B-celler uttrycka ett trypsinliknande serinproteas på cellytan.(22) Avslutande kommentarer Det har tidigare visat sig att neutrofila peptiddefensiner förstärker IgG, men inte IgA-svar mot nasalt samtidigt administrerade vaccinantigener.(23) Här har studien visat att serinproteasaktiviteten hos neutrofilelastas, och möjligen andra serinproteaser såsom B-cellselastas, också deltar i regleringen av B-cellsbiologi och adaptiv immunitet. Men till skillnad från neutrofila peptiddefensiner, reglerar NE negativt differentiering av B-lymfocyter till IgG- och IgA-utsöndrande celler. Närvaron av AID förbättrar generellt antikroppsbaserad immunitet.(24).

   Höga neutrofiler hos COVID-19-infekterade patienter kan orsaka allvarlig skada på lungvävnaden genom att frisätta toxiska proteaser och reaktiva syrearter om de inte motverkas av antiproteaserna.

2. All-trans retinsyra (RA) har gynnsamma effekter när den används vid en mängd olika inflammatoriska hudtillstånd. I en studie fann författarna att RA hämmade superoxidanjonproduktion och proteolytiska enzymfrisättning av neutrofiler från människa och råtta. Samtidigt fann författarna att RA-behandlade neutrofiler var mindre i stånd än obehandlade neutrofiler att skada endotelceller i kultur även om adhesionen av de RA-behandlade neutrofilerna till endotelcellsmonoskikt inte minskade. Inhibering av cytotoxicitet inträffade inom samma intervall av koncentrationer som hämmade syreradikalbildning och proteasfrisättning. I ytterligare studier observerades att förbehandling av endotelceller med RA-inducerad resistens mot efterföljande skada av aktiverade neutrofiler. Slutligen visade in vivo-studier att förbehandling av råttor under 3 dagar med RA (1-10 mg/dag, IP) minskade graden av skada i lungorna och hudställena efter behandling med bovint serumalbumin och antikroppar mot bovint serumalbumin i omvänd-passiv Arthus reaktion. Således kan RA modulera neutrofilmedierad endotelcellskada genom en effekt på både neutrofilerna och deras målceller. Tillsammans kan dessa effekter ligga till grund för minskningen av immunkomplexmedierad skada som ses hos försöksdjur. De gynnsamma effekterna som retinoider har i en mängd olika inflammatoriska hudsjukdomar kan likaså vara en återspegling av deras effekter på fysiologin hos både neutrofiler och endotelceller.

Oral retinylpalmitat eller retinsyra korrigerar slemhinne-IgA-svar mot ett intranasalt influensavirusvaccin i möss med brist på vitamin a. Retinoider hämmar inflammatoriska TH17 T-cellssvar, främjar regulatoriska T-cellssvar (Treg) och reglerar uttrycket av tollliknande receptorer (TLR).(57)

Så huvudutredaren förväntar sig att retinsyra kommer att vara effektivare i covid -19 patienter bättre än den andra neutrofila elastashämmaren som Alvelestat eftersom Attia et al (2018) visade att Sivelestat minskade utsöndringen av IgM på ett dosberoende sätt, IgM-typ av antikroppar som är mycket viktiga vid viral neutralisering och å andra sidan stoppar retinsyra neutrofilförmedlad endotelcellskada genom en effekt på både neutrofilerna och deras målceller.

Sekonat läkemedel är Isotretinoin(13cis RA) och ATRA kan kanske hämma COVID 2019-infektion genom att inducera den antivirala immuniteten och detta diskuteras enligt följande:

En studie visade att 13 cis retinoic används för att behandla emfysem (emfysem är ett lungtillstånd som orsakar andnöd), eftersom ett effektivt immunsvar mot virusinfektioner beror på aktiveringen av cytotoxiska T-celler som kan rensa infektion genom att döda virusinfekterade celler, att öka antalet och funktionen hos T-celler hos COVID-19-patienter är avgörande för framgångsrik återhämtning. En nyligen genomförd studie rapporterade att 82,1 % av fallen av covid-19 visade lågt antal cirkulerande lymfocyter. En CoV infekterar makrofager, och sedan presenterar makrofager CoV-antigener för T-celler. Denna process leder till T-cellsaktivering och differentiering, inklusive produktion av cytokiner associerade med de olika T-cellssubseten (Th17), följt av en massiv frisättning av cytokiner för immunsvarsamplifiering. Den fortsatta produktionen av dessa mediatorer på grund av viral persistens har en negativ effekt på NK och CD8 T-cellsaktivering.(25)

Ny studie av 522 covid-patienter och 40 friska kontroller från två sjukhus i Wuhan, Kina visade att antalet T-celler är negativt korrelerade till koncentrationen av IL-6, IL-10 och TNF-α i serum, med patienter i nedgångsperiod som visade minskad IL-6 koncentrationer av IL-10 och TNF-a och återställda T-cellantal. T-celler från COVID-19-patienter har betydligt högre nivåer av det utmattade markörprogrammerade celldödsproteinet (PD-1) jämfört med hälsokontroller. Dessutom kunde ökande PD-1- och Tim-3-uttryck på T-celler ses när patienter gick från prodromala till öppet symtomatiska stadier, vilket ytterligare tyder på utmattning av T-celler. T-cellsutmattning är en progressiv förlust av effektorfunktion på grund av långvarig antigenstimulering, karakteristisk för kroniska infektioner. Dendritisk cellhämning är kopplad till utmattning av CD8+ T-cells polyfunktionalitet under kronisk hepatit C-virusinfektion. CD8 T-celler producerar mycket effektiva mediatorer för att rensa nCoV2019.(26)

Dendritiska celler (DC) spelar en nyckelroll i medfödda immunförsvar och adaptiva immunsvar. Som de starkaste antigenpresenterande cellerna i organismen stimulerar de effektivt aktiveringen av T-lymfocyter och B-lymfocyter, och kombinerar därmed medfödd och adaptiv immunitet. Omogna DC:er har stark migreringsförmåga, och mogna DC:er kan effektivt aktivera T-celler i den centrala länken för start, reglering och underhåll av immunsvar. Så snart mognadsprocessen för DCs är blockerad, påverkar det direkt initieringen av efterföljande adaptivt immunsvar. MERS-CoV-2 kan påverka mänskliga dendritiska celler och makrofager in vitro. Produktiv replikation av koronaviruset i Mellanöstern respiratoriskt syndrom i monocythärledda dendritiska celler modulerar medfödd immunsvar.(27)

En annan studie föreslog att C-C kemokinreceptor typ 4 (CCR4) bidrar till målsökning av T-cellslungor. Det visade sig att lung-DC inducerar uttrycket av CCR4 på T-celler. Lung DCs-aktiverade T-celler trafikerar mer effektivt in i lungan och skyddar mot influensa mer effektivt jämfört med T-celler som aktiveras av DC från andra vävnader. Lim och kollegor föreslog att CXCR4 spelar en roll i CD8+ T-cellmigrering till luftvägsvävnader.(28)

Dendritisk cellhämning är kopplad till utmattning av CD8+ T-cells polyfunktionalitet under kronisk hepatit C-virusinfektion. CD8 T-celler producerar mycket effektiva mediatorer för att rensa nCoV2019.(29)

Förekomst av RA i olika vävnader är mycket viktigt för immuninduktion och bekämpning av virusinfektioner, till exempel är RA närvarande i höga koncentrationer i tunntarmen på grund av metabolisering av vitamin A i kosten av tarmepitelceller. I denna lokala miljö aktiverar och primerar RA dendritiska celler (DCs) för att bli CD103+ DCs som producerar RA.3, 4CD103+ DCs är migrerande celler som aktiverar naiva T-celler i mesenteriska lymfkörtlar för att bli effektor-T-celler som bidrar till både intestinal homeostas och immunitet.och även RA är en viktig signal som inducerar IgA-producerande B-celler. De tarmsökande T-cellerna och B-cellerna spelar viktiga roller för att skydda matsmältningskanalen från patogener.(30) Retinsyra (atRA) kan hämma den spontana apoptosen av aktiverade humana T-lymfocyter in vitro. 13-cis RA aktiverar Th2-cytokinproduktion. Förbättrat antal dendritiska celler i cirkulation.(40)

Så, enligt dessa tidigare studier, föreslår huvudutredaren att lymfopeni och utmattning av T-celler kan orsakas av dendritiska celler (DCs) infektion och hämning av MERS-CoV-2.

Retinsyra har djupgående effekter på cellulär proliferation och differentiering. Dessutom har det rapporterats att ATRA uppvisar både antiinflammatoriska och immunreglerande effekter. Nyligen genomförda studier har visat att FOXP3-uttryck och immunfunktionen hos Regulatory T-celler (Tregs ) kan förstärkas av ATRA i immunsystemet hos både patienter och mic.13Retinsyra (RA) produceras av ett antal celltyper, inklusive makrofager och dendritiska celler, som uttrycker retinala dehydrogenaser som omvandlar vitamin A till dess huvudsakliga biologiskt aktiva metabolit, all-trans RA. All-trans RA binder till sina nukleära retinsyrareceptorer som uttrycks i lymfoida celler och fungerar som transkriptionsfaktorer för att reglera cellernas målsökning och differentiering. RA-produktion av CD103+ dendritiska celler och alveolära makrofager fungerar med TGF-b för att främja omvandling av naiva T-celler till Foxp3+ regulatoriska T-celler och därigenom bibehålla slemhinnetolerans.(50) Så huvudforskaren förväntar sig hög inducering av dendritiska celler (DC) genom behandling med retinsyra, vilket kommer att leda till T-cellers aktivering och migration med mindre utmattningsfenomen.

Forskare från Wenzhou, Kina tittade på kliniska laboratoriefunktioner inklusive lipidnivåer hos patienter med COVID 19. De fann dramatiska minskningar av kolesterolnivåerna hos patienter infekterade med covid 19, jämfört med friska kontroller. Studien ger data som tyder på att kolesterolnivåerna sjunker ganska snabbt under de tidiga stadierna av infektionen och ökar när patienten börjar återhämta sig. Därför, vilket indikerar att kolesterol kan ha en viktig roll att spela för att försvara kroppen mot sådana infektioner. Enligt vårt protokoll beroende på tidigare studier visade huvudutredaren att det finns ett starkt samband mellan immunförsvar och kolesterolnivåer. :-

Cellulärt kolesterol är en komponent i plasmamembranet och är också väsentligt för cellproliferation. Reglering av intracellulära kolesterolnivåer har föreslagits som en mekanism för att reglera proliferation av T-celler och makrofager. Intracellulär kolesterolnivå regleras av två konkurrerande vägar, kolesterolupptag och utflöde, och ABCA1 spelar en stor roll i kolesterolutflödet. ATRA inducerar ABCA1-expression och ABCA1-beroende kolesterolutflöde i aktiverade primära humana CD4+ T-celler, vilket antyder att RA kan påverka T-cellsfunktioner genom att reglera cellkolesterolnivåerna.(51) ATRA uppreglerar ABCA1-uttryck endast i aktiverade CD4+ T-celler, vilket indikerar att induktion av ABCA1 av ATRA och 13 cis-retinsyra kan spela en viktig roll i immunsvaret.

Retinsyra och lever X-receptoragonist hämmar synergistiskt HIV-infektion i CD4+ T-celler genom att uppreglera ABCA1-medierat kolesterolutflöde.(52)(53)

RA verkar också direkt på makrofager vid både slemhinneställen och andra immunologiska ställen. AtRA modulerar peritoneal makrofagaktivering av endotoxin och IFN-y genom att undertrycka TNF-produktion och kväveoxid (NO) syntes. Dessutom hämmar RA uttrycket av PGE2 och COX-2 och frisättningen av TNF, som induceras av bakteriell lipopolysackarid ( LPS) i murina peritoneala makrofager .(54)

En studie rapporterade nyligen att substans (ATRA) har förebyggande effekter på lungfibros genom att hämma IL-6-beroende proliferation och TGF-β1-beroende transdifferentiering av lungfibroblaster. Andra studier visade också att 13-cis-retinsyra och andra retinoidanaloger hämmar IL-1-inducerad IL-6-produktion och att denna effekt är analogspecifik och, åtminstone delvis, transkriptionellt medierad. Denna effekt var dosberoende med en IC50 på 10(-7) M RA och signifikant hämning noterades med doser av RA så låga som 10(-8) M. IL-10-produktionen hämmades av ATRA-administrering.(55)

En studie visade att TLR3(-/-), TLR4(-/-) och TRAM(-/-) möss är mer mottagliga för SARS-CoV än vildtypsmöss men upplever endast övergående viktminskning utan dödlighet som svar på infektion. Däremot är möss som saknar TLR3/TLR4-adaptern TRIF mycket mottagliga för SARS-CoV-infektion, vilket visar ökad viktminskning, dödlighet, minskad lungfunktion, ökad lungpatologi och högre virala titrar. Nya studier visade att den höga nivån av IFN-α/β producerad från TLR3-IRF3/IRF7-vägen och IFN-β är anledningen till att hämma DENV-replikation. 13Cis retinsyra inducerade signifikant uppreglering av toll-like receptor 3 (TLR3) vilket resulterar i ett immunsvar mot dsRNA-intermediär som delvis kan genereras under CoV-2-replikation. aktiverad för att producera typ I IFN.(56)

.

Oral retinylpalmitat eller retinsyra korrigerar slemhinne-IgA-svar mot ett intranasalt influensavirusvaccin i möss med brist på vitamin a. Retinoider hämmar inflammatoriska TH17 T-cellssvar, främjar regulatoriska T-cellssvar (Treg) och reglerar uttrycket av tollliknande receptorer (TLR).(57) In vitro-behandling av normala humana monocyter med all-trans-retinsyra (ATRA) nedreglerar TLR-2-uttryck (58), men denna effekt har inte undersökts hos patienter som behandlats med systemiska retinoider. Isotretinoin (13-cis retinsyra; 13-cis RA) är det enda läkemedlet som kan inducera en långvarig eller permanent remission av akne; mekanismerna som leder till detta varaktiga svar är dock okända. Med tanke på rollen av TLR-2 för att initiera immunsvar mot P. acnes, antog vi att nedreglering av TLR-2 på monocyter och/eller induktion av Treg-svar in vivo kan representera mekanismer genom vilka isotretinoin utövar sina långsiktiga effekter .

Isotretinoin(13cis RA) kan kanske hämma inträde i COVID 2019 via nedreglering av ACE2, AT1-protein och Ang II-medierad intracellulär kalciumfrisättning snarare än hämning av interleukin-6 (IL-6) och detta diskuteras enligt följande:

Många författare missförstår skillnaden mellan ARB, som blockerar ATR1-receptorer och det hypotetiska läkemedlet som kan blockera covid-19-bindningsstället på ACE2-receptorn, som är helt annorlunda än ATR1 och 2.

Covid-19-pandemin orsakad av SARS-COV-2 har infekterat över 2 000 000 människor och orsakat över 150 000 dödsfall.(59) Ett centralt cellulärt värdprotein som krävs för viruset är angiotensinomvandlande enzym 2 (ACE2) vars uttryck har påvisats i många vävnader inklusive alveolära epitelceller av typ II i lungor, munslemhinna och tarm, hjärta, njure, endotel och hud. ACE2-uttryckande celler kan fungera som hemceller och är benägna att få SARS-CoV-2-infektion eftersom ACE2-receptorn underlättar cellulär virusinträde och replikation.(60) En studie visade att patienter med högt blodtryck och diabetes mellitus kan löpa högre risk för SARS-CoV-2-infektion, eftersom dessa patienter ofta behandlas med ACE-hämmare (ACE-hämmare) eller angiotensin II typ-I-receptorblockerare (ARB), som har varit tidigare föreslagit att öka ACE2-uttrycket.(61) I en annan studie av Sinha et al som analyserade en allmänt tillgänglig Connectivity Map (CMAP) dataset av pre/post transkriptomiska profiler för läkemedelsbehandling i cellinjer för över 20 000 små molekyler, var isotretinoin den starkaste nedregulatorn av ACE 2-receptorer. Å andra sidan hittade de 6 läkemedel i CMAP som för närvarande undersöks i kliniska prövningar för behandling av covid-19 (klorokin, talidomid, metylprednisolon, losartan, lopinavir och ritonavir, från clinicaltrials.gov), ingen av dessa visade sig signifikant förändra ACE2-uttryck (P>0,1) Dessutom visade en annan studie att isotretinoin är en potentiell papainliknande proteashämmare (PLpro) som är ett protein som kodas av SARS-CoV-2-gener och anses vara ett av de proteiner som bör riktas mot COVID-19-behandling genom att utföra målbaserad virtuell ligandscreening. Som huvudutredaren diskuterade tidigare är (13cRA) den starkaste nedregulatorn av ACE2.

Huvudutredaren förväntar sig att 13cRA kan hämma eller dämpa ACE2 genom direkt interaktion och bindning med det transmembrana ACE2, vilket tyder på dess terapeutiska potential för att förhindra inträde av COVID 2019 till värdcellen.

Tidigare studier på det relaterade allvarliga akuta respiratoriska syndromet coronavirus (SARS-CoV) och SARS-CoV FP FP har visat att kalcium (Ca2+) spelar en viktig roll för fusogen aktivitet via en Ca2+-bindande ficka med konserverad glutaminsyra (E) och asparaginsyra (D) rester visade att intracellulär Ca2+ förstärker MERS-CoV WT PPs-infektion med ungefär två gånger och att E891 är en avgörande rest för Ca2+interaktion. Elektronspinresonans avslöjade att denna förbättring kan tillskrivas Ca2+ ökande MERS-CoV FP-fusionsrelevant membranordning. Spännande nog visade isotermisk kalorimetrititrering att MERS-CoV FP binder en Ca2+, i motsats till SARS-CoV FP som binder till två Ca2+-joner.(62)

Angiotensin II ökar den intracellulära kalciumaktiviteten i podocyter i den intakta glomerulus. L-typ Ca2+-kanalblockeraren nikardipin påverkade inte den Ang II-medierade [Ca2+]-ökningen och det har postulerats att SARS-CoV-2-bindning till ACE2 kan dämpa kvarvarande ACE2-aktivitet, vilket snedvrider ACE/ACE2-balansen till ett tillstånd av förhöjd angiotensin II-aktivitet som leder till pulmonell vasokonstriktion och inflammatoriska och oxidativa organskador, vilket ökar risken för akut lungskada (ALI). AngII via AT1-receptorer uppreglerar många proinflammatoriska gener, såsom vaskulär celladhesionsmolekyl-1 (VCAM-1), intercellulär adhesionsmolekyl-1 (ICAM-1), interleukin-6 (IL-6).30 men 13cis RA nedreglerade specifikt AT1-proteinet på ett dos- och tidsberoende sätt. Nedreglering av AT1-uttrycket leder till minskad AngII-medierad intracellulär kalciumfrisättning På samma sätt med receptornedreglering resulterade behandling med 13cRA i en signifikant minskning av AT1-mRNA.(63)

Slutligen förväntar sig huvudutredaren att Isotretinoin kommer att hjälpa till att inducera antikroppar mot COVID-19 genom att inducera olika typer av antivirala immunfaktorer och även minska covid-19 hypermutation genom att blockera dess ACE2-receptorer och förhindra viruset från cellinträde och replikering och detta kommer att ge immunsystemet tid att känna igen COVID-19.