Aerosolová kombinovaná terapie all-trans retinovou kyselinou a isotretinoinem jako nová léčba pro indukci neutralizačních protilátek u pacientů infikovaných COVID-19 lepší než vakcína: inovativní léčba (Antibodies)

Jedná se o fázi 2, randomizovanou (1:1:1), placebem kontrolovanou, 2týdenní studii prokazující koncepci, která má vyhodnotit bezpečnost a snášenlivost a také mechanistický účinek perorálního podávání silného inhibitoru neutrofilů elastáza (inhalovaná kyselina all trans retinová a inhalovaný isotretinoin u subjektů infikovaných COVID-19

Bohužel všechny očkované opice léčené Oxfordskou vakcínou známou jako ChAdOx1 nCoV-19 podstupují v Británii testy na lidech. infikován při napadení, jak bylo posouzeno na základě získání virové genomické RNA z nosních sekretů,“ řekl Dr. William Haseltine, bývalý profesor Harvardské lékařské fakulty, který měl klíčovou roli ve vývoji rané léčby HIV/AIDS. a obecně budoucí očkování proti COVID-19, které závisí na inaktivované virové vakcíně, bude omezeno na zdravé lidi se silnou imunitou a nebude podáváno pacientům s anamnézou kontaktu s infekcí SARS-CoV-2 (pozitivní v testu nukleových kyselin) . Kromě toho, že virové antigeny COVID-19 vedou ke stimulaci tvorby protilátek IgM v akutní fázi a typu IgG v chronické fázi, což usnadňuje vstup viru a fúzi s infikovanou buňkou prostřednictvím vychytávání komplexu virus-IgG prostřednictvím Fc rodiny receptorů a pozdější virová fúze s buňkami prezentujícími antigen, jako jsou makrofágy, B buňky, monocyty prostřednictvím rodiny FcR a vaskulární endotel prostřednictvím neonatálního Fc receptoru (nFcR) namísto protilátkami indukované virové aglutinace a toto je známé jako zesílení závislé na protilátkách (ADE) (2).

Existují různé hypotézy o tom, jak k ADE dochází, a existuje pravděpodobnost, že existuje více než jeden mechanismus. V jedné takové dráze některé buňky imunitního systému postrádají na svém povrchu obvyklé receptory, které virus používá ke vstupu, ale mají Fc receptory, které se vážou na jeden konec protilátek. Virus se váže na vazebné místo pro antigen na druhém konci a tímto způsobem proniká do imunitní buňky a infikuje ji. Virus dengue může použít tento mechanismus k infekci lidských makrofágů, pokud předtím došlo k infekci jiným kmenem viru, což způsobí, že se normálně mírná virová infekce stane život ohrožující.(3) Přetrvávající otázkou v pandemii COVID-19 je, zda – a pokud ano, do jaké míry – COVID-19 dostává ADE z předchozí infekce jinými koronaviry.

ADE může brzdit vývoj vakcíny: ADE může brzdit vývoj vakcíny, protože vakcína může způsobit produkci protilátek, které prostřednictvím ADE zhoršují onemocnění, proti kterému je vakcína navržena. Kandidáti vakcíny na virus dengue a virus kočičí infekční peritonitidy (koronavirus koček) museli být zastaveni, protože vyvolávali ADE.(4)

ADE u koronavirové infekce může být způsobena vysokou mírou mutací genu, který kóduje spike (S) protein. Důkladná analýza variability aminokyselin v proteinech viru SARS-CoV-2, které zahrnovaly S-protein, odhalila, že nejméně konzervativní aminokyseliny jsou ve většině exponovaných fragmentů S-proteinu včetně receptor vazebné domény (RBD).(5) Zpožděná protilátková odpověď a sekrece po nástupu symptomů covid-19 je zodpovědná za zesílení závislé na protilátkách (ADE)

Studie ukazuje, že první den sérokonverze IgA byl 2 dny po nástupu počátečních příznaků a první den sérokonverze IgM a IgG byl 5 dní po nástupu. Pozitivní míra protilátek ve 183 vzorcích byla 98,9 %, 93,4 % a 95,1 % pro IgA, IgM a IgG. Míra sérokonverze pro IgA, IgM nebo IgG byla 100 % 32 dní po nástupu příznaků. Podle kumulativní sérokonverzní křivky byl medián doby konverze pro IgA, IgM a IgG 13, 14 a 14 dní, v daném pořadí. (6)

Protože tato imunitní odpověď chvíli trvá, než se projeví, testy na protilátky budou u nově infikovaných COVID-19 negativní, a proto se nepoužívají k diagnostice.

"Pokud je to začátek infekce, nezvednete ji, je to něco, co se rozvine až později," doktorka Melanie Ottová, viroložka a imunoložka z Gladstone Institutes a profesorka Kalifornské univerzity v San Franciscu. (7)

Hlavní výzkumník tedy očekává, že opožděná protilátková odpověď a opožděné přepínání tříd imunoglobulinů jsou hlavním důvodem infekčnosti a nespecifity protilátek u vysoce mutované infekce covid-19.

Vysoce afinitní IgG protilátky mohou účinně vyřešit infekci Covid-19

Více než 100 vyvíjených vakcín proti COVID-19 se zaměřuje především na jinou imunitní odpověď: protilátky. Tyto proteiny jsou tvořeny B buňkami a v ideálním případě se zachycují na SARS-CoV-2 a zabraňují mu vstoupit do buněk. Naproti tomu T buňky maří infekce dvěma různými způsoby. Pomocné T buňky podněcují k akci B buňky a další imunitní obránce, zatímco zabijácké T buňky zaměřují a ničí infikované buňky. Závažnost onemocnění může záviset na síle těchto odpovědí T buněk (1).

Studie humorálních odpovědí na infekce byly zaměřeny hlavně na produkci vysoce afinitních IgG protilátek, které účinně řeší infekci. Bylo však dobře známo, že humorální imunitní odpověď na infekci může být dvousečná zbraň, která buď slouží jako ochranný mechanismus k vyřešení infekce, nebo zhoršuje poškození tkáně, např. IgG odpověď způsobuje fatální akutní poškození plic tím, že u SARS vychýlí odpověď řešící zánět.(8)

V případě respirační infekce, zatímco izotypy IgM a IgG byly primárním důrazem při charakterizaci imunity, slizniční a systémové IgA odpovědi, které mohou hrát kritickou roli v patogenezi onemocnění, se dostalo mnohem menší pozornosti.(9),(11).

Vysoký počet neutrofilů u infekce covid-19 může být příčinou opožděné protilátkové odpovědi a závažných komplikací

Humorální imunitní odpověď, zejména produkce neutralizačních protilátek, hraje ochrannou roli tím, že omezuje infekci v pozdější fázi a zabraňuje reinfekci v budoucnu. U SARS-CoV byly jak T, tak B buněčné epitopy rozsáhle mapovány pro strukturální proteiny, S, N, M a E protein.(12) Byly hlášeny omezené sérologické podrobnosti SARS-CoV-2. V předběžné studii jeden pacient vykazoval maximální specifické IgM v den 9 po nástupu onemocnění a přechod na IgG do týdne 2.25 Je zajímavé, že séra od 5 pacientů s potvrzeným COVID-19 vykazují určitou zkříženou reaktivitu se SARS-CoV, ale ne s jiným koronavirem . Navíc všechna séra od pacientů byla schopna neutralizovat SARS-CoV-2 v in vitro plakovém testu, což naznačuje možné úspěšné zvýšení humorálních odpovědí.(13) Zda kinetika/titr specifické protilátky koreluje se závažností onemocnění, je třeba ještě prozkoumat.(14)

V závažných případech koronavirového onemocnění 2019 (COVID-19) virová pneumonie progreduje do respiračního selhání. Neutrofilní extracelulární pasti (NET) jsou extracelulární sítě chromatinu, mikrobicidních proteinů a oxidačních enzymů, které jsou uvolňovány neutrofily, aby zadržely infekce. Pokud však nejsou správně regulovány, mají NET potenciál šířit zánět a mikrovaskulární trombózu – včetně plic u pacientů se syndromem akutní respirační tísně. Zatímco zvýšené hladiny krevních neutrofilů předpovídají horší výsledky u COVID-19, role NET nebyla zkoumána. Nyní uvádíme, že séra od pacientů s COVID-19 (n = 50 pacientů, n = 84 vzorků) mají zvýšené hladiny bezbuněčné DNA, myeloperoxidázy (MPO)-DNA a citrulinovaného histonu H3 (Cit-H3); poslední dva jsou vysoce specifické markery NET.(15)

Neutrofily jsou sofistikované buňky schopné přizpůsobit se měnícímu se zánětu

Neutrofily nejsou jednoduché vaky enzymů, které se posílají zabíjet patogeny předtím, než se do nich nastěhují buňky adaptivní imunity. Ve skutečnosti jsou schopni reagovat na změněný zánětlivý stav; neutrofily mohou produkovat cytokiny, měnit svou genovou expresi během zánětu a během „stárnutí“ a přežít podstatně déle, než se tradičně myslelo, přičemž jedna studie uvádí délku života z kostní dřeně na 5,4 dne. V důsledku toho jsou neutrofily schopny se přizpůsobit měnícím se podmínkám a řídit chování jiných buněk – což je úkol, který mohou vykonávat s určitou sofistikovaností.

Existuje řada myších modelů, ve kterých mohou být reakce T buněk exacerbovány vyčerpáním neutrofilů, což znamená, že mají regulační úlohu. Toto potlačení odpovědí T lymfocytů neutrofily vyžaduje úzký kontakt a vývoj imunologické synapse - možná jako odpovědné mediátory, reaktivní formy kyslíku a H2O2 nedifundují daleko. Absorpce apoptotických nebo nekrotických neutrofilů také inhibuje prezentaci a kostimulaci DC antigenu, což vede ke snížení odpovědí T buněk - situace, kterou mohou patogeny využít. Například neutrofily zachycují L. major a jsou následně pohlceny DC, což potlačuje prezentaci antigenu a aktivaci T buněk

Bylo také prokázáno, že NE inhibuje zrání a funkci dendritických buněk, včetně exprese kostimulačních molekul CD40, CD80 a CD86. Zánětlivé sekrece plic inhibují zrání a funkci dendritických buněk prostřednictvím elastázy neutrofilů.(16)

Inhibitor elastázy při infekci covid-19:

1. Alvelestat byl vyvinut jako léčba plicních onemocnění, jako je chronická obstrukční plicní nemoc. Alevelestat působí tak, že blokuje určité proteiny v těle, které jsou odpovědné za zánět a poškození plic, které může vést k příznakům CHOPN.

   Alvelestat Inhibitor elastázy stimuluje diferenciaci myších B lymfocytů na buňky produkující IgG a IgA prostřednictvím přepínání tříd imunoglobulinů a indukce známé také jako přepínání izotypů, isotypová komutace nebo rekombinace přepínání tříd (CSR), je biologický mechanismus, který mění produkci B lymfocytů imunoglobulinu z jednoho typu na druhý, jako je od izotypu IgM k izotypu IgG

   Studie prokázala, že deplece neutrofilů zlepšuje produkci slizničních IgA a IgG po sublingvální imunizaci edémovým toxinem Bacillus anthracis jako adjuvans. Tyto minulé studie také ukázaly, že existuje inverzní korelace mezi počtem neutrofilů a produkcí IgA B buňkami. Pomocí specifických inhibitorů elastázy jsme se zabývali tím, zda by elastázová aktivita neutrofilů mohla být faktorem, který interferuje s produkcí IgA a případně dalších izotypů imunoglobulinů. Zjistili jsme, že myší splenocyty a buňky mezenterických lymfatických uzlin kultivované po dobu 5 dnů v přítomnosti inhibitorů neutrofilní elastázy vylučovaly vyšší hladiny IgG a IgA než buňky kultivované v nepřítomnosti inhibitorů a také, Tato léčba však zvýšila frekvenci CD4+ T buněk .(17) Jako slizničně cílený virus by SARS-CoV-2 očekávalo, že bude generovat sekreční IgA (sIgA) a indukovat silnou slizniční imunitu. Ukázalo se, že slizniční antivirová imunita je zčásti výsledkem interakcí zprostředkovaných IgA s patogenními mikroorganismy, aby se zabránilo patogenům přilnout na buněčný povrch.(17) Upregulovaná produkce IgA může být důsledkem zvýšených hladin TGF-β a IL-10, které podporují přepínání protilátek při infekci SARS-CoV-2.(17) Studie uvádí, že vyčerpání neutrofilů před systémovou injekcí vakcín zvýšilo rozsah antigenně specifických odpovědí CD4+ T buněk a úrovně antigenně specifických odpovědí IgG v séru.(18).

   Bylo zjištěno, že alvelestat a sivelestat stimulují syntézu mRNA AID. NE inhibitory také indukovaly expresi BAFF, APRIL a IL-10 mRNA způsobem závislým na dávce. Neutrofilní elastáza a související serinové proteázy katepsin G a proteináza 3 regulují cytokinové reakce prostřednictvím aktivace nebo degradace cytokinů, cytokinových receptorů nebo toll-like receptorů.(18) To je v souladu s naším zjištěním, že inhibitory NE stimulují expresi IL-10, ale také BAFF a APRIL v kulturách splenocytů. Bylo popsáno, že IL-10 reguluje expresi AID pro indukci Ig CSR. (19) a je dobře známo, že IL-10 usnadňuje změnu třídy Ig pro produkci IgA (20). Tato data tedy naznačují, že inhibitory NE stimulují produkci protilátek prostřednictvím stimulace AID a inhibice aktivace/degradace cytokinů a cytokinových receptorů elastázou. Bylo také prokázáno, že NE inhibuje zrání a funkci dendritických buněk, včetně exprese kostimulačních molekul CD40, CD80 a CD86.(21). Přítomnost neutrofilních inhibitorů tedy mohla podporovat zrání dendritických buněk a jejich expresi BAFF a APRIL a možná kostimulační molekuly (tj. CD40) pro zvýšenou produkci protilátek. Přestože jsou Alvelestat a Sivelestat specifické NE inhibitory, je třeba vzít v úvahu, že mohou také inhibovat příbuzné enzymy podobné elastáze. V tomto ohledu bylo hlášeno, že aktivované lidské B buňky exprimují serinovou proteázu podobnou trypsinu na buněčném povrchu.(22) Závěrečné poznámky Již dříve bylo prokázáno, že defensiny neutrofilních peptidů zesilují IgG, ale nikoli IgA odpovědi proti nazálně současně podávaným vakcinačním antigenům.(23) Zde studie ukázala, že serinová proteázová aktivita neutrofilní elastázy a možná i jiné serinové proteázy, jako je B buněčná elastáza, se také účastní regulace biologie B buněk a adaptivní imunity. Na rozdíl od defensinů neutrofilních peptidů však NE negativně reguluje diferenciaci B lymfocytů na buňky sekretující IgG a IgA. Přítomnost AID obecně zlepšuje imunitu založenou na protilátkách.(24).

   Vysoké neutrofily u pacientů infikovaných COVID-19 jsou schopny způsobit vážné poškození plicní tkáně uvolňováním toxických proteáz a reaktivních forem kyslíku, pokud nejsou vyváženy antiproteázami.

2. Kyselina all-trans retinová (RA) má příznivé účinky při použití při různých zánětlivých stavech kůže. Ve studii autoři zjistili, že RA inhibovala produkci superoxidových aniontů a uvolňování proteolytických enzymů lidskými a potkaními neutrofily. Současně autoři zjistili, že neutrofily ošetřené RA byly méně schopné než neošetřené neutrofily poškozovat endoteliální buňky v kultuře, i když adheze neutrofilů ošetřených RA k monovrstvám endoteliálních buněk nebyla snížena. Inhibice cytotoxicity nastala ve stejném rozsahu koncentrací, které inhibovaly tvorbu kyslíkových radikálů a uvolňování proteázy. V dalších studiích bylo pozorováno, že předběžné ošetření endoteliálních buněk s RA-indukovanou rezistencí vůči následnému poškození aktivovanými neutrofily. Nakonec studie in vivo ukázaly, že předběžné ošetření potkanů ​​RA (1–10 mg/den, IP) po dobu 3 dnů snížilo stupeň poškození plic a kůže po léčbě hovězím sérovým albuminem a protilátkami proti hovězímu sérovému albuminu v reverzně pasivní Arthusova reakce. RA tedy může modulovat poškození endoteliálních buněk zprostředkované neutrofily účinkem jak na neutrofily, tak na jejich cílové buňky. Společně tyto účinky mohou být základem snížení poškození zprostředkovaného imunitním komplexem pozorovaného u experimentálních zvířat. Příznivé účinky, které mají retinoidy u různých zánětlivých kožních onemocnění, mohou být rovněž odrazem jejich účinků na fyziologii neutrofilů i endoteliálních buněk.

Perorální retinylpalmitát nebo kyselina retinová korigují slizniční IgA reakce na intranazální vakcínu proti viru chřipky u myší s deficitem vitaminu a. Retinoidy inhibují zánětlivé reakce T lymfocytů TH17, podporují reakce regulačních T lymfocytů (Treg) a regulují expresi toll-like receptorů (TLR).(57)

Hlavní výzkumník tedy očekává, že kyselina retinová bude u pacientů s covidem-19 účinná lépe než jiný inhibitor neutrofilové elastázy, jako je Alvelestat, protože Attia et al (2018) prokázali, že Sivelestat snižoval sekreci IgM způsobem závislým na dávce, typ IgM Protilátky, které jsou velmi důležité při neutralizaci virů a na druhé straně kyselina retinová zastavuje poškození endoteliálních buněk zprostředkované neutrofily účinkem jak na neutrofily, tak na jejich cílové buňky.

Druhým lékem je Isotretinoin (13cis RA) a ATRA může být schopen inhibovat infekci COVID 2019 indukcí antivirové imunity, a to je diskutováno následovně:

Studie prokázala, že 13 cis retinoic se používá při léčbě emfyzému (emfyzém je stav plic, který způsobuje dušnost), protože účinná imunitní odpověď proti virovým infekcím závisí na aktivaci cytotoxických T buněk, které mohou odstranit infekci zabitím infikovaných virem Pro úspěšné uzdravení je zásadní zvýšení počtu a funkce T buněk u pacientů s COVID-19. Nedávná studie uvedla, že 82,1 % případů COVID-19 vykazovalo nízký počet cirkulujících lymfocytů. CoV infikuje makrofágy a poté makrofágy prezentují antigeny CoV T buňkám. Tento proces vede k aktivaci a diferenciaci T buněk, včetně produkce cytokinů spojených s různými podskupinami T buněk (Th17), následované masivním uvolňováním cytokinů pro zesílení imunitní odpovědi. Pokračující produkce těchto mediátorů v důsledku virové perzistence má negativní vliv na aktivaci NK a CD8 T buněk.(25)

Nedávná studie na 522 pacientech s COVID a 40 zdravých kontrolách ze dvou nemocnic v čínském Wu-chanu prokázala, že počty T buněk negativně korelují s koncentrací IL-6, IL-10 a TNF-α v séru, přičemž pacienti v období poklesu vykazovali snížený IL-6 koncentrace IL-10 a TNF-a a obnovené počty T buněk. T buňky od pacientů s COVID-19 mají významně vyšší hladiny vyčerpaného markerového proteinu programované buněčné smrti (PD-1) ve srovnání se zdravotními kontrolami. Kromě toho bylo možné pozorovat zvýšení exprese PD-1 a Tim-3 na T buňkách, jak pacienti postupovali z prodromálních do zjevně symptomatických stádií, což dále ukazuje na vyčerpání T buněk. Vyčerpání T buněk je progresivní ztráta efektorové funkce v důsledku prodloužené stimulace antigenem, charakteristická pro chronické infekce. Inhibice dendritických buněk je spojena s vyčerpáním polyfunkčnosti CD8+ T buněk během chronické infekce virem hepatitidy C. CD8 T buňky produkují velmi účinné mediátory k odstranění nCoV2019.(26)

Dendritické buňky (DC) hrají klíčovou roli ve vrozených imunitních a adaptivních imunitních reakcích. Jako nejsilnější antigen prezentující buňky v organismu účinně stimulují aktivaci T lymfocytů a B lymfocytů, čímž kombinují vrozenou a adaptivní imunitu. Nezralé DC mají silnou migrační schopnost a zralé DC mohou účinně aktivovat T buňky v centrálním spojení spouštění, regulace a udržování imunitních odpovědí. Jakmile je tedy proces zrání DC zablokován, přímo ovlivňuje zahájení následné adaptivní imunitní odpovědi. MERS-CoV-2 je schopen ovlivnit lidské dendritické buňky a makrofágy in-vitro. Produktivní replikace koronaviru respiračního syndromu na Středním východě v dendritických buňkách odvozených od monocytů moduluje vrozenou imunitní odpověď.(27)

Jiná studie navrhla, že C-C chemokinový receptor typu 4 (CCR4) přispívá k navádění T buněk do plic. Bylo zjištěno, že plicní DC indukují expresi CCR4 na T buňkách. T buňky aktivované plicními DC se dostávají do plic efektivněji a účinněji chrání před chřipkou ve srovnání s T buňkami aktivovanými DC z jiných tkání. Lim a kolegové navrhli, že CXCR4 hraje roli v migraci CD8+ T buněk do tkání dýchacích cest.(28)

Inhibice dendritických buněk je spojena s vyčerpáním polyfunkčnosti CD8+ T buněk během chronické infekce virem hepatitidy C. CD8 T buňky produkují velmi účinné mediátory k odstranění nCoV2019.(29)

Přítomnost RA v různých tkáních je velmi důležitá pro indukci imunity a boj s virovou infekcí, například RA je přítomna ve vysokých koncentracích v tenkém střevě kvůli metabolizaci vitaminu A v potravě buňkami střevního epitelu. V tomto lokálním prostředí RA aktivuje a připraví dendritické buňky (DC), aby se staly CD103+ DC, které produkují RA.3, 4CD103+ DC jsou migrační buňky, které aktivují naivní T buňky v mezenterických lymfatických uzlinách, aby se staly efektorovými T buňkami, které přispívají jak ke střevní homeostáze, tak i imunita.a také RA je důležitým signálem, který indukuje B buňky produkující IgA. Střevní naváděcí T buňky a B buňky hrají zásadní roli při ochraně trávicího traktu před patogeny.(30) Kyselina retinová (atRA) může inhibovat spontánní apoptózu aktivovaných lidských T lymfocytů in vitro. 13-cis RA aktivuje produkci Th2 cytokinů Zvýšený počet cirkulujících dendritických buněk.(40)

Podle těchto předchozích studií tedy hlavní výzkumník naznačuje, že lymfopenie a vyčerpání T buněk může být způsobeno infekcí dendritickými buňkami (DC) a inhibicí MERS-CoV-2.

Kyselina retinová má hluboké účinky na buněčnou proliferaci a diferenciaci. Navíc bylo hlášeno, že ATRA vykazuje jak protizánětlivé, tak imunoregulační účinky. Nedávné studie ukázaly, že exprese FOXP3 a imunitní funkce regulačních T buněk (Tregs ) může být zvýšena pomocí ATRA v imunitním systému pacientů i mic.13Kyselinu retinovou (RA) produkuje řada typů buněk, včetně makrofágů dendritické buňky, které exprimují retinální dehydrogenázy, které přeměňují vitamín A na jeho hlavní biologicky aktivní metabolit, all-trans RA. All-trans RA se váže na své jaderné receptory kyseliny retinové, které jsou exprimovány v lymfoidních buňkách a působí jako transkripční faktory pro regulaci buněčného navádění a diferenciace. Produkce RA dendritickými buňkami CD103+ a alveolárními makrofágy funguje s TGF-b k podpoře přeměny naivních T buněk na Foxp3+ regulační T buňky, a tím k udržení slizniční tolerance.(50) Hlavní řešitel tedy očekává vysokou indukci dendritických buněk (DC) působením kyseliny retinové, což povede k aktivaci a migraci T buněk s menším fenoménem vyčerpání.

Výzkumníci z Wenzhou v Číně se zabývali klinickými laboratorními vlastnostmi včetně hladin lipidů u pacientů s COVID 19. Zjistili dramatické snížení hladiny cholesterolu u pacientů infikovaných COVID 19 ve srovnání se zdravými kontrolami. Studie poskytuje údaje, které naznačují, že hladiny cholesterolu poměrně rychle klesají během raných fází infekce a zvyšují se, když se pacient začíná zotavovat. To naznačuje, že cholesterol může hrát důležitou roli při obraně těla proti takovým infekcím. Podle našeho protokolu v závislosti na předchozích studiích hlavní výzkumník prokázal, že existuje silný vztah mezi imunitním systémem a hladinami cholesterolu. :-

Buněčný cholesterol je součástí plazmatické membrány a je také nezbytný pro buněčnou proliferaci. Regulace intracelulárních hladin cholesterolu byla navržena jako mechanismus pro regulaci proliferace T buněk a makrofágů. Hladina intracelulárního cholesterolu je regulována dvěma konkurenčními cestami, absorpcí a odtokem cholesterolu, a ABCA1 hraje hlavní roli v dráze odtoku cholesterolu. ATRA indukuje expresi ABCA1 a ABCA1-dependentní eflux cholesterolu v aktivovaných primárních lidských CD4+ T buňkách, což naznačuje, že RA by mohla ovlivnit funkce T buněk regulací hladin buněčného cholesterolu.(51) ATRA upreguluje expresi ABCA1 pouze v aktivovaných CD4+ T buňkách, což naznačuje, že indukce ABCA1 pomocí ATRA a kyseliny 13cis retinové může hrát důležitou roli v imunitní odpovědi.

Kyselina retinová a agonista jaterního X receptoru synergicky inhibují infekci HIV v CD4+ T buňkách up-regulací odtoku cholesterolu zprostředkovaného ABCA1.(52)(53)

RA také působí přímo na makrofágy jak na slizničních místech, tak na jiných imunologických místech. AtRA moduluje aktivaci peritoneálních makrofágů endotoxinem a IFN-γ potlačením produkce TNF a syntézy oxidu dusnatého (NO). Navíc atRA inhibuje expresi PGE2 a COX-2 a uvolňování TNF, které jsou indukovány bakteriálním lipopolysacharidem ( LPS) v myších peritoneálních makrofázích.(54)

Nedávná studie uvádí, že látka (ATRA) má preventivní účinky na plicní fibrózu inhibicí IL-6-dependentní proliferace a TGF-β1-dependentní trans diferenciace plicních fibroblastů. Další studie také prokázaly, že kyselina 13-cis-retinová a další analogy retinoidů inhibují produkci IL-6 indukovanou IL-1 a že tento účinek je analogově specifický a alespoň částečně zprostředkován transkripcí. Tento účinek byl závislý na dávce s IC50 10(-7) M RA a významná inhibice byla zaznamenána při dávkách RA tak nízkých, jako je 10(-8) M. Produkce IL-10 byla inhibována podáváním ATRA.(55).

Studie prokázala, že myši TLR3(-/-), TLR4(-/-) a TRAM(-/-) jsou náchylnější k SARS-CoV než myši divokého typu, ale trpí pouze přechodným úbytkem hmotnosti bez úmrtnosti v reakci na infekce. Naproti tomu myši s deficitem TLR3/TLR4 adaptéru TRIF jsou vysoce citlivé na infekci SARS-CoV, vykazují zvýšenou ztrátu hmotnosti, úmrtnost, sníženou funkci plic, zvýšenou plicní patologii a vyšší titry virů. Nové studie ukázaly, že vysoká hladina IFN-α/β produkovaného z dráhy TLR3-IRF3/IRF7 a IFN-β je důvodem pro inhibici replikace DENV. Kyselina 13Cis retinová indukovala významnou upregulaci Toll-like receptoru 3 (TLR3), což má za následek imunitní odpověď na meziprodukt dsRNA, který může být částečně generován během replikace CoV-2. aktivované k produkci IFN typu I.(56)

.

Perorální retinylpalmitát nebo kyselina retinová korigují slizniční IgA reakce na intranazální vakcínu proti viru chřipky u myší s deficitem vitaminu a. Retinoidy inhibují zánětlivé reakce T lymfocytů TH17, podporují reakce regulačních T lymfocytů (Treg) a regulují expresi toll-like receptorů (TLR).(57) In vitro léčba normálních lidských monocytů kyselinou all-trans retinovou (ATRA) snižuje expresi TLR-2 (58), ale tento účinek nebyl zkoumán u pacientů léčených systémovými retinoidy. Isotretinoin (kyselina 13-cis retinová; 13-cis RA) je jediným lékem schopným navodit dlouhodobou nebo trvalou remisi akné; mechanismy vedoucí k této trvalé reakci však nejsou známy. Vzhledem k úloze TLR-2 při iniciaci imunitních odpovědí na P. acnes jsme předpokládali, že down-regulace TLR-2 na monocytech a/nebo indukce Treg odpovědí in vivo může představovat mechanismy, kterými isotretinoin uplatňuje své dlouhodobé účinky .

Isotretinoin (13cis RA) může být schopen inhibovat vstup COVID 2019 prostřednictvím down-regulace ACE2, proteinu AT1 a uvolňování intracelulárního vápníku zprostředkovaného Ang II spíše než inhibicí interleukinu-6 (IL-6), a to je diskutováno následovně:

Mnoho autorů špatně chápe rozdíl mezi ARB, které blokují receptory ATR1, a předpokládaným lékem, který by mohl blokovat vazebné místo COVID-19 na receptoru ACE2, který je zcela odlišný od ATR1 a 2.

Pandemie COVID-19 způsobená SARS-COV-2 nakazila více než 2 000 000 lidí a způsobila více než 150 000 úmrtí.(59) Klíčovým hostitelským buněčným proteinem potřebným pro vstup viru je angiotensin-konvertující enzym 2 (ACE2), jehož exprese byla prokázána v mnoha tkáních včetně alveolárních epiteliálních buněk typu II v plicích, ústní sliznici a střevě, srdci, ledvinách, endotelu a kůži. Buňky exprimující ACE2 mohou fungovat jako domácí buňky a jsou náchylné k infekci SARS-CoV-2, protože ACE2 receptor usnadňuje buněčný virový vstup a replikaci.(60) Studie prokázala, že pacienti s hypertenzí a diabetes mellitus mohou být vystaveni vyššímu riziku infekce SARS-CoV-2, protože tito pacienti jsou často léčeni ACE inhibitory (ACEI) nebo blokátory receptorů angiotenzinu II typu I (ARB), které byly dříve navrhoval zvýšit expresi ACE2.(61) V další studii Sinha et al, kteří analyzovali veřejně dostupný soubor dat Connectivity Map (CMAP) před/po transkriptomických profilů pro léčbu léků v buněčných liniích pro více než 20 000 malých molekul, byl isotretinoin nejsilnějším down-regulátorem ACE 2 receptorů. Na druhou stranu našli v CMAP 6 léků, které jsou v současné době zkoumány v klinických studiích pro léčbu COVID-19 (chlorochin, thalidomid, methylprednisolon, losartan, lopinavir a ritonavir, z Clinictrials.gov), u žádného z nich nebylo zjištěno, že by významně měnilo expresi ACE2 (P>0,1) Další studie navíc prokázala, že isotretinoin je potenciální inhibitor proteázy podobné papainu (PLpro), což je protein kódovaný geny SARS-CoV-2 a považovaný za jeden z proteinů, na který by se měla zaměřit léčba COVID-19 prováděním virtuálních screening ligandů. Jak již dříve diskutoval hlavní řešitel, (13cRA) je nejsilnější down-regulátor ACE2.

Hlavní výzkumník očekává, že 13cRA může inhibovat nebo dowenrgulat ACE2 přímou interakcí a vazbou s transmembránovým ACE2, což naznačuje jeho terapeutický potenciál při prevenci vstupu COVID 2019 do hostitelské buňky.

Předchozí studie související s koronavirem těžkého akutního respiračního syndromu (SARS-CoV) a SARS-CoV FP FP ukázaly, že vápník (Ca2+) hraje důležitou roli pro fuzogenní aktivitu prostřednictvím vazebné kapsy Ca2+ s konzervovanou kyselinou glutamovou (E) a kyselinou asparagovou. (D) zbytky prokázaly, že intracelulární Ca2+ zvyšuje infekci MERS-CoV WT PPs přibližně dvojnásobně a že E891 je rozhodujícím zbytkem pro interakci Ca2+. Elektronová spinová rezonance odhalila, že toto zlepšení lze připsat Ca2+ zvyšujícímu uspořádání membrány relevantní pro fúzi MERS-CoV FP. Je zajímavé, že izotermická kalorimetrická titrace ukázala, že MERS-CoV FP váže jeden Ca2+, na rozdíl od SARS-CoV FP, který se váže na dva ionty Ca2+.(62)

Angiotensin II zvyšuje aktivitu intracelulárního vápníku v podocytech intaktního glomerulu. Blokátor Ca2+ kanálů nikardipin typu L neovlivnil zvýšení [Ca2+] zprostředkované Ang II a předpokládá se, že vazba SARS-CoV-2 na ACE2 může zeslabit reziduální aktivitu ACE2, čímž se rovnováha ACE/ACE2 vychýlí do stavu zvýšená aktivita angiotenzinu II vedoucí k plicní vazokonstrikci a zánětlivému a oxidativnímu poškození orgánů, což zvyšuje riziko akutního poškození plic (ALI). AngII prostřednictvím AT1 receptorů upreguluje mnoho prozánětlivých genů, jako je vaskulární buněčná adhezní molekula-1 (VCAM-1), intercelulární adhezní molekula-1 (ICAM-1), interleukin-6 (IL-6).30 ale 13cis RA specificky down-regulovala protein AT1 způsobem závislým na dávce a čase. Down-regulace exprese AT1 vede ke sníženému uvolňování intracelulárního vápníku zprostředkovanému AngII Podobně jako u down-regulace receptoru, léčba 13cRA vedla k významnému snížení AT1 mRNA.(63)

A konečně hlavní výzkumník očekává, že isotretinoin pomůže při indukci protilátek proti COVID-19 prostřednictvím indukce různých typů antivirových imunitních faktorů a také snížením hypermutace COVID-19 blokováním jeho ACE2 receptorů a zabráněním vstupu viru do buněk a jejich replikaci. to dá imunitnímu systému čas rozpoznat COVID-19.